1. 癫痫常用的功能定位检查方法有什么
前新的检查方法的不断出现为功能性致痫灶的检出提供了可能。现将常用的功能定位检查方法有以下六种。癫痫活动灶的准确定位可使医生的注意力集中在切除癫痫病灶或阻断癫痫放电的扩散途径上。癫痫外科手术成功的关键是癫痫灶的准确定位。 癫痫常用的功能定位检查方法之一：磁共振成像波谱分析( MRS ) 活体 MRS 利用磁共振技术检测体内含有特定原子核的化学成份的无创性功能影像检查方法，目前多应用是 1 H-MRS 。1 H-MRS 主要应用于颞叶癫痫的诊断，多个研究显示 MRS 对判断癫痫灶的侧有非常高的敏感性。MRS 对于一些双颞叶代谢异常的病人的术后结果的估计有重要意义， MRS 还用于癫痫的发病机理研究 。 癫痫常用的功能定位检查方法之二：单光子发射计算机断层扫描( SPECT ) SPECT 是一种把放射性核素应用于计算机断层扫描的新的诊断技术，主要是反应局部脑组织的血流情况。可以在发作间期或发作期进行检查，发作期常表现为高灌流，可以显示有 90 %的病人癫痫灶区有血流的增加，发作间表现为低灌流，但对于结果的分析较为困难。 癫痫常用的功能定位检查方法之三：脑磁图( MEG ) MEG 是一种对人体完全无接触，无侵袭，无损伤的诊断仪器，目前已广泛应用于手术前的脑功能检测定位，癫痫病灶焦点的定位，生理学上的功能性缺损诊断，神经药理学的调查，脑外伤的诊断，在神经科学和精神医学领域内的应用也日益广泛。其中最直接的临床应用是癫痫灶定位。 MEG 可以准确的癫痫灶定位，并明确病灶与脑重要结构和功能区的关系，对采取正确的手术方案和取得较满意的治疗效果十分重要。利用 MEG 发现原发性癫痫病灶后还能将其焦点位置定位在 MRI 或 CT 上形成集病灶与脑重要功能区为一体的的解剖/功能形态学影象，这为外科手术治疗顽固性癫痫提供了准确的癫痫灶定位。利用信号时限差技术 MEG 不仅可以确定双侧大脑半球同时出现而 EEG 难以鉴别的双侧广泛性癫痫波病灶，而且还能分辨一侧半球中多脑叶出现的异常间歇期活动病灶。没有一种功能定位的方法是完善的，癫痫定位往往需要几种方法，包括解剖影像的联合应用。 目前各种方法互为补充，因此联合取得了良好的结果，如 EEG/MEG 和 CT/MRI 的融合、EEG和 fMRI、 PET和 MRI的融合等。 癫痫常用的功能定位检查方法之四：正电子发射计算机断层扫描( PET ) 目前常用的示踪剂主要是反应葡萄糖代谢的 18 FDG 。 FDG - PET 检查癫痫灶在发作期的发作早期多为高代谢灶，发作间期主要为低代谢灶，由于发作期不适于进行癫痫检查，所以 PET 结果显示癫痫灶为发作间期的低代谢灶， PET 检查准确率达到 85。7% ，对颞叶癫痫和婴幼儿癫痫敏感性和特异性均较高， FDG-PET 对颞叶癫痫的诊断敏感性可以达到 84 %，特异度可达 86 %。 癫痫常用的功能定位检查方法之五：功能性磁共振成像( fMRI ) fMRI 是一种在 MRI 基础上发展的，能反映特定的脑功能活动或血液动力学变化的脑组织的实时功能性成像技术，既保留的普通 MRI 的解剖学成像特点，又可同时获得生理学信息。常用的成像技术有弥散成像，灌注成像，血氧水平依赖测量，图像采集序列有 GRE ， FLASH ， EPI ，磁共振功能成像研究人脑的功能结构最常用的是血氧水平依赖测量 EPI 成像。目前有关 fMRI 应用主要是判断语言，情感，视觉，运动等功能区的部位及癫痫灶的位置，以便合理选择治疗方式， fMRI 可以来判断前颞叶切除后的癫痫控制和功能缺失情况。MRS 和 fMRI 均为无创性检查，不需要射线或对比照影剂或者放射性同位素示踪的情况下时间分辨率为数秒级，空间分辨率为毫米级，但检查时间长。 癫痫常用的功能定位检查方法之六：脑电图( EEG ) 近年来发展的视频脑电 (VEEG) 成为鉴别发作性质及类型的最有效的检查方法之一，亦是国际上普遍采用的癫痫和癫痫综合征分类的重要依据。视频脑电在临床实时记录病人发作期或发作间期的脑电活动及体态活动，为医生提供最为直接，准确的评断依据。随着视频脑电长程监测技术的发展，对癫痫类型的判定，致痫部位的定位，尤其对全身性癫痫棘波灶的起源和定位提供了前所未有的有利依据。而且近年来为增强检测的准确性，在脑电图的导联数上得到了极大的发展，目前已能提供达到 256 导的头皮电极。目前偶极子定位法的应用在一定程度上提高了定位的精确性。目前本方法又称为癫痫刀，实际上是对128导全数字化偶极子定位、三维图像融合长程视频脑电监测系统的一种俗称。以往癫痫手术治疗的效果一直不佳，主要原因在于对病灶难以准确定位。而最新型癫痫刀的最大优点就是定位精确，而且能够在术中进行全程监测，使医生尽量做到在关颅前不留遗憾。治疗有效率由传统方法的75%提高到90%以上。 目头颅 CT 与 MRI 扫描已成为癫痫病人检查的常规，特别是 MRI 扫描不仅要包括 T1 ， T2 像，还要进行 Flair 扫描和常规的海马冠状扫描，其主要目的是发现颅内异常结构病灶，排除肿瘤、血管病等病变，但仅 20% 的癫痫能够通过MRI或CT等结构影象检查确认病理灶定位，同时通常病理灶与癫痫灶不吻合或不完全吻合。无论是否存在结构性病灶，确定引起癫痫发作的功能性致痫灶是最重要的。
2. 细胞免疫功能检测常用有哪几种方法
细胞免疫（CMⅠ）是由多种细胞相互作用的结果。免疫细胞间相互作用导致多种细胞因子的释放。因此细胞功能测定不仅涉及T细胞的数量和功能与包括各类因子活性测定，因此评价机体的细胞免疫功能不仅程序复杂，且很难标准化。
一、迟发型过敏反应的体外检测方法
皮肤试验和接触性过敏的诱发是检测迟发型过敏反应（DTH）的两种常用方法。皮肤试验中诱发对曾经使病人致敏的抗原的再次应答，而接触性过敏是测试受者对从未接触过的物质发生致敏的能力。
1．皮肤试验 用皮肤试验诊断DTH，常用的抗原有结核菌纯蛋白衍生物（PPD）、腮腺炎病毒、念珠菌素等，在人类试验时在前臂皮内注射少量可溶性抗原，24～48小后，测量红肿硬结的大小，硬结直径大于10mm即被看作为阳性。表明受试者对该病原菌有了一定的细胞免疫能力，若皮试无反应，可用更高浓度的抗原重复试验，若仍无反应即为阴性，需排除皮试技术误差，也可能受试者从未接触过此抗原，也可能由于细胞免疫功能缺损，或由于细胞免疫功能缺损，或由于严重感染（麻疹、慢性播散性结核）造成的无反应性。
2．接触性过敏常应用低分子量化合物如二硝基氯苯（DNCB）诱生接触性过敏。化合物与皮肤蛋白质结合而导至DTH反应。在动物试验时，初次皮肤上涂抹DNCB后间隔7～10天再激发刺激，则皮肤出现即为阳性。此试验人类已不使用。
二、细胞免疫的体外检测方法
体外检测淋巴细胞的数量和功能，最易采集的是血标本，首先需分离或纯化淋巴细胞，一般使用萄聚糖-泛影葡胺配成比重为1.077的淋巴细胞分层液，当将血液重叠于淋巴细胞分层液之上离心时，由于红细胞（1.092）、多形核白细胞（1.090）、淋巴细胞（1.070）的比重不同而相互分开。淋巴细胞和单核细胞在血浆和分层液交界处形成一薄层。仔细分出这一薄层的细胞，其中淋巴细胞占80%，单核细胞占20%，淋巴细胞中T细胞占80%，B细胞占4%～10%，其作为非DT、非B细胞。
1．T细胞计数
（1）E花环法：人类T细胞表面有SRBC受体（CD2）能与SRBC结合形成玫瑰花环样结构，将经分层液分离现的RBM悬液与SRBC在含有血清的平衡盐水中混合，经37℃培养5～10分钟放4℃过夜，取细胞悬计数，外周血淋巴细胞中约70%～80%淋巴细胞结成花环即为T细胞。目前此方法已用来分离T细胞，而不用做T细胞计数。
（2）用单克隆抗体计数T细胞：将人的PBM分成三等份，分别用小鼠抗人CD3、CD4和CD8的单克隆抗体作第一抗体与细胞结合，再用FITC标记的兔抗小鼠IgG抗体作第二抗体进行间接免疫荧光染色，在荧光显微镜下或流式细胞仪检测结果，在PBM中被CD3抗体染上荧光的细胞称为CD3 细胞即总T细胞。正常人在PBM中T细胞占70%～80%。正常人的CD4 细胞和CD8 细胞之和应与CD3 细胞数一致。CD4 细胞与CD8 细胞的比值正常人约为2/1而艾滋病患者则比值小于1.7。
2．T细胞活化试验 T细胞能被非特异的物质称为有丝分裂原所激活而向淋巴母细胞转化。T细胞转化过程可伴随有DNA、RNA、蛋白质的合成增加，最图导致细胞分裂。在光学显微镜下可计数转化后的淋巴细胞数，也可用氚标记的胸腺嘧啶核苷（3HTdR）掺入正在分裂的淋巴细胞，用液闪测定仪检查掺入正在分裂的淋巴细胞，用液测量仪检查掺入的3H-TdR的多少确定淋巴细胞转化率。最近有一种不用同位素，又可用仪器测量的淋巴细胞增殖反应的检查法，称为MTT检测法，MTT是一种甲氮唑盐，它是细胞线粒体脱氢酶的底物，细胞内的酶可将MTT分解产生蓝黑色甲（fromazan）产物。该产物的多少与活性细胞数正相关。结果可用酶标检测仪（595mm）测量汇丰银行密度，做为MTT法的检查指标。此法的结果与3H-TdR掺入法平行，并能反应试验中的活细胞数。
3．细胞毒试验 TC细胞、NK细胞、LAK细胞、TIL细胞对其靶细胞有直接的细胞毒（杀伤）作用。常用的栓测细胞毒效应的方法是51Cr-Na2Cro4盐水溶液与靶细胞胞混合，于37℃培养1小时左右，51Cr即可进入靶细胞，与胞浆蛋白结合，洗去游离的51Cr后，即可得到51Cr标记的靶细胞，将待检细胞毒性的细胞与51Cr标记的靶细胞混合（比例约为50：1或100：1）靶细胞被杀伤越多，释放到上清液中的液游离的51Cr越多，且不能被其他细胞吸收。用γ射线测量仪检测上清液中的cpm值，即可计算出待检细胞杀伤活性的高低。
细胞毒试验检测Tc细胞效应功能是否健全，及经IgG介导的ADCC效应，或NK细胞在抗肿瘤免疫中的作用是有意义的。
4．混合淋巴细胞的反应（MIR） 是体外研究T细胞的较好的方法，双向MLR常被用来筛选骨髓移植的供体。来自不同供体的淋巴细胞分别与病人的淋巴细胞混合培养4～5天，在最后8小时掺入51TdR掺入法测T细胞的反应性。或用细胞毒法观察受刺激的T细胞与活的靶细胞混合（靶细胞来自与刺激细胞相同的个体）如果T细胞受刺激后产生了细胞毒T细胞，可杀死活的细胞，根据靶细胞释放51Cr的多少算出T细胞移动抑制因子）和LIF（白细胞移动抑制因子）来评估细胞免疫功能。近年来应用测定IL-2的免疫酶技术，操作简单，并能定量以取代了MIF和LIF的测定。单个核细胞与分裂原一起培养24小时，然后测定清液中的IL-2活性。在细胞免疫功能缺损时，特别是AIDS病人，IL-2分泌明显降低。而有些疾病，如多发性硬化、类风湿关节炎、移植排斥反应等病人体内血清中IL-2水平升高，表明病人T细胞活性增高。发生移植排斥反应的病人尿中IL-2也可升高。
也可用酶联免疫吸附试验测定各种体液中活化的T细胞脱落的IL-2受体（CD25），一般来说IL-2的水平和IL-2受体水平是平行的，IL-2和IL-2受体的检测可用于对某些疾病的监测，如移杆排斥、自身免疫病以及接受免疫抑制治疗的病人。
对体外培养的细胞进行细胞因子产生能力检测是检查细胞培养上清液中细胞因子的生物活性或抗原性。现已可用核酸杂交技术，即从组织中或细胞中提取RNA，与同位素或酶标记的该种细胞因子的cDNA探针作分子杂交试验，即印迹（dot blotting）或Northern印迹，若查出有某种因子的mRNA存在，即说明该细胞在所处培养条件下有产生某种细胞因子的能力。
3. 什么是功能医学检测
功能医学检测是以科学为基础的保健医学，以先进及准确的实验为工具，检测个人的生化体质(biochemicalindiviality)、代谢平衡(metabolic balance)、生态环境(ecological context)，以达到早期改善并维持生理、情绪/认知及体能的平衡的检测方法。
简单地说，功能医学检测是根据每一个病人独特而与众不同的体质，评估身体器官无临床症状变化的功能状况，"其评估器官的"功能"而非仅器官的"病理"。
4. 检测巨噬细胞的功能还有什么方法
巨噬细胞功能检测方法：
人巨噬细胞可从外周血或经斑蝥激发的皮疱液中获取，也可从肺灌洗液或患者腹膜透析液中分离，但操作繁锁，得量不多。许多实验室在进行基础或配合临床研究巨噬细胞功能及其与疾病的关系、或筛检免疫增强药物和探讨其作用机制时，常选用小鼠腹腔巨噬细胞为研究对象，常用的检测方法如下。
（一）炭粒廓清试验
正常小鼠肝中枯否细胞可吞噬清除90%炭粒医学教|育网搜集整理，脾巨噬细胞约吞噬清除10%炭粒，据此给小鼠定量静脉注射印度墨汁（炭粒悬液），间隔一定时间反复取静脉血，测定血中炭粒的浓度，根据血流中炭粒被廓清的速度，判断巨噬细胞的功能。
（二）吞噬功能的检测
巨噬细胞具有较强的吞噬功能，实验室常用比细菌大的细胞性抗原作为被吞噬颗粒，如鸡红细胞。其检测原理是将受检细胞与适量的颗粒抗原混合后，置
37℃保温0.5～1h，其间时加振摇，最后离心取测定细胞制成涂片，染色镜检，分别计数出吞噬百分比和吞噬指数。各实验室应根据自己的条件建立正常参考值。
（三）巨噬细胞溶酶体酶的测定
巨噬细胞富含溶酶体酶，如酸性磷酸酶、非特异性酯酶、溶菌酶等，测定这些酶的活性也是衡量巨噬细胞功能的实用指标之一。
1.酸磷酸酶的测定
（1）硝酸铅法：本法优点是用普通试剂，价格便宜，一般实验室均有条件做，封片后可较长时间保存，并可用电子显微镜研究观察细胞的超微结构。缺点是细胞必需固定，而且固定条件要求严格，如处理不当酶活性易消失，反应步骤也较多。
该法基本原理是在适当的酶性条件下，巨噬细胞内的酸性磷酸酶能使β甘油磷酸钠水解成磷酸盐后，后者与硝酸铅反应产生磷酸铅，而磷酸铅再与硫酸铵反应则形成黑色硫化铅，沉积在胞浆内酸所在处，显示棕黑色颗粒。酶活性强弱可根据颗粒的数量和粗细不同而分级判断，颗粒数量少则细的为+，颗粒多而粗的为++，颗粒很多且很粗的为+++.
（2）偶氮法：本法操作简便，反应液中的底物α-萘磷酸钠被酸性磷酸酶分解后，形成萘酚和磷酸盐，而萘酚结构中的羟基（-OH）邻近的活泼碳原子，立即与偶氮染料起反应，而产生鲜艳的棕色沉积在酶所在处，缺点是封片后保存时间短。
2.非特异性酶的测定该酶比较稳定，酶活性丧失较慢，细胞经涂片干燥，置室温至少可保存半天至一天，因此特别有利于临床检验室采用。
常用α-萘醋酸法，该酶可将-萘醋酸分解成萘酚和醋酸，萘酚迅速与偶染料结合，形成有色反应物而沉积。
（四）巨噬细胞促凝血活性测定
激活巨噬细胞可产生一种与膜结合的凝血活性因子，加速正常血浆的凝固，为此取已经37℃预温的正常兔血浆和CaC12混合液，加入经粘附单层巨噬细胞的试管中，移置37℃，即时记录血浆凝固时间。实验证明当巨噬细胞与LPS、肿瘤相关抗原或HbsAg等温育后，可见血浆凝固时间明显缩短。本法稳定方便，也是检测不同疾病患者巨噬细胞功能的指标之一。
5. 肝功能检测方法(专业)
什么是乙肝
乙型病毒性肝炎简称乙型肝炎，是由乙型肝炎病毒（HBV）引起，通过血液与体液传播，具有慢性携带状态的传染病，临床表现多样化，包括急性、慢性、淤胆型和重症型肝炎，容易发展为慢性肝炎和肝硬化，少数病例可转变为原发性肝细胞癌。本病在我国广泛流行，人群感染率达60%，HBsAg阳性率约为10-15%。是当前危害人民健康最严重的传染病。
乙肝的传播途径
1.血源性传播：接受被乙肝病毒污染的血液或血制品。
2.母婴传播：乙肝病毒能通过胎盘传播（宫内传播），或在孕妇分娩时从产道传播（围产期传播）。
3.医源性传播： 如医疗器械被乙肝病毒污染而未经消毒或处理不当可造成传播。
4.性接触传播： 性乱交、同性恋性接触及夫妻之间性生活未采取防护措施。
5.密切接触传播：乙肝患者或携带者的血液、精液、阴道分泌物、乳汁都可能含有乙肝病毒，可污染器具、物品而具有传染性。
乙肝二对半检查
乙型肝炎病毒免疫学标记一共3对，即表面抗原(HBsAg)和表面抗体(抗HBs或HBsAb)、e抗原(HBeAg)和e抗体(抗HBe或HBeAb)、核心抗原(HBcAg)和核心抗体(抗HBc或HBcAb)。由于核心抗原在血中不易测到，目前试剂盒也不过关，所以还剩二对半抗原抗体，这就是人们常说的乙肝“二对半”检查，或称“乙肝五项”检查。乙肝五项临床意义如下：
1.乙肝表面抗原：是乙肝病毒的外壳蛋白，本身不具有传染性，但它的出现常伴随乙肝病毒的存在，所以它是已感染乙肝病毒的标志。在感染乙肝病毒2个月～6个月、丙氨酸氨基转移酶升高前2周～8周时，可在血清中测到阳性结果。它的出现表明是急性乙肝、慢性乙肝患者或病原携带者，急性乙肝患者大部分可在病程早期转阴，慢性乙肝患者或病毒携带者表面抗原可持续阳性。
2.乙肝表面抗体：是对乙肝病毒免疫和保护性抗体。它的阳性表明既往感染过乙肝病毒，但已经排除病毒，或者接种过乙肝疫苗，产生了保护性抗体。血清中乙肝表面抗体滴度越高，保护力越强。但也有少数人乙肝表面抗体阳性而又发生了乙型肝炎，可能为不同亚型感染或是乙肝病毒发生了变异。
3.e抗原：急性或慢性乙肝患者体内可查出e抗原，它的阳性说明乙肝病毒在体内复制活跃，传染性强。
4.e抗体：它的阳性表明患者的传染性降低，病毒复制降低或缓解。也有个别人e抗体阳性，病情迁延不愈，多为感染了变异的乙肝病毒所致。
5.核心抗体：它的滴度高，表明乙肝病毒正在复制，有传染性，可持续存在数年至数十年。低滴度的核心抗体表明既往感染过乙肝病毒。
如何看化验单（乙肝三系检查、肝功能检查）
（一）乙肝三系检查（代表体内病毒情况）
1.HBsAg(表面抗原)
2.HBsAb(表面抗体)
3.HBeAg(E抗原)
4.HBeAb(E抗体)
5.HBcAB(核心抗体)
A 1、3、5项阳性说明感染的是大三阳，病毒复制快，有传染性。
B 1、4、5阳性说明感染的是小三阳，病毒复制相对较慢，传染性相对较小。
C 单独2项阳性说明原来感染过乙肝，或者注射过乙肝疫苗。
D 1、5或者4、5阳性说明正在感染其间，或者正在康复之中。具体分析看病情而定。
E 1、3阳性说明正在感染之中，应该及时治疗。
（二）肝功能检查（代表肝脏本身的变化）
项目 单位 参考范围
总蛋白： G/L 60-83
白蛋白 G/L 35-53
球蛋白： G/L 25-33
谷丙转氨酶 U/L 0-40
谷草转氨酶 U/L 0-50
总胆红素 umo/l 0-20
直接胆红素 umo/l 0.0-6.0
肝功各项化验指标的临床意义:
通常医院所做的肝功能化验指标包括谷丙转氨酶(ALT),谷草转氨酶(AST),碱性磷酸酶(ALP),γ-谷酰转肽酶(GGT),白蛋白/球蛋白(A/G),总胆红素(T-Bil),直接胆红素(D-Bil)。 ALT与AST主要分布在肝脏的肝细胞内，如果肝细胞坏死, ALT和AST就会升高，但这两种酶在肝细胞内的分布是不同的，ALT分布在肝细胞浆,AST分布在肝细胞浆和线粒体中。急性肝炎和轻症的慢性肝炎, 主要表现为ALT的升高，因此,AST/ALT<1;慢性肝炎的后期,肝硬化和肝癌患者,肝细胞的破坏程度是严重的,线粒体也受到了严重的破坏,因此,AST升高明显, AST/ALT>1甚至>2。 ALP和GGT在淤胆型肝炎和肝外梗阻时明显升高, 酒精性肝炎患者的GGT明显升高。白蛋白是在肝脏制造的, 当肝功能受损时, 白蛋白产生减少, 球蛋白是机体免疫器官制造的, 当体内存在"敌人"时, 球蛋白产生增加, 因而慢性肝炎病人由于肝功能减退,白蛋白产生减少,又由于体内存在肝炎病毒这个"敌人",球蛋白产生增加, 而造成A/G比值倒置。 肝细胞受损时, 胆红素的代谢及泄均发生障碍, 因此T-Bil和D -Bil均升高。
何谓"大三阳"，何谓"小三阳"
肝功化验1、3、5阳性，属于“大三阳”，即表面抗原（HBsAg)、e抗原（HBeAg)和核心抗体（HBcAb)同时出现阳性。这些患者由于HBeAg(+),因此提示乙型肝炎病毒在体内复制(繁殖)活跃,且传染性较强。这些患者还分为两种情况: 一种是肝功正常的患者,说明这些患者虽然病毒在体内较活跃,但并没有引起严重的肝损害。这些患者可以正常工作和学习。又因其病毒复制活跃,还应经常检查肝功能,一旦发现异常及时治疗，同时可在医生的指导下进行免疫治疗和抗病毒治疗。另一种是肝功异常的患者,这些患者不但传染性强,而且已有了较明显的肝脏损害。对这样的患者首先要积极治疗肝功能异常,可在保肝功物的基础上加用免疫调节治疗,而且要注意休息。如果没有很好的治疗,患者则容易发展为肝硬化。其次,在肝功能稳定的情况下,由医生决定是否应用抗病毒药物。还有,由于其传染性强,密切接触的亲属、配偶、子女也应注射乙肝疫苗。
肝功化验1、4、5阳性，属于“小三阳”，即表面抗原（HBsAg)、e抗体（HBeAb)和核心抗体（HBcAb)同时出现阳性。相对于大三阳患者来说，小三阳患者体内的病毒复制已经由活跃转为静止，血中的带病毒量也明显减少，传染性相对降低，病情开始好转。对于“小三阳”患者还应区分两种情况，一种是肝功能长期正常（每3个月复查肝功一次，持续2～3年），称之为“稳定的小三阳”，这是乙肝表面抗原携带者或急性乙肝患者较好的转归，可看成是一个健康者，一般不会发展为慢性乙肝病人，也不具有传染性。第二种情况是肝功检查经常异常，时好时坏，称之为“不稳定的小三阳”；这主要是由于乙肝病毒发生变异所致，当肝功能异常时要按肝炎进行治疗，也具有较强的传染性。
乙型肝炎的发病机理
乙型肝炎的发病机理是一个复杂的问题,迄今尚未完全阐明。国内外学者对此进行了大量研究，结果表明, 乙型肝炎病人的肝脏受损,并不是乙型肝炎病毒在肝细胞内繁殖的直接结果, 而是机体的免疫反应造成的。乙型肝炎病毒感染人体后,可激发机体产生对乙型肝炎病毒的各种细胞免疫反应和体液免疫反应,并激发自身免疫反应引起免疫调节功能紊乱。机体的这些免疫反应, 可清除已感染病毒的肝细胞, 又可引起肝细胞的损伤, 造成不同类型的病理变化及临床转归。
幼儿时感染HBV,常常因免疫功能不健全,而缺乏上述的免疫反应,造成乙型肝炎病毒携带状态或慢性肝炎。成年感染乙型肝炎病毒的多数患者病毒是可以通过上述免疫反应,引起急性肝炎的症状,同时清除肝炎病毒的。
什么是“澳抗”
“澳抗”的全称是澳大利亚抗原，它是乙型肝炎(简称乙肝)病毒免疫指标之一，亦叫做乙肝表面抗原(HBsAg),由于首先在澳大利亚发现，故称之为“澳抗”。
乙型肝炎表面抗原携带者应注意的问题
携带者除不能献血外，可照常工作和学习，一般不必治疗，但必须注意下列几点：
（1）定期（3-6月）复查，包括肝功能、B超、AFP（甲胎蛋白）及白细胞、血小板。一旦发现异常，就需根据不同情况进行治疗。虽然肝功能检查正常，但肝、脾肿大或白细胞、血小板减少也应引起重视。进行必要的治疗；
（2）忌酒；
（3）生活规律，勿过累；
（4）注意个人卫生和月经卫生，防止唾液、血液污染周围环境，感染他人，所用食具、刮刀修面用具、牙刷、盥洗用品应与别人分开；
（5）如HBeAg阳性或HBVDNA阳性，则不宜从事接触直接入口食品、食具和婴幼儿工作。 要知道无症状HBsAg携带者中有一部分人的肝脏可能有炎症，实际上为慢性肝炎；也有一部分携带者在某一时期可能会发病，母婴传染的携带者常常在青春期前后发病。一般认为30岁以上携带者发病的可能性明显减少。
对乙型肝炎表面抗原携带者有哪些限制
由于人们对乙型肝炎表面抗原携带者的认识不够全面，以至一些乙型肝炎表面抗原携带者中的青年在升学、就业、结婚甚至出国等都发生了各式各样的问题。其实有些问题并非那么严重。乙型肝炎表面抗原携带者约占我国总人口的10%，他们中不乏有科学家、名演员和为国争光的优秀运动员。除了某些学业，如幼儿师范、护士、饮食服务行业等外，对升学、就业，甚至出国不应有太多的限制。这是因为乙肝的传染主要通过血液，偶尔通过唾液、精液传染，日常生活中一般接触是不太可能传染给别的人。至于结婚，只要对方抗HBs阳性，或HBsAg阳性，就不存在相互传染的问题。如果对方乙肝标志全部阴性，建议注射乙肝疫苗后再结婚。
"小三阳"患者为什么有的转氨酶正常,有的不正常
小三阳患者是指HBsAg(+), 抗HBc(+)和抗HBe(+)的患者。一般认为病毒复制不活跃, 传染性也不强。但乙型肝炎的肝损害,不取决于病毒是否活跃,而取决于患者本身的免疫系统如何对待乙型肝炎病毒。如果与病毒"和平共处", 就不会引起肝损伤, 肝功能就正常, 如果与病毒"作战", 就会在"作战"的同时,破坏肝细胞, 引起肝功能异常。如果在"作战"时,有效地清除了病毒,就会全愈。而在"作战"时,只破坏肝细胞,而对病毒的"杀伤"不利,就发展成为慢性肝炎,造成长期的肝功能异常。
e抗体阳性是不是一定好
e抗原阳性转变为e抗体阳性，可能有二种情况。一种是随着e抗原转阴,HBVDNA也转为阴性，继而肝功能也正常，一般认为这是一种预后良好，传染性没有的表现；另一种情况是e抗原转阴，e抗体转阳，但HBVDNA仍阳性，或者血中HBVDNA阴性但肝组织中的HBVDNA仍阳性，虽然病毒复制降低，但仍在复制，仍有传染性，肝脏仍在受损，病情仍在发展。因此，e抗体转阳并非都是好事。此外，还有一种变异的乙肝病毒，始终不出现e抗原阳性，但HBVDNA 持续阳性，说明病毒从未减少过，这种类型的乙型肝炎对人的危害更大。
乙型肝炎病毒携带者入学、就业时应注意的问题
乙型肝炎的传染性较弱, 一般接触不易被感染。因此乙型肝炎患者只要身体状况允许,是可以正常入学并参加工作的。但在选择职业时,要注意不宜从事餐饮,保育员等工作,其他职业均可参加。学校和单位也不应因为HBsAg(+)而拒绝接受这些人员入学或工作。
乙型肝炎病毒携带者与慢性乙型肝炎如何区别
乙型肝炎病毒携带者与慢性肝炎的主要区别在于前者没有或很少引起肝细胞的损伤,后者引起肝细胞的损伤并表现出肝功能异常及相应的临床症状。
亲吻和性交是否能传播乙型肝炎病毒
由于亲吻和性交都接触了病人的体液,因此是可以传播乙型肝炎病毒的。目前婚前检查要求检查HBsAg, 如一方HBsAg(+), 另一方则应进行乙型肝炎的预防接种。
怎样预防乙型肝炎发展成为肝硬化
乙型肝炎发展成为肝硬化的原因是,肝细胞不断的坏死。肝细胞坏死后,正常的肝组织发生"塌陷",机体的再生功能就会再生出一些纤维,来充填"塌陷"的部位。这是机体对坏死的组织的一种正常代偿功能,代表坏死部位的愈合,是好事。但是,如果肝细胞不断地坏死,肝脏内不断地再生纤维,这些纤维取代了大部分的肝组织,而它们又没有正常肝细胞的功能,肝脏变得又硬又小,这就形成了肝硬化。因此, 预防乙型肝炎患者发展为肝硬化的关键在于阻断肝细胞的坏死。这就是说要保证肝功能的正常。肝功能异常就是肝细胞坏死的标志。因此,乙型肝炎患者一定要定期检查肝功能,一旦肝功能异常就要及时治疗。另外,中药中的一些活血化瘀药(丹参等)滋补药(冬虫夏草、鳖甲等)均有软化肝脏,减少肝内纤维生成的作用。
乙肝病人能结婚生育吗
(1)急性乙肝恢复期、慢性迁延期肝炎、慢性活动性肝炎、以及活动性肝硬化在肝功能恢复正常后连续化验肝功能六个月及一、二年内均正常、乙肝病毒复制指标阴转，可以结婚。
(2)肝功能一贯正常，仅乙肝“两对半”呈“大三阳”的乙肝患者也暂不宜结婚或过性生活，若婚后才发生一方呈“大三阳”时，而对方“两对半”全阴性，待全阴性者产生足够的保护性抗体时，才有可能不被对方乙肝病毒感染。但只能保持3－5年。在一方病情复制指标未转阴前，应采取避孕措施（若患者为男方，应使用避孕套）。并积极采取抗病毒治疗。
(3)单项HBsAg阳性者，原则上可以结婚。但也非绝无传染性，应产生足够保护性抗体时再结婚。
(4)慢性表抗原HBsAg携带者若仅伴抗－HBe一项阳性者可以结婚。
(5)“两对半”中呈1.4.5或1.5阳性者，若抗－HBe滴度高，可能有传染性。等抗－HBe滴度明显下降后才结婚。
(6)即使只有HBsAg或抗－HBe单项阳性的患者，或者2.4.5或2.5阳性的患者，虽可结婚，但性生活应有节制。
(7)父母或家庭中如有明显肝硬化、肝癌遗传倾向的乙肝患者，婚后最好不要生育。
父亲为乙肝病毒携带者,对胎儿及子女的影响
父亲为乙肝病毒携带者,对胎儿及子女的影响有两种。一种是造成乙型肝炎病毒的传播。除母婴传播外,父亲也有垂直传播的可能,但机率远比母婴传播小。其传播途径主要是产后密切接触传播。另一种是把乙肝病毒的易感基因遗传给下一代,使其子女容易感染乙肝病毒。因此,父亲为乙肝病毒携带者,孩子也应注射乙肝疫苗。
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6. 简述T细胞功能测定的常用方法
免疫学检测方法可分为体液免疫和细胞免疫测定。1．体液免疫测定主要利用抗原与相应抗体在体外发生特异性结合，并在一些辅助因子参与下出现反应，从而用已知抗原或抗体来测知未知抗体或抗原。此外，尚包括检测体液中的各种可溶性免疫分子，如补体、免疫球蛋白、循环复合物、溶菌酶等。2．细胞免疫测定法是根据各种免疫细胞（T细胞、B细胞、K细胞、NK细胞及巨噬细胞等）表面所具有的独特标志和产生的细胞因子等，测定各种免疫细胞及其亚群的数量和功能，以帮助了解机体的细胞免疫水平。体液免疫检测法1.凝集反应。颗粒性抗原（细菌或红细胞等）与相应抗体特异性结合，在电解质参与下形成肉眼可见的凝集物，称之为凝集反应。1）直接凝集反应。颗粒性抗原与相应抗体直接结合所产生的凝集现象，前者多为细胞表面的结构成分，如细菌或红细胞的表面结构抗原。⑴玻片法：多用于抗原的定性检测。⑵试管法：多用于抗体的定量检测。2）间接凝集反应。将可溶性抗原吸附于载体颗粒（如乳胶颗粒、红细胞等）的表面，称之为致敏颗粒。当致敏颗粒与相应抗体结合，即可出现凝集现象。这个反应常用于测定细菌性抗体、病毒性抗体、钩端螺旋体和梅毒螺旋体抗体及某些自身抗体（如抗核抗体、抗肾抗体、抗甲状腺抗体等）。根据凝集反应的原理，还有间接凝集抑制试验、反向间接凝集试验、协同凝集试验等。2．沉淀反应。可溶性抗原（外毒素、血清、细菌培养的滤液、组织浸出液等）与相应抗体特异性结合，在电解质参与下，形成沉淀物，称为沉淀反应。沉淀反应的抗原多为多糖、类脂、蛋白质等。1）单向扩散试验。这是一种抗原定量试验，是可溶性抗原在含抗体的琼脂介质中扩散的沉淀反应。此法常用于检测血清免疫球蛋白和补体各成分的含量。2）双向扩散试验。这是可溶性抗原与抗体在琼脂介质中相互扩散的沉淀反应。本法常用于定性试验，如检测血清免疫球蛋白、甲胎蛋白、乙型肝炎表面抗原等。单克隆抗体技术3）对流免疫电泳。对流电泳是一敏感快速的检测方法，即在电场作用下的双向免疫扩散。此法常用于检测血清中的乙型肝炎表面抗原与甲胎蛋白等。3．中和试验。特异性抗体可抑制相应抗原物质的活性，抗体使相应抗原的毒性或传染性消失的反应为中和试验。例如抗毒素中和外毒素的毒性，病毒的中和抗体可使病毒失去感染性等。诊断风湿热的抗链球菌溶血毒素“O”试验也为一种中和试验。乙型溶血性链球菌能产生一种溶解人、兔红细胞的溶血毒素“O”，该毒素的溶血毒性可被抗溶血毒素“O”抗体所中和而不出现溶血。试验时将病人血清与溶血毒素“O”混合，作用一段时间后加入人红细胞，红细胞不被溶解为阳性反应，表示病人血清中存在抗溶血毒素“O”抗体。血清抗体效价达400单位以上时提示患者曾感染乙型溶血性链球菌，有助于风湿热的诊断。4.免疫荧光法（荧光抗体法）。是应用荧光素染料（如异硫氰酸荧光黄等）来标记抗体，但不影响其活性，此种抗体称荧光抗体。用已知种类的荧光抗体浸染待检的含有抗原的细胞或组织切片，如有相应抗原存在，则抗原即与此种抗体发生特异性结合，形成复合物而粘着在细胞上，不易洗脱，在荧光显微镜下成为发出荧光的可见物，可达到诊断或定位的目的。包括直接法和间接法。5．酶联免疫吸附试验。本法的原理是利用酶（常用辣根过氧化物酶）标记的抗原或抗体，以测定被检标本中有无相应的抗原或抗体。有间接法、双抗体法、竞争法三种。6．溶血空斑试验。7．免疫印迹技术。免疫印迹或免疫转印技术(immunoblotting或Westernblot）是在Southern(1975)抗体抗原反应创建的DNA印迹术(Southernblotting）基础上发展起来的新型免疫生化技术。细胞免疫检测法近代免疫学广泛采用了细胞生物学、免疫血清学、免疫标记、免疫组化等多方面技术，不断发展和完善了一系列细胞免疫检测技术，用于检测各类免疫细胞的表面标志（包括抗原及受体）、细胞的活化、增殖、吞噬、杀伤功能、各种细胞因子的活性或含量等方面。这些技术为深入研究和认识机体免疫系统的生理、病理改变，阐明某些疾病的发病机制和临床诊治提供了有用的手段。随着细胞免疫学的迅猛发展，时有新的细胞免疫检测技术出现。二十一世纪初期，新发展的项目集中在对有关细胞因子以及细胞受体方面的检测。1．淋巴细胞转化试验。人类淋巴细胞在体外与特异性抗原（如结核菌素）或非特异性有丝分裂原（如植物血凝素，PHA）等一起孵育，T细胞即被激活而向淋巴母细胞转化。T细胞转化过程可伴随有DNA、RNA、蛋白质的合成增加，最后导致细胞分裂。在光学显微镜下可计数转化后的淋巴母细胞数，也可用氚标记的胸腺嘧啶核苷(3H-TdR）掺入正在分裂的淋巴细胞，用液闪测定仪来确定掺入量以确定淋巴细胞转化率。2000年开始出现一种不用同位素，又可用仪器测量的淋巴细胞增殖反应的检查法，称为MTT检测法。MTT是一种甲氮唑盐，它是细胞线粒体脱氢酶的底物，细胞内的酶可将MTT分解产生蓝黑色成分。该产物的多少与活细胞数成正比，结果可用酶标仪(595nm）测量光密度，作为MTT法的指标。2．E-花环法。人类T细胞表面有羊细胞受体(CD2）能与羊红细胞结合形成玫瑰花样结构。即将分离液分离出的外周的单个核细胞悬液与羊红细胞在体外混合，经37℃培养5～10分钟后放4℃过夜，取细胞悬液计数，外周血淋巴细胞中约70%～80%淋巴细胞结成花环即为T细胞，此法可用来分离T细胞。3．T细胞亚群检测。4．细胞毒试验。Tc细胞、NK细胞、LAK细胞、TIL细胞等对其靶细胞有直接的细胞毒（杀伤）作用。抗体制备常用的检测方法是51Cr（铬）释放法，将51Cr-Na2CrO4盐水溶液与靶细胞（不同的细胞需不同的靶细胞，如NK细胞的靶细胞为K562），于37℃培养1小时左右，51Cr即进入靶细胞，与胞浆结合，洗去游离的51Cr后，即可得到51Cr标记的靶细胞，将待测细胞毒的细胞与51Cr标记的靶细胞混合（比例约为50:1或100:1），靶细胞杀伤越多，释放到上清液中的游离51Cr就越多，且不能再被其他细胞吸收，用γ射线测量仪检测上清液中的cpm值，可计算出待检细胞杀伤活性高低。细胞毒的检测对肿瘤免疫有较大价值。5．巨噬细胞吞噬功能的测定。将中药(10%斑蝥）乙醇浸出液浸渍的滤纸（1cm2大小）置于受试者前臂屈侧皮肤上，4～5小时后取下滤纸。48小时内皮肤局部可水泡，内含巨噬细胞。取水泡液0.5ml加鸡红细胞悬液0.01ml，37℃经30分钟后作涂片、染色与镜检，计算吞噬百分率及每个巨噬细胞吞噬鸡红细胞的平均数。本试验有助于肿瘤病情及疗效的观察。6．移动抑制试验。致敏淋巴细胞与其特异性抗原再次接触时，可以产生移动抑制因子(MIF）。这种因子可以抑制巨噬细胞和中性粒细胞的移动，使之定位于局部而增强其免疫作用。本试验用来观察受检者淋巴细胞在体外受特异性抗原刺激后，有无MIF产生，以测定机体对某种抗原的特异性细胞免疫反应的功能。7．时间分辨荧光测量技术。时间分辨荧光测量技术(time-resolvedfluorometry,TrF）是一项新型的超微量非放射性分析技术。该技术的敏感性和特异性与放射性核素测量技术相仿，但无放射测量的弊端，故问世虽短，进展却极为迅速，有取代放射测量之势。8．细胞因子检测技术。细胞因子的检测，2005年起在中医临床及实验室中已广泛应用。9．细胞受体的检测。受体是细胞表面标志之一，通过对受体的检测，可以了解细胞的功能，并为某些疾病的发病机制提供一定的理论依据。
7. DNA甲基化的内容、功能、检测及其研究方法
DNA甲基化（DNA methylation）
DNA甲基化是最早发现的修饰途径之一，大量研究表明，DNA甲基化能引起染色质结构、DNA构象、DNA稳定性及DNA与蛋白质相互作用方式的改变，从而控制基因表达。
在甲基转移酶的催化下，DNA的CG两个核苷酸的胞嘧啶被选择性地添加甲基，形成5－甲基胞嘧啶，这常见于基因的5'-CG-3'序列。大多数脊椎动物基因组DNA都有少量的甲基化胞嘧啶，主要集中在基因5’端的非编码区，并成簇存在。甲基化位点可随DNA的复制而遗传，因为DNA复制后，甲基化酶可将新合成的未甲基化的位点进行甲基化。DNA的甲基化可引起基因的失活。
DNA甲基化主要形成5－甲基胞嘧啶（5-mC）和少量的N6-甲基嘌呤（N6-mA）及7－甲基鸟嘌呤（7-mG）
结构基因含有很多CpG 结构, 2CpG 和2GPC 中两个胞嘧啶的5 位碳原子通常被甲基化, 且两个甲基集团在DNA 双链大沟中呈特定三维结构。基因组中60%～ 90% 的CpG 都被甲基化, 未甲基化的CpG 成簇地组成CpG 岛, 位于结构基因启动子的核心序列和转录起始点。有实验证明超甲基化阻遏转录的进行。DNA 甲基化可引起基因组中相应区域染色质结构变化, 使DNA 失去核酶ö限制性内切酶的切割位点, 以及DNA 酶的敏感位点, 使染色质高度螺旋化, 凝缩成团, 失去转录活性。5 位C 甲基化的胞嘧啶脱氨基生成胸腺嘧啶, 由此可能导致基因置换突变, 发生碱基错配: T2G, 如果在细胞分裂过程中不被纠正,就会诱发遗传病或癌症, 而且, 生物体甲基化的方式是稳定的, 可遗传的。
DNA 甲基转移酶有两种: 1) DNM T1, 持续性DNA 甲基转移酶—— 作用于仅有一条链甲基化的DNA 双链, 使其完全甲基化, 可参与DNA 复制双链中的新合成链的甲基化,DNM T1 可能直接与HDAC (组蛋白去乙酰基转移酶) 联合作用阻断转录; 2)DNM T3a、DNM T3b从头甲基转移酶, 它们可甲基化CpG, 使其半甲基化, 继而全甲基化。从头甲基转移酶可能参与细胞生长分化调控, 其中DNM T3b在肿瘤基因甲基化中起重要作用。
DNA 去甲基化有两种方式: 1) 被动途径: 由于核因子N F 粘附甲基化的DNA , 使粘附点附近的DNA不能被完全甲基化, 从而阻断DNM T1 的作用; 2) 主动途径: 是由去甲基酶的作用, 将甲基集团移去的过程。在DNA 甲基化阻遏基因表达的过程中, 甲基化CpG 粘附蛋白起着重要作用。虽然甲基化DNA 可直接作用于甲基化敏感转录因子E2F、CREB、A P2、CM ycöM yn、N F2KB、Cmyb、Ets, 使它们失去结合DNA 的功能从而阻断转录, 但是, 甲基化CpG 粘附分子可作用于甲基化非敏感转录因子(SP1、CTF、YY1) , 使它们失活, 从而阻断转录。人们已发现5 种带有恒定的甲基化DNA 结合域(MBD ) 的甲基化CpG 粘附蛋白。其中M ECP2、MBD1、
MBD2、MBD3 参与甲基化有关的转录阻遏;MBD1 有糖基转移酶活性, 可将T 从错配碱基对TöG 中移去,MBD4 基因的突变还与线粒体不稳定的肿瘤发生有关。在MBD2 缺陷的小鼠细胞中, 不含M ECP1 复合物, 不能有效阻止甲基化基因的表达。这表明甲基化CpG 粘附蛋白在DNA 甲基化方式的选择, 以及DNA 甲基化与组蛋白去乙酰化、染色质重组相互联系中的有重要作用。
8. 功能测试常用方法都有哪些
一，页面链接检查；二，相关性检查；三，检查按钮的功能是否正确；四，字符串长度检查；五，字符类型检查；六，标点符号检查；七，中文字符的处理；八，检查带出信息的完整性；九，信息重复；十，检查删除功能；十一，检查添加和修改是否一致；十二，检查修改重名；十三，检查多次使用back键的情况；十四，搜索功能检查；十五，输入信息位置；十六，上传下载文件检查；十七，必填项检查；十八，快捷键检查；十九，回车键检查。
9. 基因功能研究方法(细胞水平功能获得、功能+缺失方法、蛋白质相互作用)
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