細胞培養方法哪裡可以查到

1. 細胞培養的具體步驟和要求以及注意事項

一、細胞復甦

將凍存細胞從液氮中取出後，在37℃水浴鍋內不斷搖動促進其融化。移人15ml離心管中，加入10ml預熱的DMEM完全培養基，輕輕吹勻，離心，2000rpmX2min，棄上清液。

加入10ml DMEM培養基清洗，棄上清液。加入10ml DMEM完全培養基，輕輕吹打，接種於10cm盤中，在含5%CO2的細胞培養箱中培養。

二、細胞傳代

細胞密度達到80%~90%時．去培養基，10ml PBS清洗2次。加入3ml含0．25%EDTA的胰蛋白酶，放人細胞培養箱3min。加人1ml DMEM完全培養基終止胰酶消化，轉移至15ml離心管。

加入10ml PBS清洗細胞培養盤，轉移至15ml離心管，2000rpmX2min，棄上清液。再加入10ml PBS（經高壓滅菌，保存於40C），吹勻，吸取10微升進行計數，按照1×106/盤接種，在含5%CO2的細胞培養箱繼續培養。

三、細胞凍存

細胞密度達到80%～90%時，去培養基，10ml PBS清洗2次。加入3ml含0.25%EDTA的胰蛋白酶，放人細胞培養箱3min。加入lmlDMEM完全培養基終止胰酶消化，轉移至15ml離心管。加入10ml PBS清洗細胞培養盤，轉移至15ml離心管，2000rpmX2min，棄上清液。

加入lml凍存液（90%血清，10%DMSO），放入凍存盒內（盒內有異丙醇，以保證溫度降低的速度），立即放入一80℃冰箱內，過夜，第二天放入液氮中，可以保存至少兩年，如不放人液氮，可以保存三個月。

凍存液的配製：70%的完全培養基+20%FBS+10%DMSO.DMSO要慢慢滴加，邊滴邊搖。

注意事項

（1）進入細胞間開始細胞培養時，必須嚴格按照下列步驟操作：

①確定所有的細胞操作用的溶液和耗材都已經消毒並檢測沒有問題，不確定的溶液和耗材請勿使用，除非特殊情況，不要借用別人的溶液。

②確定衣服的袖口已經捲起或者白大褂的袖口已經扎緊。

③確定酒精燈內的酒精量，需要的話及時進行補充。

④確定所有需要用到的溶液和耗材都放在伸手可及的位置。為了方便單手開啟瓶蓋，實驗開始前可以把所有瓶蓋旋松。

⑤盡量不要直接傾倒溶液，除非瓶口沒有被燒壞。如果傾倒失敗，溶液粘在瓶口，請用噴過75%酒精的紙巾仔細清潔瓶口周圍（不要接觸到瓶口）後在火焰上簡單燒灼。

⑥操作時如果不能肯定所用的耗材是潔凈的，必須及時更換。

⑦實驗完畢及時收拾，保持工作區域清潔整齊，最後用75%酒精清潔檯面。

（2）細胞污染的預防

①實驗用品防止污染。細胞培養所用試劑、耗材、器材的清洗、消毒要徹底，各種溶液滅菌要仔細，並在無菌實驗檢測陰性後才能使用。操作室及剩餘的無菌器材要定期清潔、消毒、滅菌。

②操作過程防止污染。

③穿著容易起靜電或吸附灰塵的衣物必須更換為白大褂後才能進入細胞間。

④實驗開始前需要確定戴的手套沒有問題，只要接觸過生物安全櫃之外的物品，必須及時對手套進行消毒。

⑤進入細胞培養間後關好門，坐下來盡量少走動以免影響生物安全櫃的風簾。工作開始前要先用75%酒精棉球擦手和瓶蓋。事先要嚴格檢查所用的器材、溶液和細胞，不要把污染品或未經消毒的物品帶入無菌室內，更不能隨便使用，以免造成大規模污染。

⑥細胞操作時動作要輕，必須在火焰周圍無菌區內打開瓶口，並將瓶口放在火焰周圍簡單轉動燒灼，注意不要讓火焰把塑料瓶口燒化。

⑦實驗操作時生物安全櫃的隔板要盡可能放低，盡量減少談話，打噴嚏或咳嗽時絕對不能對著工作區，以免造成不必要的污染。

⑧瓶蓋應當倒放在遠離自己的地方，以避免瓶蓋被誤操作所污染。

⑨不要從敞開的容器口上方經過，以避免衣服上掉落不明物體對細胞的污染。

⑩實驗操作時要注意及時更換巴斯德吸管、移液槍槍頭和移液管，切勿一根管子做到底。一旦發現接觸了非潔凈或者無法確定潔凈的物品必須直接丟棄。實驗完畢應及時收拾，保持實驗室清潔整齊，最後用75%酒精清潔檯面。

（3）防止細胞交叉污染

①在進行多種細胞培養操作時，所用器具要嚴格區分，最好作上標記便於辨別。按順序進行操作，一次只處理一種細胞，多種細胞多種操作一起進行時易發生t昆亂。

②在進行換液或傳代操作時，粘有細胞的移液槍頭和移液管不要觸及試劑瓶瓶口，以免把細胞帶到培養基中污染其他細胞。

③所有細胞一旦購置，或從別處引入，或自己建立，必須及時保種凍存，一旦發生污染可重新復甦細胞，繼續培養。

(1)細胞培養方法哪裡可以查到擴展閱讀：

細胞培養（cell culture）是指在體外模擬體內環境（無菌、適宜溫度、酸鹼度和一定營養條件等），使之生存、生長、繁殖並維持主要結構和功能的一種方法。細胞培養也叫細胞克隆技術，在生物學中的正規名詞為細胞培養技術。

不論對於整個生物工程技術，還是其中之一的生物克隆技術來說，細胞培養都是一個必不可少的過程，細胞培養本身就是細胞的大規模克隆。細胞培養技術可以由一個細胞經過大量培養成為簡單的單細胞或極少分化的多細胞，這是克隆技術必不可少的環節，而且細胞培養本身就是細胞的克隆。

細胞培養技術是細胞生物學研究方法中重要和常用技術，通過細胞培養既可以獲得大量細胞，又可以藉此研究細胞的信號轉導、細胞的合成代謝、細胞的生長增殖等。

2. 293T細胞的培養實驗方法步驟資料哪裡有

293T細胞的培養 293T細胞是由293 細胞派生, 表達SV40 大T抗原的人腎上皮細胞系, 被廣泛應用於瞬時轉染以過表達各種目標蛋白, 或是用以包裝病毒。 293T 為貼壁細胞, 這種細胞對培養基的營養成分要求並不高。培養條件為: 完全培養基: 高糖 DMEM, 10% 胎牛血清; 凍存液: 胎牛血清或完全培養基, 10% DMSO。 傳代方法為: 1．吸掉293T 細胞培養瓶內的培養液; 2．吸取適量的無Ca2+ 和Mg2+ 的PBS, 輕輕把貼壁的細胞洗兩遍; 3．加少量的0.05% 胰蛋白酶-EDTA (一般25 cm2 的培養瓶加1 ml, 75 cm2 的培養瓶加2~3 ml), 放到培養箱溫育20 s; 4．細胞消化完畢, 加適量培養液終止消化, 並吹打細胞, 製成均勻的細胞懸液; 5．加足量的培養液, 分裝到新的培養瓶中。值得注意的是, 293T細胞的貼壁性不強, 輕微的干擾就可能使它們脫落。所以, 在更換新鮮培養液或者用PBS沖洗的時候應該小心地添加新的培液進去, 以液體不沖打到貼壁的細胞為好。傳代的時候, 只需要用0.05%胰蛋白酶-EDTA即可輕松把細胞消化下來, 不需要消化很長時間。有些同學反映293T 細胞容易結團不易被吹打開來。如果遇到這樣的情況可以在加了胰蛋白酶溫育一段時間後即拿1 ml 移液槍反復輕輕吹打, 直至肉眼看不到大的細胞塊為止, 然後加適量的培養液混勻, 這時候在顯微鏡下觀察, 可見大多數細胞都是單個的, 只有少量的2~3個細胞聚在一起。一般293T 細胞可以長在塑料的培養瓶底面上直到90% 融合, 再以1∶4~1∶8 的比率傳代。合適的傳代周期為2~3 天。傳代過程中, 消化的時間越短越好, 顯微鏡下觀察到80%細胞脫落即可加培養液中止。完成傳代後放入培養箱前, 應該把培養瓶或培養皿沿X、Y軸方向水平移動幾下, 防止細胞都聚在中間或者四周。冷凍293T 細胞的凍存液可以用95% 小牛血清加5% 二甲基亞碸, 復甦率很高。 293T細胞的生長狀態直接關繫到包裝病毒和轉染的效率, 應盡量選擇傳代次數少, 培養總時間短的細胞。從細胞形態上看, 相差顯微鏡下觀察立體感強並且形態良好的細胞產病毒率或者轉染效率都很高。 雖然293T細胞的應用非常廣泛, 幾乎每個實驗室都有一株自己的293T 細胞株, 但是經常有同學提出: 為什麼在正常的培養條件下, 細胞卻很難傳代下去, 包裝病毒效率很低, 對轉染效率也不滿意呢？ 事實上, 引起類似問題的元兇是一種生物界最小的原核細胞生物－支原體。支原體污染後, 它們不會使細胞死亡而是與細胞長期共存, 培養基不發生渾濁, 細胞無明顯變化, 外觀上給人以正常感覺, 但事實上細胞正在受到到多方面影響, 如引起細胞變形, 影響DNA 合成, 抑制細胞生長等。我們曾經收集到四株分別來自四個不同實驗室的293T 細胞, 經檢測均為支原體陽性, 令人驚訝的是這四株細胞都已經不是典型的293T 細胞形態, 每兩株之間比較竟然形狀各不相同, 很難相信這是同一種細胞！這些支原體陽性細胞普遍傳代周期長, 顯微鏡下觀察細胞碎片多, 長期支原體感染已經使這些細胞羸弱不堪, 胞內DNA 和蛋白質合成受到嚴重的影響。 因此, 有效地防治支原體污染, 杜絕交叉感染對提高實驗效率, 穩定實驗結果至關重要。我們的經驗是把防治支原體污染作為細胞培養的一項日常工作, 除了對細胞培養設備環境的清潔外, 還需在器材消毒, 操作員培訓, 嚴格把關新引入細胞株的質量等方面做大量細致的工作。

3. 大哥大姐，有知道細胞培養方法的嗎給回個貼子。謝謝

我想你可以去看看《中國葯典》2005版葯典（一部、二部均可）附錄中微生物檢查法關於細菌培養的方法，比較詳細，也比較專業。
回答者：泠雨海晨 - 秀才 二級 11-29 20:33

4. 動物細胞培養方法相關資料在哪裡能夠找到

1 圖書館有很多關於動物細胞培養的書
2 資料庫查文獻
3 相關網站，比如http://www.biomart.cn/experiment/430/488/490/index.htm

5. 怎樣查到一個特定細胞株的相關知識和培養條件

ATCC (American Type Culture Collection) 收集了絕大多數細胞的詳細資料。資料庫中有每一種細胞的詳細描述，包括細胞的來源，培養和凍存條件，以及相關文獻等資料。

6. 怎麼搜一個細胞的形態和生長周期和培養條件

首先，如果這種細胞系是最近研究比較熱門的，那麼你可以從文章中找到。如果你養的細胞是從公司買的，那麼公司網站上會有。另外可以根據細胞的類型和物種來源在ATCC網站上查詢

7. 細胞培養一般方法有哪些

細胞培養首先分為原代培養和傳代培養.
一、原代培養需要從組織中消化、分離、純化出單細胞,然後繼續進行傳代、凍存；
二、傳代培養首先進行細胞復甦:
1.應遵守慢凍快融的原則.先將水溫鍋調至37-38度,取出凍存的細胞迅速放入後交細胞面浸至水面以下不斷搖動至融化.
2.在無菌台內將完全培養基加入培養瓶內,然後用無菌吸管從凍存管內取出細胞,置培養瓶內輕輕搖晃,使細胞均勻後置培養箱內培養,24h後換液；也可復甦當時離心（1000rpm 5min左右）後,完全培養基重懸培養,適時換液.
細胞傳代:
1.貼壁細胞:
對於貼壁細胞應先吸(倒)盡培養基,吸的越干凈越好,以免中和後加入的消化液,使強度減弱.PBS清洗2-3次,去除血清和死細胞,50ml培養瓶加入消化液約0.6ml,按此比例進行消化,(根據配製強度經驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養箱約2分鍾,鏡下見細胞收縮變圓或少數脫落後,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,加入2-3ml完全培養基後,輕輕吹打,使細胞基本成單個懸浮,然後收集離心（1000rpm 5min左右）,新鮮培養基重懸沉澱,加入完全培養基後繼續培養或實驗.
2.懸浮細胞:
一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養瓶內,加入完全培養基繼續培養,如要高濃度或需更換新培養基,可先離心（1000rpm,5min左右）後加入完全培養基,輕輕吹勻後,分置其它培養瓶內加入完全培養基繼續培養.

8. 關於細胞培養

當然是細胞培養的那套老套路：
將羊水低速離心獲得細胞，製成細胞懸液。將細胞懸液放入培養基，置入恆溫箱，然後按時換液傳代就可以了。

一般來說腫瘤細胞株最好養。原代細胞就難度大些。方法就是這樣，但具體細節要查專業文獻。

需要設備：超凈工作台，紫外線消毒設備，離心機，恆溫箱，控溫水浴箱，高壓消毒設備……
需要儀器：培養皿或培養瓶或多孔板，玻棒，燒杯若干，酒精瓶，tip管，移液管若干，洗耳球若干，離心管三兩根，鹽水瓶若干（裝液體用）……
需要液體：DMEM無糖或含糖或別的高級培養基，FBS或者胎牛血清（按照文獻添加），緩沖液，蒸餾水，三蒸水……

更具體的過程已經有寫成了一本書的叫做《細胞培養技術》（研究生教材）。最直接的操作過程：找實驗室的負責人交錢給他，他會負責教到你會為止。

9. 細胞培養具體的一般流程

你是要培養懸浮細胞還是貼壁細胞？原代細胞還是幹細胞？不同的細胞培養流程都不太一樣。你可以上ATCC查相關細胞的培養條件、使用的培養基等相關信息

10. 細胞培養的方法有哪些求詳解

細胞培養首先分為原代培養和傳代培養。
原代培養需要從組織中消化、分離、純化出單細胞，然後繼續進行傳代、凍存；
傳代培養首先：
細胞復甦:
1.應遵守慢凍快融的原則.先將水溫鍋調至37-38度,取出凍存的細胞迅速放入後交細胞面浸至水面以下不斷搖動至融化.
2.在無菌台內將完全培養基加入培養瓶內,然後用無菌吸管從凍存管內取出細胞,置培養瓶內輕輕搖晃,使細胞均勻後置培養箱內培養，24h後換液；也可復甦當時離心（1000rpm 5min左右）後，完全培養基重懸培養，適時換液。
細胞傳代:
1.貼壁細胞:
對於貼壁細胞應先吸(倒)盡培養基,吸的越干凈越好,以免中和後加入的消化液,使強度減弱.PBS清洗2-3次，去除血清和死細胞，50ml培養瓶加入消化液約0.6ml,按此比例進行消化,(根據配製強度經驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養箱約2分鍾,鏡下見細胞收縮變圓或少數脫落後,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,加入2-3ml完全培養基後,輕輕吹打,使細胞基本成單個懸浮,然後收集離心（1000rpm 5min左右）,新鮮培養基重懸沉澱，加入完全培養基後繼續培養或實驗.
2.懸浮細胞:
一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養瓶內,加入完全培養基繼續培養,如要高濃度或需更換新培養基，可先離心（1000rpm,5min左右）後加入完全培養基,輕輕吹勻後,分置其它培養瓶內加入完全培養基繼續培養.
具體更詳細的你還是看看細胞培養的專業書吧！