抗體檢測方法驗證

⑴ 血站是用什麼方法檢測HIV抗體的

HIV-抗體檢測方法
常見檢測方法
目前作為診斷手段使用的檢測主要包括抗HIV病毒抗體檢測、病毒培養、核酸檢測和抗原檢測。其中對病毒抗體的檢測是最常規使用的方法，這不但是由於這類檢測特異性、敏感性較高，方法相對簡便、成熟，更重要的原因是HIV抗體在病毒感染後除早期短暫的」窗口期」外的整個生命期間長期穩定地存在並可被檢測到。在一些特殊情況下，當抗體檢測無法滿足HIV感染診斷的需要時，病毒分離及測定、核酸檢測、抗原檢測可作為輔助手段使用，這包括對非典型血清學反應樣品的診斷、HIV感染的窗口期診斷、新生兒早期診斷和對特殊樣品的診斷。 一、 酶聯免疫吸附試驗（ELISA）
目前應用的ELISA法有8種之多。它們的特異性和敏感性超過99%。
二、 顆粒凝集法（PA）
PA為快速、簡便的一種篩選方法。如屬陽性，應經WB證實。PA不需任何特殊儀器，其結果用肉眼可判別。全過程僅需5分鍾。缺點有假陽性，且價格昂貴。
三、快速試劑
(一)人類免疫缺陷病毒(HIV)1+2型抗體診斷試劑(膠體硒法)
雅培人類免疫缺陷病毒抗體診斷試劑(膠體硒法)是用於體外，肉眼觀察，定性的免疫分析，檢測血清或血漿中的HIV-1和HIV-2抗體，用於幫助受感染個體的HIV-1和HIV-2抗體。本品僅用於無償獻血員現場初篩及臨床緊急情況的使用，本品檢測陽性者，需進行進一步篩查確認。
(二)InstantCHEKTM-HIVl+2金標快速診斷試劑
InstantCHEKTM-HIV1+2是一種快速、簡單、靈敏的檢驗方法， 用以檢測艾滋病病毒(HIV-1和HIV-2)的抗體。該方法適用於初篩檢測，凡由該試劑測定為陽性者，需用另一種方法檢測如ELISA或用蛋白印記法確定。
四、HIV-抗體確認實驗
免疫印跡試驗（WB）、條帶免疫試驗（LIATEK HIVⅢ）、放射免疫沉澱試驗（RIPA）及免疫熒光試驗（IFA）。國內常用的確認試驗方法是WB。
(一_免疫印跡實驗(westernblot，WB)是廣泛用於許多傳染病診斷的實驗方法，就HIV的病原學診斷而言，它是首選的用以確認HIV抗體的確認實驗方法，WB的檢測結果常常被作為鑒別其他檢驗方法優劣的「金標准」。
確認試驗流程:
有HIV-1/2混合型和單一的HIV-1或HIV-2型。先用HIV-1/2混合型試劑進行檢測，如果呈陰性反應，則報告HIV抗體陰性；如果呈陽性反應，則報告HIV-1抗體陽性；如果不滿足陽性標准，則判為HIV抗體檢測結果不確定。如果出現HIV-2型的特異性指示條帶，需用HIV-2型免疫印跡試劑再做HIV-2的抗體確認試驗，呈陰性反應，報告HIV-2抗體陰性；呈陽性反應則報告HIV-2抗體血清學陽性,並將樣品送國家參比實驗室進行核酸序列分析，
WB的敏感性一般不低於初篩實驗，但它的特異性很高，這主要是基於HIV不同抗原組分的分離以及濃縮和純化，能夠檢測針對不同抗原成分的抗體，因而能夠用WB方法鑒別初篩實驗的准確性。從WB確認試驗結果看出，初篩試驗盡管選擇質量較好的試劑，如第三代ELISA，仍會有假陽性出現，必須通過確認試驗才能得出准確結果。
(二)免疫熒光實驗(IFA)
IFA法經濟、簡便、快速，曾被FDA推薦用於WB不確定樣品的診斷。但需要昂貴的熒光顯微鏡，需要受過良好訓練的技術人員、觀察和解釋結果易受主觀因素的影響，結果不宜長期保存，IFA不宜在一般的實驗室開展和應用。

⑵ 怎樣檢測某個抗體的特異性和靈敏度

如何選擇 一抗 二抗！ 你真是問對人了！
1. 一抗選擇
（1）確定抗體的名字，注意中英文名字、別名、亞型等信息。
（2）確定您的實驗類型，Elisa，WB，IHC，ICC，或者是FACS。biorbyt的每種抗體說明書都會列出抗體經驗證過適用的實驗類型，如果抗體說明書沒有提及的應用類型，並不意味著該抗體不適用於此種分析應用類型，而僅是說明尚未經過此種實驗驗證。
（3）確定實驗樣本的種屬，Human，Mouse，Rat等。我們的抗體說明書都列出該抗體驗證過的適用物種，可根據說明書列出已驗證的種屬來選擇適合你實驗需要的抗體。
（4）樣本抗原蛋白的結構性質。了解樣本抗原蛋白的結構性質有助於選擇最合適的抗體，待測樣本蛋白的結構域和樣本在提取和處理過程中是否會變性，蛋白空間構象的改變，會影響抗體的免疫親和反應。
（5）單多克隆抗體的選擇。一般單克隆抗體特異性強，但親和力相對小，檢測抗原靈敏度相對就低；而多克隆抗體特異性稍弱，但抗體的親和力強，靈敏度高，但易出現非特異性染色（可以通過封閉等避免）。
2. 二抗選擇
（1）種屬來源。主要根據一抗種屬來源而決定二抗來源，如一抗是小鼠來源，那二抗就買抗小鼠的即可（羊、兔等均可）。
（2）標記物的選擇。有HRP、Biotin、熒光素等標記物。免疫組化，WB二抗主要選擇HRP，Biotin標記的二抗，而免疫熒光染色可按實驗需要選擇不同熒光素標記的二抗，如FITC、Cy3、PE等。

⑶ 艾滋病抗體的檢查方法

艾滋病病毒抗體檢測
艾滋病病毒抗體檢測：檢測血液中的艾滋病病毒抗體是目前最常用的檢測艾滋病病毒感染的實驗室方法，一般要經過兩個步驟：首先做初篩試驗，如果為陽性，再做確認試驗，確認試驗陽性才可診斷為艾滋病病毒感染。
常用的方法有：
1病原檢測病原檢測主要指用病毒分離培養、電鏡形態觀察、病毒抗原檢測和基因測定等方法從宿主標本中直接檢測病毒或病毒基因。由於前兩種方法難度大，且需要特殊設備和專業技術人員。因此僅抗原檢測和RT-PCR(反轉錄－PCR)可用於臨床診斷。
2 抗體檢測血清中HIV抗體是判斷HIV感染的間接指標。根據其主要的適用范圍，可將現有HIV抗體檢測方法分為篩檢試驗和確證試驗。
3 確證試劑篩檢實驗陽性血清的確證最常用的是Western blot（WB），由於該法相對窗口期較長，靈敏度稍差，而且成本高昂，因此只適合作為確證實驗。隨著第三代和第四代HIV診斷試劑靈敏度的提高，WB已越來越滿足不了對其作為確證實驗的要求。FDA批準的另一類篩檢確證試劑是-免疫熒光-試驗（IFA）。IFA比WB的成本低，而且操作也相對簡單，整個過程在1-1.5小時內即可結束。此法的主要缺點是需要昂貴的熒光檢測儀和有經驗的專業人員來觀察評判結果，而且實驗結果無法長期保存。現在FDA推薦在向WB不能確定的供血員發布最終結果時以IFA的陰性或陽性為准，但不作為血液合格的標准。
4篩檢試驗篩檢試驗主要用於對供血員進行篩查，因此要求操作簡便，成本低廉，而且靈敏、特異。目前世界上主要的篩檢方法仍然是ELISA，還有少數的顆粒凝集試劑和快速ELISA試劑。ELISA有很高的靈敏度和特異性，操作簡單，僅需要實驗室配備酶標儀和洗板機即可應用，特別適合於試驗室大規模篩檢使用。顆粒凝集實驗是另一種操作簡單方便，成本低廉的檢測方法，該方法結果可通過肉眼判定，靈敏度很高，特別適合發展中國家或大量篩選供血員時使用，缺點是必須使用新鮮樣品，特異性較差。80年代後期發展起來的斑點印跡檢測（Dot-blot assay）是一種快速ELISA（Rapid ELISA）方法，這種方法操作極為簡便，過程短暫，整個過程多數在5-10分鍾內甚至3分鍾內即可結束，但該法比ELISA和顆粒凝集試劑昂貴得多。金免疫測定是以膠體金為標記物，以硝酸纖維素膜為載體的固相免疫測定，分為滲濾和層析兩種形式。用於HIV抗體檢體金試紙條屬於金免疫層析，且大多數為間接法及雙抗原夾心法，兩種方法各有優缺點，但都簡單而快速，數分鍾即可得出結論，不需儀器設備，操作人員不需特殊訓練，試劑穩定，適用於單份測定等。

⑷ 抗體效價的檢測方法

多采免疫雙向擴散法
【基本原理】
*指抗原和抗體在同一凝膠內都擴散，彼此相遇後形成特異性的沉澱線。
-將抗原與抗體分別加入同一凝膠板中兩個相隔一定間距的小孔內，使兩者進行相互擴散，當抗原抗體濃度之比相適宜時，彼此相遇形成一白色弧狀沉澱線。
*優缺點：簡便，但敏感性較低，易出現假陰性結果。
免疫雙向擴散法的操作步驟
*將玻璃板用水洗凈後用75%乙醇沖洗，晾乾後放在水平台上備用。
*將1%agar 融化後，置56℃水浴。
*在玻璃板上鋪膠，約1.5mm 厚，凝固後打孔(直徑 3rnm)，孔間距10mm。
l 抗血清(抗體預先作系列倍比稀釋即ml 抗原樣品，周圍孔內每孔加5m*中心孔加5 1:2、1:4、1:8、1:16、1:32等比例)。
*凝膠板置濕盒內，室溫擴散24h。
*觀察結果。
凝聚胺法測定孕婦血清IgG抗-A（抗-B）效價的方法待檢血清與0.2 mol/L 2?硫基乙醇(2?Me)在試管內等量混合，放入37℃水浴1 h以破壞血清中的IgM抗體，吸取處理後的血清用生理鹽水倍比稀釋，稀釋度分別為2、4、8、16、32、64、128、256、512、1 024，然後每管加入相應的3%～5%紅細胞懸液，置37℃水浴30 min，觀察是否凝集，不凝集者用生理鹽水洗滌3次，然後加入低離子鹽水介質(LIM液)，混勻，滴入2滴凝聚胺，混勻後3 000 r/min離心30 s，扣搖肉眼可見明顯的凝集(無凝集者須重做)，再加入2滴重懸液，輕搖，觀察凝集是否消失，凝集1 min內不消失者表示受檢者血清中含有IgG型抗?A(抗?B)。
抗體效價檢測的其它方法
*環狀沉澱試驗，需較多的抗血清，現已很少用；
*對流免疫電泳，比瓊脂免疫雙擴散法敏感，較簡便、實用；
*酶聯免疫吸附試驗 (ELISA)。
通常抗體效價低於1：128是沒有問題的，有些孕婦高達1：256以上，而且抗體效價最好1個月查上一次，有時候會有所變化。

⑸ 如何用ELISA的方法驗證抗原抗體是否是最佳的組合

目前做多的方式是採用pH9.6的碳酸鹽緩沖液包被，4℃過夜包被或者37℃包被2h，包被的最適濃度隨固相載體和包被物的性質變化，一般蛋白質的包被濃度為1-5ug/ml，要明確針對特定包被抗原的最適包被濃度需要通過實驗來確定。
aware可自測不用抽血祝您健康天
貓！
封閉是否必要，取決於ELISA的模式及具體的實驗條件。一般說來，雙抗體夾心法，只要酶標記物是高活性的，操作時洗滌徹底，不經封閉也可得到滿意的結果。而在間接法測定中，封閉一般是必不可少的。
常用的封閉劑有0.05%-0.5%的BSA、10%的小牛血清、1%明膠、5%的脫脂奶粉，AbMART推薦使用5%脫脂奶粉，價廉而且封閉能力強，不過5%脫脂奶粉只適合短期內使用，不宜長期保存，所以試劑盒中較少使用

⑹ 如何進行艾滋病病毒抗體檢測

艾滋病病毒抗體檢測方法有初篩試驗和確認試驗組成。初篩試驗結果陽性者再做確認試驗以明確診斷。目前的艾滋病病毒抗體檢測都使用新一代試劑，同時檢測艾滋病病毒1型和艾滋病病毒2型。初篩檢測的方法主要是間接酶聯免疫吸附試驗（ELISA
)，確認檢測的方法為免疫蛋白印跡試驗（WB）。

⑺ 自身抗體的檢測方法有哪些

1、抗核抗體檢測

抗核抗體是一組將自身真核細胞的各種細胞核成分作為靶抗原的自身抗體的總稱，主要是IgG，其次是IgM和IgA，無器官和種屬特異性。ANA在大多數自身免疫性疾病中均可呈陽性，正常老年人也可有低滴度的ANA。ANA檢測在臨床自身免疫病診斷與鑒別診斷中是一個重要的篩查試驗。

2、類風濕因子

類風濕因子是變性lgG刺激機體產生的一種自身抗體，主要存在於類風濕關節炎患者的血清和關節液內。主要為lgM型，也有lgG、lgA、lgD和IgE型。

3、抗中性粒細胞胞漿抗體

抗中性粒細胞胞漿抗體是指與中性粒細胞及單核細胞胞漿成分發生反應的抗體。當中性粒細胞受抗原刺激後，胞漿中的α-顆粒釋放蛋白酶-3、髓過氧化物酶等物質，刺激機體而產生ANCA。

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自身抗體的產生原因：

人體的生長、發育和生存有完整的自身免疫耐受機制的維持，正常的免疫反應有保護性防禦作用，即對自身組織、成分不發生反應。—旦自身耐受的完整性遭到破壞，則機體視自身組織、成分為「異物」，而發生自身免疫反應，產生自身抗體。

正常人體血液中可以有低滴度的自身抗體，但不會發生疾病，但如果自身抗體的滴度超過某—水平，就可能對身體產生損傷，誘發疾病。自身免疫性疾病中有許多自身抗體，其中最重要的是抗核抗體。

⑻ HIV-抗體檢測方法的確認實驗

免疫印跡試驗（WB）、條帶免疫試驗（LIATEK HIVⅢ）、放射免疫沉澱試驗（RIPA）及免疫熒光試驗（IFA）。國內常用的確認試驗方法是WB。
(一_免疫印跡實驗(westernblot，WB)是廣泛用於許多傳染病診斷的實驗方法，就HIV的病原學診斷而言，它是首選的用以確認HIV抗體的確認實驗方法，WB的檢測結果常常被作為鑒別其他檢驗方法優劣的「金標准」。
確認試驗流程:
有HIV-1/2混合型和單一的HIV-1或HIV-2型。先用HIV-1/2混合型試劑進行檢測，如果呈陰性反應，則報告HIV抗體陰性；如果呈陽性反應，則報告HIV-1抗體陽性；如果不滿足陽性標准，則判為HIV抗體檢測結果不確定。如果出現HIV-2型的特異性指示條帶，需用HIV-2型免疫印跡試劑再做HIV-2的抗體確認試驗，呈陰性反應，報告HIV-2抗體陰性；呈陽性反應則報告HIV-2抗體血清學陽性,並將樣品送國家參比實驗室進行核酸序列分析，
WB的敏感性一般不低於初篩實驗，但它的特異性很高，這主要是基於HIV不同抗原組分的分離以及濃縮和純化，能夠檢測針對不同抗原成分的抗體，因而能夠用WB方法鑒別初篩實驗的准確性。從WB確認試驗結果看出，初篩試驗盡管選擇質量較好的試劑，如第三代ELISA，仍會有假陽性出現，必須通過確認試驗才能得出准確結果。
(二)免疫熒光實驗(IFA)
IFA法經濟、簡便、快速，曾被FDA推薦用於WB不確定樣品的診斷。但需要昂貴的熒光顯微鏡，需要受過良好訓練的技術人員、觀察和解釋結果易受主觀因素的影響，結果不宜長期保存，IFA不宜在一般的實驗室開展和應用。
HIV抗體確證試驗結果報告
HIV抗體確證試驗結果用附表3報告。
（1）符合HIV-1抗體陽性判斷標准，報告「HIV-1抗體陽性（+）」，並按規定做好檢測後咨詢、保密和疫情報告工作。符合HIV-2抗體陽性判斷標准，報告「HIV-2抗體陽性（+）」，並按規定做好檢測後咨詢、保密和疫情報告工作。
（2）符合HIV抗體陰性判斷標准，報告「HIV抗體陰性（－）」。如疑似「窗口期」感染，建議進一步做HIV核酸檢測，盡早明確診斷。
（3）符合HIV抗體不確定判斷標准，報告「HIV抗體不確定（±）」，在備注中應註明等待「4周後復檢」。

⑼ ELISA實驗檢測抗體的實驗步驟

操作步驟：
（1）將特異性抗原與固相載體聯結，形成固相抗原。洗滌除去未結合的抗原及雜質。
（2）加稀釋的受檢血清，保溫反應。血清中的特異抗體與固相抗原結合，形成固相抗原抗體復合物。經洗滌後，固相載體上只留下特異性抗體，血清中的其他成份在洗滌過程中被洗去。
（3）加酶標抗抗體,主要根據你的一抗來確定二抗用什麼。可用酶標抗人Ig以檢測總抗體，但一般多用酶標抗人IgG檢測IgG抗體。固相免疫復合物中的抗體與酶標抗體抗體結合，從而間接地標記上酶。洗滌後，固相載體上的酶量與標本中受檢抗體的量正相關。
（4）加底物顯色

間接法由於採用的酶標二抗是針對一類免疫球蛋白分子(如抗人IgG),因此該法只需要換固相抗原，即可用一種酶標二抗檢測各種與抗原相應的抗體，具有更廣泛的通用性。

本法主要用於對病原體抗體的檢測而進行傳染病的診斷。間接法的優點是只要變換包被抗原就可利用同一酶標抗抗體建立檢測相應抗體的方法。

如果有其他問題，可以聯系我，呵呵！