A. jc-1檢測線粒體膜電位時應注意什麼
1）原理：JC-1是一種廣泛用於檢測線粒體膜電位(mitochondrial membrane potential)△Ψm 的理想熒光探針。在線粒體膜電位較高時，JC-1聚集在線粒體的基質(matrix)中，形成聚合物(J-aggregates)，可以產生橙色熒光；在線粒體膜電位較低時，JC-1不能聚集在線粒體的基質中，此時JC-1為單體(monomer)，可以產生綠色熒光。這樣就可以非常方便地通過熒光顏色的轉變來檢測線粒體膜電位的變化。常用紅綠熒光的相對比例來衡量線粒體去極化的比例。
（2）材料與儀器
JC-1購自Sigma公司，分子量652.23，用DMSO溶解，儲存濃度為5 mg/ml，終濃度稀釋成10 µg/ml; 熒光顯微鏡，多功能熒光酶標儀
（3）步驟
① 接種細胞：96孔板，接種細胞數為每孔1.5萬；或內置蓋玻片的24孔板，每孔細胞數為9萬。
② 處理：接種24小時後用有糖earle』s 液洗兩遍, 給予相應處理（氧化應激或葯物）。
③ JC-1孵育：用有糖earle』s 液洗1遍，並換上終濃度為10µg/ml JC-1培養箱孵育20 min.
④ 檢測：用有糖earle』s 液洗2遍，蓋玻片可在熒光顯微鏡下檢測熒光變化，96孔板在多功能熒光酶標儀檢測熒光值，檢測JC-1單體時激發光設置為488nm，發射光設置為530nm；檢測JC-1聚合物時，激發光設置為529nm，發射光設置為590nm
（4）注意點
稀釋JC-1時要迅速，否則易聚集，不易溶解；建議用碧雲天的JC-1線粒體膜電位檢測試劑盒。