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dna和rna常用提取方法

發布時間:2023-01-27 12:22:18

如何分離DNA和RNA

1、鹽析法:DAN與蛋白質結合形成的核蛋白溶於高鹽溶液,但不溶於低鹽溶液;而RNA形成的核蛋白易溶於低鹽溶液,因此可用高鹽溶液從細胞破碎液中提取DNA核蛋白,還可以除去RNA.。
2、凝膠電泳法
3、跑瓊脂糖膠,RNA跑得快些,割膠可以得到。
4、利用DNA和RNA在PH不同的苯酚中溶解度不一樣:DNA溶解於鹼性酚,而RNA溶於酸性酚,從而分離。

❷ 分離DNA和RNA主要方法有哪些

[思路分析]
:①取雞血細胞液(其紅細胞橢圓具核,除駱駝外,豬、羊、狗等哺乳動物紅細胞無核),或取新鮮豬肝、菜花、洋蔥等材料.雖然在細菌的轉化實驗中提取的是無核細胞中的DNA,但一般而言,均是從具核的生物材料中提取DNA.當然,在提取出的DNA中也含有一定量的胞質DNA,即線粒體DNA和葉綠體DNA.值得推介的材料是洋蔥,取材容易,操作簡便,效果明顯.將家用加鹽洗潔精與洋蔥碎屑混合研磨並過濾後,再加酒精,微搖後即出現白色的毛絮狀DNA混合物.②使紅細胞溶血破膜以及化學葯劑十二烷基磺酸鈉 SDS(洗潔精的主要成分)或三氯乙酸溶膜.在低滲溶液中,如加蒸餾水使血細胞過度滲透吸水直至破裂,同時用玻棒加速血細胞及核破裂,經一級過濾後濾出液為DNA核蛋白和RNA核蛋白.對於菜花、洋蔥等植物材料,在研磨破壞其細胞壁的同時,可考慮適量加入乙二胺四乙酸EDTA以防止DNA酶解.③利用DNA和RNA溶解度的不同析出DNA.在濃氯化鈉溶液(2 mol/L)中,DNA核蛋白的溶解度很大,而RNA核蛋白的溶解度很小.在稀氯化鈉溶液(0.14mol/L)中DNA的溶解度最低,蛋白質的溶解度很高而出現鹽溶現象,經二級過濾後濾出液主要為DNA粗製品.④DNA不溶於酒精,經三級過濾後,再利用乙醇沉澱法使其他物質溶於酒精而進一步純化DNA.⑤二苯胺或甲基綠鑒定法即DNA遇二苯胺(沸水浴)被染成藍色,遇甲基綠被染成藍綠色,且顏色的深淺與DNA純化程度有關.在此過程中設計對照實驗,以增強實驗中二苯胺對DNA專一性顯色結果的可信度.

❸ 提取DNA的方法總結與比較

dna提取是一項經常要做的實驗,下面我們就總結了四種dna提取方法並做詳細說明和比較。

一.濃鹽法提取dna:

A. 利用RNA和DNA在電解溶液中溶解度不同,將二者分離,常用的方法是用1M 氯 納提取化鈉抽提,得到的DNP粘液與含有少量辛醇的 氯仿一起搖盪,使乳化,再離心除去蛋白質,此時蛋白質凝膠停留在水相及氯仿相中間,而DNA位於上層水相中,用2倍體積95%乙醇可將DNA 鈉鹽沉澱出來.

B. 也可用0.15 MNaCL液反復洗滌細胞破碎液除去RNP,再以1MNaCL提取脫氧核糖蛋白,再按氯仿---異醇法除去蛋白.

兩種方法比較,後種方法使核酸降解可能少一些.

C.以稀鹽酸溶液提取DNA 時,加入適量去污劑,如SDS可有助於蛋白質與DNA 的分離。在提取過程中為抑制組織中的DNase對DNA 的降解作用,在氯化鈉溶液中加入檸檬酸鈉作為金屬離子的烙合劑.通常用.15MNaCL,0.015M檸檬鈉,並稱SSC溶液,提取DNA.

二.陰離子去污劑法提取dna: 用SDS或二甲苯酸鈉等去污劑使蛋白質變性,可以直接從生物材料中提取DNA .由於細胞中DNA與蛋白質之間常借靜電引力或配位鍵結合,因為陰離子去污劑能夠破壞這種價鍵,所以常用陰離子去污劑提取DNA

三.苯酚抽提法提取dna:苯酚作為蛋白變性劑,同時抑制了DNase的降解作用.用苯酚處理勻漿液時,由於蛋白與DNA 聯結鍵已斷,蛋白分子表面又含有很多極性基團與苯酚相似相溶。蛋白分子溶於酚相,而DNA溶於水相。離心分層後取出水層,多次重復操作,再合並含DNA 的水相,利用核酸不溶於醇的性質,用乙醇沉澱DNA 。此時DNA是十分粘稠的物質,可用玻璃漫漫繞成一團,取出。此法的特點是使提取的DNA保持天然狀態

四.水抽提法提取dna:利用核酸溶解於水的性質,將組織細胞破碎後,用低鹽溶液除去RNA,然後將沉澱溶於水中,使DNA充分溶解於水中,離心後收集上清液.在上清中加入固體氯化鈉調節至2.6M.加入2倍體積95%乙醇,立即用攪拌法攪出.然後分別用66% ,80%和95%乙醇以及丙銅洗滌,最後在空氣中乾燥,既得DNA樣品.此法提取的DNA中蛋白質含量較高,故一般不用.為除蛋白可將此法加以改良,在提取過程中加入SDS.

❹ 分離DNA和RNA主要方法有哪些

鹽析法 DNA和蛋白質等其他成分在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同 利用這一特點 選擇適當的鹽濃度就能使DNA充分溶解 而使雜質沉澱 或者相反 以達到分離目的 DNA在NaCl溶液中的溶解度先增大後減小 在DNA溶解度最低時 DNA從溶液中析出 而其他雜質還留在溶液中 達到粗提取的目的
酶水解法 採用RNase(可以買)水解雜質RNA如果混入DNase酶可以採用100度加熱15min使其失活 RNase不會失活 反之採用DNase可以提取RNA 混了RNase、時加入蛋白酶K或加碘乙酸鈉

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