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常用的去除细胞核方法有

发布时间:2022-06-17 18:32:19

怎么去掉细胞的细胞核啊 反复冻融破碎细胞 主要是想要细胞膜

要细胞膜还不简单啊!搞得那么复杂,还去细胞核,成熟的哺乳动物的红细胞就木有细胞核,直接用这个不就行了,还搞得那么复杂干嘛!

Ⅱ 卵母细胞去核常用方法

在体细胞核移植过程中,采集的卵母细胞需培养到减数第二次分裂中期时;用显微操作去核法去除卵母细胞的核;卵母细胞体积大,易操作,含有丰富的营养物质,且含有能使细胞核全能性表达的物质,因此常用卵母细胞作受体细胞;由于细胞质基因是由卵母细胞提供的,因此生出的犊牛与供体奶牛不完全相同.
故答案为:减数第二次分裂中期 显微操作去核法
卵母细胞体积大,易操作,含有丰富的营养物质;且含有能使细胞核全能性表达的物质
因为细胞质基因是由卵母细胞提供的

如何分离细胞核与线粒体

如何分离细胞核与线粒体
细胞核与线粒体的分级分离
一、原理
细胞内不同结构的比重和大小都不相同,在同一离心场内的沉降速度也不相同,根据这一原理,常用不同转速的离心法,将细胞内各种组分分级分离出来。
分离细胞器最常用的方法是将组织制成匀浆,在均匀的悬浮介质中用差速离心法进行分离,其过程包括组织细胞匀浆、分级分离和分析三步,这种方法已成为研究亚细胞成分的化学组成、理化特性及其功能的主要手段。
匀浆(Homogenization)低温条件下,将组织放在匀浆器中,加入等渗匀浆介质(即0.25mol/L蔗糖一0.003mol/L氯化钙)进行破碎细胞使之成为各种细胞器及其包含物的匀浆。
分级分离(Fractionation)由低速到高速离心逐渐沉降。先用低速使较大的颗粒沉淀,再用较高的转速,将浮在上清液中的颗粒沉淀下来,从而使各种细胞结构,如细胞核、线粒体等得以分离。由于样品中各种大小和密度不同的颗粒在离心开始时均匀分布在整个离心管中,所以每级离心得到的第一次沈淀必然不是纯的最重的颗粒,须经反复悬浮和离心加以纯化。
分析 分级分离得到的组分,可用细胞化学和生化方法进行形态和功能鉴定。
二、细胞核的分离提取
(一)操作步骤
1.用颈椎脱位的方法处死小白鼠后,迅速剖开腹部取出肝脏,剪成小块(去除结缔组织)尽快置于盛有0.9%NaCl的烧杯中,反复洗涤,尽量除去血污,用滤纸吸去表面的液体。
2.将湿重约1g的肝组织放在小平皿中,用量筒量取8ml预冷的0.25mol/L蔗糖一0.003mol/L氯化钙溶液,先加少量该溶液于平皿中,尽量剪碎肝组织后,再全部加入。
3.剪碎的肝组织倒入匀浆管中,使匀浆器下端浸入盛有冰块的器皿中,左手持之,右手将匀浆捣杆垂直插入管中,上下转动研磨3~5次,用3层纱布过滤匀浆液于离心管中,然后制备一张涂片①,做好标记,自然干燥。
4.将装有滤液的离心管配平后,放入普通离心机,以2500rpm,离心15分钟;(1)缓缓取上清液,移入高速离心管中,保存于有冰块的烧杯中,待分离线粒体用;(2)同时涂一张上清液片②做好标记,自然干燥;(3)余下的沉淀物进行下一步骤。
5.用6ml0.25mol/L蔗糖一0.003mol/L氯化钙溶液悬浮沉淀物,以2500rpm离心15分钟弃上清,将残留液体用吸管吹打成悬液,滴一滴于干净的载玻片上,涂片③,自然干燥。
6.将①、②、③涂片用l%甲苯胺兰染色后盖片即可观察。
(二)结果
分别于高倍镜下观察三张涂片,描述镜下所见。
三、高速离心分离提取线粒体
(一)操作步骤
1.将装有上清液的高速离心管,从装有冰块的烧杯中取出,配平后,以17000rpm离心20分钟,弃上清,留取沉淀物。
2.加入0.25mol/L蔗糖一0.003mol/L氯化钙液lml,用吸管吹打成悬液,以17000rpm离心20分钟,将上清吸入另一试管中,留取沉淀物,加入0.1ml 0.25mol/L蔗糖一0.003mol/L氯化钙溶液混匀成悬液(可用牙签)。
3.取上清液和沉淀物悬液,分别滴一滴于干净载玻片上(分别标记④、⑤涂片),各滴一滴0.02%詹纳斯绿B染液盖上盖片染20分钟。
(二)结果
油镜下观察,颗粒状的线粒体被詹纳斯绿B染成蓝绿色。

Ⅳ 怎样使用离心的方法去除卵母细胞细胞核

单纯的使用离心法去除卵母细胞的的细胞核好像效果没有那么好,看最近的学术文章上好像都提倡“离心法+盲吸法”。
实验表明:以2,000r/min将卵母细胞离心10min后,有86.6%卵母细胞的极体与染色体之间夹角在20°以内,此时去核效率最高(87.4%):将卵母细胞离心后,对随后的重构胚发育无影响。因此,采用离心辅助去核的方法可以显着提高牛卵母细胞的去核效率。

Ⅳ 细胞拆合技术除去细胞核的方法

1.显微操作,用吸管移去核.
2.用细胞松弛素B处理细胞,使细胞排核,再通过离心得到无核细胞.
3.紫外线或X射线照射细胞,使细胞核失活.

Ⅵ 分离细胞质和细胞核的方法

现在可以用显微注射的方法!
当然也可以用离心法

Ⅶ 是不是有一种细胞显微钩针可以把细胞核取出

你说的应该是盲吸法或者是半卵法去核——在显微镜下用玻璃针在细胞膜做一切口,然后用平口去核管沿切口插入,吸取细胞核以及附近胞质。当年多利羊的克隆好像就是用的此种方法,当然还有其他方法如微分干涉和极性显微镜去核法,离心去核法,化学试剂去核法等。

Ⅷ 目前核移植技术中普遍使用的去核方法是

目前核移植技术中普遍使用的去核方法是显微操作去核法。还有人采用其他方法,如梯度离心,紫外光短时间照射,化学物质处理等。这些方法是在没有刺破透明带或卵母细胞质膜的情况下,去除细胞核或使卵细胞核DNA变性,从而达到去核目的。
具体的实验操作是,通过显微操作去除卵母细胞中的核,由于MⅡ期卵母细胞核的位置靠近第一极体,用微型吸管可一并吸出细胞核与第一极体。
希望可以帮到你

Ⅸ 动物细胞核移植普遍使用的去核方法

动物细胞核移植技术:体细胞核移入除去核的卵母细胞
动物细胞融合技术:两个或多个动物细胞融合成一个细胞的过程,融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞,称为杂交细胞

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