血球计数板使用方法

① 血球计数板使用方法

血球计数板是用于测定微生物数量的精密工具。在进行操作前，应将待测菌悬液稀释至适当浓度，一般斜面稀释100倍，以确保每小格内的菌体数量可计数。

接着，准备一块洁净的血球计数板，用盖玻片覆盖计数区。将菌悬液均匀摇匀后，用滴管吸取适量液体，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片边缘滴入，让菌悬液自行填满计数区，注意避免气泡产生，并用吸水纸吸去多余液体。

等待一段时间，让细胞沉降，不再随液体漂移。然后，将血球计数板置于显微镜下，先使用低倍镜找到计数区，再切换至高倍镜进行观察与计数。在观察时，应适度减弱光线强度，以便更清晰地识别细胞。

对于16中方格组成的计数区，需计数左上、左下、右上、右下的4个中方格（共100个小格）内的菌数。若计数区有25中方格，则还需计入中央1中方格的菌数（共80个小格）。为确保计数准确性，应统一规定如何处理位于格线上的细胞。例如，如果菌体位于大方格的线上，仅计数上线不计下线，仅计数左线不计右线，以减少误差。

对于出芽的酵母菌，当芽体达到母细胞大小的一半时，可将其作为两个菌体计算。每个样品应重复计数2-3次（每次数值不应相差过大，否则应重新操作），并根据公式计算出每毫升（克）菌悬液所含细胞数量。

完成计数后，小心取下盖玻片，用清水冲洗血球计数板，避免使用硬物洗刷或抹擦，以保护网格刻度。将血球计数板自然晾干或用吹风机吹干后，存放在盒内。

血球计数板被用以对人体内红、白血球进行显微计数之用，也常用于计算一些细菌、真菌、酵母等微生物的数量，是一种常见的生物学工具

② 血球计数板的使用方法

使用方法如下：

1.视待测菌悬液浓度，加无菌水适当稀释（斜面一般稀释100倍），以每小格的菌数可数为度。

2．取洁净的血球计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片。

3．将菌悬液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘滴入一小滴（不宜过多），让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区，勿使气泡产生，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。也可以将菌悬液直接滴加在计数区上（不要使计数区两边平台沾上菌悬液，以免加盖盖玻片后，造成计数区深度的升高），然后加盖盖玻片（勿使产生气泡）。

4．静置片刻，使细胞沉降到计数板上，不再随液体漂移。将血球计数板放置于显微镜的载物台上夹稳，先在低倍镜下找到计数区后，再转换高倍镜观察并计数。由于生活细胞的折光率和水的折光率相近，观察时应减弱光照的强度。

5．计数时若计数区是由16个中方格组成，按对角线方位，数左上、左下、右上、右下的4个中方格（即100小格）的菌数。如果是25个中方格组成的计数区，除数上述四个中方格外，还需数中央1个中方格的。

菌数（即80个小格）。为了保证计数的准确性，避免重复计数和漏记，在计数时，对沉降在格线上的细胞的统计应有统一的规定。如菌体位于大方格的双线上，计数时则数上线不数下线，数左线不数右线，以减少误差。即位于本格上线和左线上的细胞计入本格，本格的下线和右线上的细胞按规定计入相应的格中。见右图：即本格中计数细胞为3个。

6．对于出芽的酵母菌，芽体达到母细胞大小一半时，即可作为两个菌体计算。每个样品重复计数2-3次（每次数值不应相差过大，否则应重新操作），按公式计算出每mL（g）菌悬液所含细胞数量。

7．测数完毕，取下盖玻片，用水将血球计数板冲洗干净，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免损坏网格刻度。洗净后自行晾干或用吹风机吹干，放入盒内保存。

(2)血球计数板使用方法扩展阅读:

计数公式

红细胞数(RBCs)/L=N/5×25×10×106×200

N为：五个中方格的RBC总数

N/5为：5个中方格（粉红色区域）的平均RBC数量（然后推及至中央大方格中每一个中方格RBC的数量）

N/5×25为：中央大方格RBC总数（即：0.1mm3（ul）的RBC总数）

N/5×25×10为：1mm3（ul）RBC总数

N/5×25×10×106为：1L的RBC总数

200为：血液的稀释倍数

公式简化后：红细胞数/L=N×5×107×稀释倍数

公式前面部分都是换算成每微升血多少该计数细胞；最后都是由微升换算到升，乘以10的6次方

(1)目镜测微尺每格长度=两个重叠刻度间物镜测微尺格数×10/两个重叠刻度间目镜测微尺格数

(2)以同样方法,分别在不同倍率的物镜下测定测微尺上每格的实际长度.

(3)如此测定后的目镜测微尺的尺度,仅适用于测定时所用的显微镜的目镜和物镜的放大倍数.若更换物镜,目镜的放大倍数时,必须再进行校正标定.

参考资料:血球计数板-网络