A. DNA测序有哪些方法
1. 第一代测序技术：荧光标记的Sanger法
在分子生物学研究中，DNA序列分析是进一步研究和改造目的基因的基础。Sanger法，一种双脱氧核糖核酸链末端终止法，由Sanger于1977年发明，并得到了广泛应用。该方法通过在特定点开始，随机在特定碱基处终止，并在每个碱基后进行荧光标记，生成以A、T、C、G结束的四组不同长度的一系列核苷酸。这些核苷酸在尿素变性的PAGE胶上电泳检测，从而获得可见的DNA碱基序列。
2. 第二代测序技术：循环阵列合成测序法
第二代测序技术中，序列是通过读取DNA聚合酶或DNA连接酶在将碱基连接到DNA链上过程中释放出的光学信号来间接确定的。这个过程需要昂贵的光学监测系统，并要记录、存储和分析大量的光学图像，这增加了仪器的复杂性和成本。此外，依赖生物化学反应读取碱基序列也增加了试剂和耗材的使用，在测序成本中占有相当大的比例。因此，直接读取序列信息，不使用化学试剂，对于进一步降低测序成本具有重要意义。
3. 第三代测序技术：直接测序
第三代测序技术将基因组DNA随机切割成大约100 kb左右的片段，制成单链并与六寡聚核苷酸探针杂交。然后，驱动结合了探针的基因组文库片段通过可寻址的纳米孔阵列，通过测量每个孔的离子电流变化来确定探针杂交在每个基因组片段上的精确位置。利用基因组片段上杂交探针的重叠区域将基因组片段文库排列起来，建立一组完整的基因组探针。