畜禽斑治上常用的给药方法有哪些

‘壹’ 治疗肝斑最佳方法是什么

坚持用黄瓜片,薯仔片贴在长斑的地方. 另外要去医院了解一下为什么会长斑.和身体有关吧我想. 以下可以参考: 斑的分类 1、活性斑：由酷胺酸酶活跃，造成性质不稳定，受外界光照及内分泌等因素影响，颜色深浅会变化，可祛除，常见的有：黄褐斑、日晒斑、妊娠斑、黑斑。 2、定性斑：性质稳定，不受外界因素影响而发生变化，一旦祛除原有部份不会再长出来，常见的有：遗传斑、雀斑、老年斑、色素痣。 色斑特点： 1、雀斑：与遗传有关，3%与常染色体与血液有关，日晒后颜色加重，分布为点状彼此孤立存在，直径不超过0.5公分，常分布于脸颊、手部与肩部，在5-7岁开始出现，不能根除只能淡化； 2、黄褐斑：又称蝴蝶斑、肝斑，呈现淡褐色，呈片状，斑片大小不等，边界清晰，形状不规则，不高出皮肤，常见于面部，对称于两颊，主要原因跟内分泌、女性荷尔蒙失调有关； 3、妊娠、晒斑：后天因素，由紫外线造成，形成大小不规则； 4、黑斑：金属斑、反弹斑，后天形成与化妆品有关，长期使用彩妆或重金属化妆品，含铅、汞，可以根 5、老年斑：自然老化，生理下降，代谢迟缓造成，形状大多高于皮肤，一般在脸部、手部。 长斑的五大原因： 1、外因：紫外线照射，使用不良化妆品，外界刺激擦伤； 2、内因：内分泌失调： A、怀孕引起的酷胺酸酶活路，导致黑色素沉着； B、酸碱失调体质偏酸会导致新陈代谢缓慢，引起色素沉着； C、营养不良、缺乏维生素、新陈代谢减慢、导致斑点。 3、精神压力大、过度疲劳、神经功能紊乱、肾上腺皮脂功能下降，会导致栈胺酸酶活路、以致色素沉着。 4、光效反应： A、抗生素药、避孕药易吸收紫外线； B、食物：贝壳类、海藻类； C、植物：柑桔科、桑科易吸收紫外线。 5、疾病： A、肝肾功能不全、造血功能差、气血不足、血液循环减慢、代谢不良； B、糖尿病会使整体细流功能退下，也会使代谢减慢； C、甲状腺分泌过多、甲亢会令栈胺酸酶活路，使色素增加； D、皮肤病或暗疮、粉刺引起色素沉着； E、老化会引起新陈代谢机能降低。 鱼尾纹长斑：甲状腺免疫力必低 眼下长斑：女性荷尔蒙失调、子宫疾病、流产次数过多或吃避孕药； 脸颊长斑：肝脏虚弱、紫外线照射、失眠现象； 嘴角周围长斑：子宫卵巢及妇科疾病； 颈部：香水过敏引起； 发际：内体或染发导致，肝脏功能不好。 眼部皮肤的特征 1、皮肤薄，只有面部的四分之一，没有皮脂腺和汗腺分泌，不会分泌油脂，缺油易干燥； 2、真皮层由疏松的结蒂组织：对外界刺激易敏感，易产生血液循环不良； 3、丰富的微血管和淋巴神经组织：对外界刺激易敏感，易产生血液循环不良； 4、每天眨眼次数1-2万次，易造成眼部疲劳，易出现皱纹。 眼部问题产生： 1、黑眼圈的形成原因： A、贵传因素：黑色素易沉积； B、眼部淋巴血液循环形成代谢不良，导致血液瘀积在眼中； C、因长期熬夜或过敏性体质、情绪不好； D、月经期贫血，肝脏性疾病； E、日常习惯：俯睡或蒙头大睡会给眼部组织造成压力； F、使用劣质化妆品，令皮肤产生慢性中毒，即铅汞中毒。 2、眼袋的产生： A、水肿性眼袋：后天形成； B、脂肪性眼袋：先天遗传； C、淋巴循环：代谢不好、水份囤积； D、老化眼轮，眨肌眼眶膜退变、松驰、下眼脸脂肪移位下垂； E、日常习惯：食用含盐量过高的食物或使用含高油量配方的化妆品，喝酒、抽烟、熬夜等。 3、皱纹： A、假性皱纹（细纹）：面部表情丰富、缺水、缺油、缺胶原蛋白； B、真性皱纹（深纹）：在假性皱纹以上形成的胶原纤维变硬断裂； 针对眼部的改善方法： 1、疏导、活路眼部眼部循环，改善血液循环不畅，避免眼部过度疲劳，及时代谢囤积的水分（即眼部按摩） 2、养护：及时补充眼部所需养份，促进胶原蛋白合成； 3、保持充分的睡眠及心情愉快； 4、饮食方面，营养要平衡多吃含维生素的食物。 （NMF—天然保湿因子）
记得采纳啊

‘贰’ 常用的给药途径有哪些

不同的给药途径能影响药物的吸收速度，因而也影响药物作用的快慢。个别药物也因给药途径不同，甚至影响药物作用的大小。鸭由于个体小，大都集约化饲养，其给药方法不同于其他动物，因此，要根据病情，选择适当的给药途径。
（1）常用的给药方法①经口给药：此法适用于鸭群体小，在病重时不食不饮，必须逐只经口投药，此法是用注射器或合适的胶管直接注入嗉囊。虽然操作费工费时，但剂量准确，效果可靠。
②注射给药：药物通过皮下、肌内和静脉注射进入体内，其优点是剂量准确，效果可靠，常用于紧急治疗。
③吸入给药：气体或挥发性药物以及气雾剂可用此法。其特点是作用快而短暂，且给药方法简便。此法常用于某些呼吸道疾病和大规模养鸭场气雾免疫。
④体表用药：主要是发挥药物的局部作用，以治疗皮肤损伤或消灭体表寄生虫等。
⑤饮水给药及混饲给药：在集约化养鸭场，用于群体防治疾病时，饮水给药及混饲给药是常用的给药方法。（2）注意事项①针对性用药：不同疾病，用药不一样，要针对性地选择药物，不可滥用，否则会产生抗药性。
②用药拌料时混合要均匀：这样才能使所有鸭吃到大致相等的药物，防止个别鸭超量中毒。
③选择适宜的剂量：剂量小，疗效不可靠，且易导致耐药菌株的产生；剂量大，既造成浪费，又会产生毒副反应和药物残留。
④合理的疗程：一般3～5天为一疗程，用药时间过短，起不到彻底杀灭病菌的作用，用药时间过长，同样会造成浪费和残留。
⑤注意休药期：根据药物残留特性，在屠宰前要有足够的时间停药，以免药物残留于肉食品内。

‘叁’ 替米考星有什么作用替米考星在养殖当中的适用范围是多少

替米考星是由泰乐菌素的一种水解产物半合成的畜禽专用抗生素，药用其磷酸盐，在动物养殖当中起着不可忽视的重要作用。替米考星在养殖当中的适用范围如下。

1. 主要用于猪、鸡、牛、奶牛、山羊等动物的感染性疾病，特别在防治畜禽呼吸道疾病如家畜放线杆菌性胸膜肺炎、巴氏杆菌病和鸡霉形体病等方面具有独特疗效。由于替米考星对家禽支原体具有较强的抗菌活性，已被广泛用于治疗家禽支原体病。

2. 替米考星对革兰氏阳性菌、部份革兰氏阴性菌、霉形体及螺旋体等均有抑制作用。替米考星具有同泰乐菌素相似的广谱抗菌活性，但其抗菌活性明显优于泰乐菌素。但与与泰乐菌素相比，其用药量少、作用持久、副作用小、体内残留低、安全无毒，是一种经济、安全、有效的畜禽常用抗菌和促生长药物，是替代泰乐菌素、预防和治疗畜禽呼吸道感染的首选药物。

3. 药动学特点内服和皮下注射吸收快，血中消除半衰期较长，具有良好的组织穿透力，替米考星在肺组织中药物浓度高，体内分布容积大。

4. 替米考星用于支原体病的治疗，可制成替米考星可溶性粉、替米考星预混剂(20%)、替米考星注射液、其他复方制剂等多种剂型。

替米考星是一种在农业养殖当中应用比较广泛的药物，起着决定性的作用，但是我们需要注意正确的使用方法。

‘肆’ 治疗斑点有什么方法

• 怎样有效去除黄褐斑去除黄褐斑偏方大揭秘
• 怎样祛斑最有效?尤其是黄褐斑，黄褐斑是面部的黄褐色色素沉着，大多分布于面颊部，常见于女性，斑斑点点的实在不美观。可以通过民间小偏方来祛除黄褐斑，恢复皮肤的白嫩。
• 食疗
• 绿豆百合美白汤：将绿豆、赤小豆、百合洗净，用适量清水浸泡半小时。大火煮滚后，改以小火煮到豆熟。依个人喜好，加盐或糖调味皆可。绿豆与百合所含的维生素能使黑色素还原，具有漂白作用。
• 丝瓜化瘀茶：丝瓜络15克、茯苓20克、僵蚕5克、白菊花10克、玫瑰花5朵、红枣5枚。将上述材料加水煎取汁，代茶饮服。药渣可再煎取汁温敷于脸部。该茶饮清热祛风消滞，适宜气滞血瘀之人。
• 柠檬冰糖汁：将柠檬榨汁，加冰糖适量，饮用。柠檬中含有丰富的维生素C，100克柠檬汁中所含维生素C可高达50毫克。此外，还含有钙、磷、铁和strong族维生素等。常饮柠檬汁不仅可以白嫩皮肤，防止皮肤血管老化，消除面部色素斑，而且还具有防治动脉硬化的作用。
• 益母草茶：益母草煎水代茶饮，或用益母草曝晒干，烧灰，洗面，可使皮肤嫩白。
• 枸杞菊花茶：枸杞子6克，菊花3克，泡开水，每日频频饮服。有滋阴养血祛风的作用，可防治色斑。
• 双花茶：金银花3克，菊花3克，泡开水，每日频频饮服。有清热祛风的作用，可防治面部红斑、色斑。
• 养颜桃红茶：桃仁(打碎)10克，红花3克，枸杞子6克，加水煎煮，每日饮服两次。具有养颜润肤增色的功效。适用于面色无华，或灰暗和黄褐斑。
• 冬瓜仁：冬瓜仁适量，煮沸后取出曝晒干，反复三次，清酒浸泡一昼，再曝晒干碾成细末，每日吃一匙。可悦泽明目，可使人皮肤白净如玉。
• 双花粥：桂花、茉莉花、蜂蜜各10克，粳米100克。花与粳米同时入锅，加适量水煮沸后，小火煮熬成稀黏稠粥，再加入蜂蜜。每日早、晚分两次服。坚持长期食用，可健身、益寿、美容养颜增白。
• 核桃糊：白及10克，黄豆和核桃各250克，炒熟捣烂成粉末状。每日早、晚两匙加入开水冲服。可补益肝肾，防治面部色素和皱纹。
• 牛奶核桃饮：牛奶、豆浆、黑芝麻各200克，核桃300克。将核桃、芝麻放入小石磨中；牛奶和豆浆混匀，慢慢倒入小石磨中边倒边磨，磨好后倒入锅内煮沸，后加入少量白糖调味，也可在煮沸时，打入生鸡蛋，边搅边煮。每日1次，每次1小碗。可经常食用。
• 干柿去斑方：干柿子，天天食之，久食有效。功效润心肺，去黑斑。适用于面部黑斑、斑点。
• 桃仁牛奶芝麻糊：核桃仁30克，牛乳300克，豆浆200克，黑芝麻20克。先将核桃仁、黑芝麻放小磨中磨碎，与牛乳、豆浆调匀，放入锅中煮沸，再加白糖适量，逐日早晚各吃1小碗。功效润肤悦颜。适用于皮肤黄褐斑及皱纹皮肤。
• 猪肾薏苡仁粥：猪肾1对，去筋膜、臊腺，切碎，洗净，与去皮切碎的山药100克，粳米200克，薏苡仁50克加水适量，用小火煮成粥，加调料调味分顿吃。具有补肾益肤功效。适用于色斑、黑斑皮肤。
• 山楂橘皮饮：山楂、橘皮各适量，加水共煮，待凉，用纱布滤渣取汁加蜂蜜调用。
• 美肤汁：雪梨100克，甘蔗200克，葡萄300克，蜂蜜100克。将雪梨、甘蔗、葡萄洗净搅汁去渣，与蜂蜜混合装瓶备用。早晚各吃10毫升，用开水兑。
• 消斑饮：黄豆、绿豆、赤豆各100克，白糖适量。将上述豆洗净浸泡至胀后混合捣汁，加入适量净水煮沸，用白糖调味饮服，1日3次。
• 羊奶鸡蛋羹：羊奶250毫升，鸡蛋2个，冰糖50克。用净水适量将冰糖煮溶，倒入羊奶煮沸，打入鸡蛋，搅拌均匀煮沸，即可食用。
• 三仁美容粥：桃仁、甜杏仁、白果仁各10克，鸡蛋1个，冰糖10克，粳米50克。将桃仁等3味研成细末；粳米淘洗清洁，放沙锅内，加桃仁等3味中药细末和适量水，旺火煮沸，打入鸡蛋，改用文火煨粥。粥成时加入白糖调匀。逐日1剂，早餐食用。兆20剂为1个疗程，间隔5日后可接着用下1个疗程。此粥具有活血化瘀、润肠通便、护肤美肤功效。老年人常服此粥能减少色素斑，延缓皮肤朽迈。
• 治疗黄褐斑的偏方
• 杏仁+蛋清去除黄褐斑
• 先将杏仁煮软了然后去皮，再搅烂弄成泥状，加入新鲜的蛋清混合，做成蛋清杏仁面膜。每天敷一到两次，特别是脸上有黄褐斑的地方。蛋清有美白的作用，杏仁对皮肤也好，坚持使用一段时间可以有效去除黄褐斑。
• 薯仔片去除黄褐斑小偏方
• 不想弄得复杂的话买一个新鲜的薯仔就可以祛斑了。将薯仔切成薄片，越薄越好，然后把脸蛋洗干净之后就可以敷脸了。薯仔可以给肌肤补水，吸收脸上的黑色素，让肌肤变得滋润有弹性，超级实用的小偏方哦
• 苹果+蜂蜜去除黄褐斑小偏方
• 用新鲜的苹果搅拌成泥状，加入蜂蜜后搅拌成糊状就可以敷脸。晚上用热水洗完脸后敷上，可以有效锁住肌肤的水分，让肌肤吸收到丰富的营养，祛黄褐斑效果十分好。
• 芦荟+黄瓜去除黄褐斑小偏方
• 芦荟补水，黄瓜祛斑美白，将二者放入榨汁机榨汁，然后加入珍珠粉调成糊状，然后敷脸。早晚各一次，能有效去除祛黄褐斑。坚持一个月左右就会发现黄褐斑慢慢消失。
• 食盐去除黄褐斑小偏方
• 用食盐加上白芷粉、菊花粉，然后调和一些白醋，加水混和成为糊状，敷在脸上有斑的地方，隔天敷一次，祛斑效果很好。
• 大米黄瓜粥祛黄褐斑
• 取大米、鲜嫩黄瓜适量，慢慢煮至粥成，加入调料后即可饮用，有消除色斑，增白肌肤、减肥之功效。
• 柠檬祛黄褐斑
• 将柠檬切片放入密闭容器，加凉水淹没，添加蜂蜜后一起密封，冷藏，两天后取出，可每日用于泡水饮用，不仅能使色斑变淡，长期饮用，有非常好的美白效果。

‘伍’ micro RNA二级结构

RNA干扰及其应用进展
孙德惠1,2,才学鹏1*,常惠芸1 ,独军政1
(1.中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室,甘肃兰州 730046;2.甘肃农业大学动物医学院,甘肃兰州 730070)

摘 要:RNA 干扰(RNA interference,RNAi)是一种由双链RNA介导的基因沉默现象.RNAi主要发生在核外,RNAi具有操作简便快速等特点.RNAi现象自发现至今已逾10年,在此期间,已将研究重点由机理研究转向应用研究.文章以RNAi的应用为重点,从RNAi的起源,可能的作用机制,作用特点,研究方法,应用前景及展望等方面进行了综述.
关键词:RNA干扰;双链RNA;基因沉默
RNAi是Napoli C D等[1]在试图向紫色矮牵牛花转导色素合成基因,用以增加其花色时发现的.结果出乎预料,转基因的植株不仅没有新基因的表达,反而自身的色素合成也减弱了,一些转基因的花出现了全白色或部分白色.他们把这种导入的基因未表达和植物本身合成色素基因的失活现象命名为共抑制(cosuppression).之后,Ramano等在向粗糙孢菌�(Neurospora crassa)�中导入合成胡萝卜素的基因时造成失活,他们称为基因静止(quelling).Guo S等[2]发现正义RNA与反义RNA有相同水平的抑制效应,但未能就此现象给出合理的解释.Fire A等[3]在研究反义核苷酸时发现在线虫体内,双链RNA( double stranded RNA,dsRNA)能有效地抑制有互补序列的内源性基因,且抑制效果优于单链反义RNA.至此,正式提出了双链RNA诱导的RNAi的概念,开启了RNAi研究的序幕.
1 RNAi可能的作用机制及特点
1.1 RNAi的作用机制
虽然RNAi作用的确切机制尚不清楚,但目前普遍认可是Bass假说.具体概括为三个阶段.
(1)起始阶段.在细胞内,双链RNA(dsRNA)由核酸酶Ⅲ(RNaseⅢ) Dicer 在ATP的参与下被处理为21个～23个碱基的小RNA,即小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA).siRNA是由19个～21个碱基配对形成的双链,并在其3′末端有两个游离未配对的核苷酸.研究发现, siRNA 是RNAi 作用发生的重要中间分子,序列与所作用的靶mRNA 的序列具有高度同源性;双链的两端各有2个～3个突出的非配对的3′碱基;两条单链末端为5′端磷酸和3′端羟基.这些是细胞赖以区分真正的siRNA和其他双链RNA的结构基础. 研究表明,平末端的siRNA 或失去了5′磷酸基团的siRNA 不具有RNAi 的功能[4]
(2)引发阶段.siRNA与Argonaute蛋白家族及其他未知因素结合,形成siRNA-核蛋白复合物(siRNA-ribonucleoprotein complex,siRNP).siRNP在ATP及其他未知因素参与下,使双链siRNA解旋形成RNA诱导的沉默复合物(RNA incing silencing Complex ,RISC).RISC可能以完全单链或两条链解旋但不完全分离的形式存在,继而RISC在dsRNA的介导作用下与互补mRNA结合,并将其降解.mRNA被降解在转录后水平,抑制基因表达,因而又称之为转录后基因沉默( posttranscriptional gene silencing,PTGS)
(3)循环放大阶段.在siRNA诱导的RNAi过程中,可能还存在siRNA 的循环放大过程,以维持它的RNA诱导功能.此过程推测是以siRNA为引物,互补mRNA 为模板,在RNA依赖性RNA合成酶(RNA-dependent RNA Polymerase,RdRP) 的作用下,合成新的双链RNA,再由Dicer作用,产生新的siRNA,完成siRNA 的放大过程,开始新的RNAi循环[5].
关于对RNAi机制中重要酶的作用研究,Zamore P D等[6]发现,21 nt RNA指导mRNA的降解; Scharf W D等[7]发现ATP依赖的RNA解旋酶为Mut6;Grishok A等[8]发现Let-7和lin-4为内源性的RNAi基因(stRNA);Dalmay T等[9]提出RNA依赖的RNA多聚酶就是SDE-1; Bernstein E等[10]证实RNaseш样的核酸酶为Dicer; Elbashir S M等[11]应用外源性21 nt-siRNA能够抑制同源mRNA的表达;Novina C D等[12]证实无论是针对病毒感染细胞所需的CD4受体,还是针对病毒基因组的gag区域,siRNA都可以有效地使病毒与细胞的基因沉默,抑制HIV的感染与复制.
1.2 RNAi的作用特点
(1)"共抑制"性.RNAi是双链RNA介导的转录后基因沉默机制,它的启动子相当活跃,外源基因可以转录,但不能正常积累mRNA;RNAi作用不仅使外源基因在转录后水平上失活,同时诱导与其同源的内源基因沉默.
(2)高效性.试验证明双链RNA干扰mRNA 翻译的效率比单纯反义或正义RNA 的抑制效率提高了几个数量级;RNAi可在低于反义核酸几个数量级的浓度下,使靶基因表达降到很低水平甚至完全"剔除",而产生缺失突变体表型.它比基因敲除技术更为便捷,科学家称RNAi技术为靶基因或靶蛋白的"剔降"(knockdown).
(3)高特异性.由dsRNA降解成的小干扰RNA,除其正义链3′端的两个碱基在序列识别中不起主要作用外,其余碱基在序列识别中都是必需的,单个碱基的改变即可使RNAi失效,RNAi能特异性降解mRNA,针对同源基因共有序列的RNAi则可使同源基因全部失活.
(4)高穿透性.RNAi具有很强的穿透能力,能在不同的细胞间长距离传递和维持,如在含有双链RNA的溶液中,喂食表达双链RNA的细菌等,能向秀丽隐杆线虫导入双链RNA.
(5)"遗传性".已在线虫中观察到RNAi效应通过生殖系传递到后代,说明RNAi具有一定的可遗传性.
(6)高稳定性.细胞中可能存在天然的稳定siRNA的机制.此机制可能是siRNA与某种保护性蛋白结合,从而使其具有相对的稳定性,这些双链RNA 不像反义核酸那样需要多种化学修饰来提高其半衰期.
(7)双干扰系统.哺乳动物中存在有非特异性干扰和特异性干扰两条独立的途径. 非特异性干扰反应是由大于30个碱基对的双链RNA介导,导致整个细胞中非特异性蛋白合成抑制,RNA降解;特异性反应由21 bp～25 bp的小干扰RNA介导,可逃避非特异性干扰系统的"监控",只降解与其序列相应的单个基因的mRNA[11].
2 研究方法
在研究过程中,科研人员逐渐摸索总结出了成套的研究方法.目前,展开RNAi操作主要有两种方法.一种为直接将靶向特定基因的大约21个碱基长短siRNA,或45个~50个碱基的发夹结构RNA(small hairpin RNA,shRNA)转染到细胞,shRNA在细胞中会自动被加工成siRNA,从而引发基因沉默或表达抑制.另一种为构建特定的siRNA表达载体,通过质粒在体内表达siRNA而引发基因沉默.此法的优点是排除了RNA酶干扰,延长siRNA半衰期.更重要的是,该法可以进行稳定表达细胞株的筛选,且随着质粒复制扩散到整个机体,基因抑制效果可传代.试验表明,可被化学合成或体外合成的siRNA抑制的基因同样可被表达相同序列的载体表达出的siRNA所抑制.
3 RNAi的应用
3.1 基因功能研究
在神经生物学研究中,科学家们通过siRNA表达质粒对中脑腹侧神经细胞中的多巴胺能相关基因进行了有效抑制,还通过病毒介导的RNAi建立了此类成年小鼠模型,不仅为建立神经系统的功能缺失模型找到了一些有价值的表型标记,对神经系统的基因治疗也有一定借鉴意义;在癌症研究中,通过shRNA表达载体成功抑制成年大鼠脑癌基因,同时对RNAi的远程(穿过血脑屏障)基因沉默方法进行了非常有益的探索;利用细胞凋亡途径,通过RNAi抑制凋亡基因Caspase-8能提高患急性肝功能衰竭小鼠的成活率,并发现Caspase 8 siRNA处理对特异性Fas激活剂(Jo2和AdFasL)和野生型腺病毒介导的急性肝功能衰竭都有效,表明这个动物模型能反应人类急性病毒肝炎多分子参与的机制,增强了siRNA用于急性肝炎病人治疗的希望.除了对某些关键基因的RNAi研究外,还在哺乳动物细胞中探索了siRNA在基因组水平上的筛选方法.他们建立了一个包含8 000多个基因的siRNA表达框文库阵列,通过它来高通量筛选NF-kB信号途径中已知的及Unique基因.由此可见,RNA干扰也正作为筛选成百甚至上千基因的工具,发挥着越来越大的作用[13].RNAi为系统地抑制RNA分子合成蛋白提供了快速而相对简便的途径.通过在一段时间内对一个基因RNA信号的抑制,研究者可以深入研究基因功能,进而描绘支配从细胞形态到信号系统的遗传网络.
3.2 基因治疗及药物筛选探索
由于RNAi是针对转录后阶段的基因沉默,相对于传统基因治疗对基因水平上的敲除,整个流程设计更简便,且作用迅速,效果明显,为基因治疗开辟了新的途径.其总体思路是通过加强关键基因的RNAi机制,控制疾病中出现异常的蛋白合成进程或外源致病核酸的复制及表达.尤其针对引起一些对人类健康严重危害的病毒,如2003年在全球多个国家和地区流行的SARS,病原体是单链核酸的新型冠状病毒,寻找药物靶点,设计核酸药物就更为方便.目前已经有很多公司在积极开发这方面的药物,如在SARS药物研究中一鸣惊人的美国俄勒冈州的AVI BioPharma生物制药公司等.国内也有很多研究机构及生物技术公司投入了这方面的工作.如上海生科院成立了SARS防治科研攻关小组,其中生化细胞所和药物所的一些课题组在从RNAi的角度努力.此外,北京大学,中南大学,北京动物所等大专院校和研究机构,以及北京金赛狮反义核酸技术开发有限公司等,也开展了RNAi药物的研究与开发.
基因治疗方面最引人注目的进展之一是对肝炎病毒的RNAi研究.Mccaffrey A P等通过表达shRNA的载体在细胞水平和转染HBV质粒后免疫活性缺失的小鼠肝脏中成功抑制了HBV复制.与对照相比,小鼠血清中测得的HBsAg下降了84.5%,免疫组化对HBcAg的分析结果下降率更超过99%.哈佛大学Lieberman研究小组通过注射针对Fas的siRNA,过度激活炎症反应,诱导小鼠肝细胞自身混乱.然后给测试小鼠注入 Fas hyperdrive的抗体,发现未进行siRNA处理的对照组小鼠在几天中死于急性肝功能衰竭,而82%的siRNA处理小鼠都存活下来,其中80%~90%的肝细胞结合了siRNA.并且,RNAi发挥功能达10 d,3周后才完全衰退.由于Fas很少在肝细胞外的其他细胞高水平表达,它对其他器官几乎没有副作用.此外,这个小组还和其他研究者积极开展针对HIV的RNAi测试,目前报道他们使用的针对CCR5蛋白的siRNA能阻止HIV进入免疫细胞约3周,在已经感染的细胞中也能阻止感染病毒的复制.
然而,尽管取得了不少研究成果,但要真正用于医疗还需时日.目前大多数还停留在小鼠测试阶段,siRNA的导入多采用静脉或腹腔注射,尾部注射,细胞移植等,如何对人进行有效的给药,既能确保药效在靶器官靶组织有效释放,还要具有高度安全性等问题都需进一步研究.人们期待着RNAi引领的新医学革命的到来.
在药物筛选领域,除了线虫这种低等动物的RNAi高通量药筛模式外,Lavery K S等对RNAi在药筛领域的应用前景进行了高度评价,RNAi技术将逐渐成为药物靶点筛选和鉴定的强大工具.他对如何在药筛的各个阶段应用RNAi做了具体描述及展望,并指出将这项技术与高通量筛选,体外生物检测和体内疾病模式相结合,将提供大量基因功能方面的有用信息,在药物开发过程的多个阶段促进靶点的有效筛选.
3.3 抗肿瘤治疗
多种癌基因可以作为靶点设计相对应siRNA[14].Brummelkamp T R等[15]用逆转录病毒载体将siRNA 导入肿瘤细胞中,特异性抑制了癌基因K2RAS (V12)的表达.对急性髓性白血病的研究已经取得了较好的结果.Scherr M等[16]以引起慢性髓性白血病和bcr2abl阳性急性成淋巴细胞白血病的bcr2abl癌基因为靶基因,设计了对应的siRNA,并获得了87% 的有效抑制率.Wilda M等[17]用siRNA抑制白血病BCR/ABL融合基因表达也取得了成功. 因此,基于RNAi 技术的抗肿瘤治疗药物开发潜力巨大.有报道称,一种全新生物工程药品"RNA干扰剂"(非干扰素)业已浮出水面,并有望在3年内上市.经过多年的探索,科学家终于发现,在癌细胞和病毒RNA的22对碱基中有1对碱基专门负责复制工作,只要能使这对碱基"休眠",癌细胞或病毒就会自动停止复制.这一重要发现为一种全新药物——RNA干扰剂奠定了基础.科学家们相信,艾滋病,乙型肝炎,恶性胶质瘤(恶性脑瘤)和胰腺癌等疾病有望成为RNA干扰剂的第一批受益者(2004年经FDA批准已开始RNA干扰剂的临床试验),艾滋病,中枢神经系统退行性病变疾病如多发性硬化症,阿尔茨海默病,帕金森病等将成为第二批受益者.
3.4 抗病毒治疗
由于RNAi 是机体中古老而天然的抗病毒机制,目前国外科技人员利用此特点,已设计出针对HIV gag,tat,rev,nef等基因的siRNA,针对丙型肝炎病毒非结构蛋白5B基因的siRNA,针对脊髓灰质炎病毒衣壳蛋白和多聚酶基因的siRNA,针对口蹄疫病毒3D片段siRNA等[18],均在试验中取得理想结果.陆续有关通过RNAi抑制其他病毒在细胞内复制的报道如呼吸道合胞病毒,人乳头瘤病毒,乙型肝炎病毒,丙型肝炎病毒[19]等,国内也已设计出针对口蹄疫病毒VP1基因的siRNA,针对丙型肝炎病毒5′保守区的siRNA,针对口蹄疫病毒IRES和L串联序列两侧的保守区的siRNA[20],针对SARS冠状病毒的6个siRNA,即RL001,R L002,RL003,RL004,RL005和RL006,均已取得理想结果.针对病原的siRNA已经进行到动物实验阶段[21],向病毒病的有效防治迈出了坚实的一步.由此可见,利用RNAi技术将使病毒病的有效治疗成为可能.
3.5 转基因研究
在动植物的转基因试验中, 经常发生基因沉默.因此, 对转基因沉默机制的探索可以为在转基因研究中避免基因沉默提供对策.在转基因植物研究中避免基因沉默可提高试验成功率,且节省时间,而在大型动物转基因研究中避免基因沉默可节约成本,提高产率.
3.6 干细胞研究
在干细胞研究方面,在dsRNA阻断大鼠骨髓源性神经干细胞 Hes5表达的试验中[22],观察外源性短dsRNA在转录后水平mRNA水平降低基因表达的效率,并对其影响因素进行了初步探讨.同时基于干细胞可能拥有自己的一套基因组,不同类型的干细胞又拥有各自所特有的基因,这些基因可能是决定干细胞特性的最关键的实质性因素.因此,RNAi技术在此领域应用空间广阔.
3.7 研究信号传导的新途径
Biotech认为,联合利用传统的缺失突变技术和RNAi技术可以很容易地确定复杂的信号传导途径中不同基因的上下游关系,Clemensy等应用RNAi研究了果蝇细胞系中胰岛素信息传导途径,取得了与已知胰岛素信息传导通路完全一致的结果.RNAi技术较传统的转染试验简单,快速,重复性好,克服了转染试验中重组蛋白特异性聚集和转染率不高的缺点,因此认为RNAi技术可能成为研究细胞信号传导通路的新途径.
3.8 常见病的治疗
Nature杂志报道了miRNA(Micro RNA)的应用上一个重要发现,成功采用miRNA调节了胰岛素的分泌,这为糖尿病的治疗带来新的希望,也将为糖尿病的新药研究带来新的曙光和思路.据Sicence杂志报道,显示应用RNAi技术可有效降低血管内胆固醇含量,对治疗心血管疾病有明显的作用.
4 展望
综上所述,RNAi技术在基因功能研究,抗肿瘤治疗,抗病毒治疗,基因应用研究,常见病的治疗等许多方面都是强有力的工具和手段.同时做为新兴的生物技术,还有广阔的研究和应用空间期待着科研人员的探索.例如,siRNA在病毒持续性感染过程中扮演怎样的角色 siRNA在冬眠动物体内的作用如何 RNAi在雀斑形成中起到怎样的作用 如上述问题得到解决,将进一步依据其机理及特点,有望应用于病毒持续性感染的鉴别诊断及治疗,利用siRNA在冬眠动物体内的作用进行星际航行,以解决能量供应及时间跃迁问题,RNAi应用于祛除雀斑等.
尽管在RNAi方面的研究已取得许多突破性进展,尤其是哺乳动物细胞中的研究的报道逐渐增多,但由于RNAi机制尚未完全阐明,仍有许多问题尚未得到彻底解答.例如,siRNA 在哺乳动物细胞中抑制mRNA表达是有效的, 但达不到果蝇细胞那样的高抑制率, 可能是因为生物进化水平越高,调控基因表达系统的复杂程度相应的越高,多种抑制机制间相互作用的频率也越高,抑制作用受到的影响因素也就越多.另外, 在哺乳动物中,RNAi能否成功地抑制基因表达以及抑制的程度还取决于细胞类型.对线虫来说,可以采用注射,浸泡或喂食的方法转入dsRNA,而对哺乳动物来说,寻找高效的方式来转入siRNA以及快速的方式来筛选siRNA仍在进一步探索中.RNAi在抗病毒感染中的应用令人鼓舞, 但要取得最终的成功还有很漫长的路要走.其中一个关键的原因是siRNA并不能对所有病毒RNA发生作用,有些病毒靶序列可能隐藏在二级结构下, 或者位于高度折叠的区域中, 而有些病毒序列可能与蛋白质形成紧密的复合物, 阻碍了与siRNA 的识别.因此,不仅要选合适的靶序列,而且需要反复试验.另一个重要的原因是病毒子代的突变率较高, 这使病毒可逃避siRNA 的识别.为了克服这个障碍,所选病毒RNA的靶序列必须是高度保守的, 或者设计数对siRNA同时作用[23].
总之,RNAi作为一种新发展起来的分子生物学技术,不可避免地会存在潜在的问题,这就要求研究者在利用该技术时要考虑到生物安全性等诸多问题,以使RNAi技术更好地为人类服务.
参考文献(略)

‘陆’ 如何快速给鸡喂药

把药加工成粉沫混在鸡最喜欢吃的饲料里就OK了。

‘柒’ 红霉素、泰乐菌素、螺旋霉素、北里霉素的抗菌作用及适应症有哪些使用这类抗生素时应该注意什么

（1）红霉素从红链丝菌的培养液中提取而得。为白色或类白色的碱性结晶性粉末，难溶于水。其抗菌谱和青霉素相似。对革兰氏阳性球菌和杆菌均有较强的抗菌作用，对部分革兰氏阴性杆菌如布鲁氏菌、立克次氏体、钩端螺旋体等也有抑制作用，但对肠道革兰氏阴性杆菌如大肠杆菌、变形杆菌、沙门氏菌等不敏感。兽医临床上主要用于耐青霉素金黄色葡萄球菌及化脓性链球菌、肺炎球菌、肠球菌等所引起的肺炎、子宫炎、乳腺炎、猪丹毒等的治疗，亦可用于鸡支原体病（慢性呼吸道病）和传染性鼻炎。利用红霉素成盐的不同，制成了多种红霉素盐及其制剂，如乳糖酸红霉素、乳糖酸红霉素可溶粉、硫氰酸红霉素、硫氰酸红霉素可溶性粉等制剂。

红霉素片的用法用量为：内服一次量，犬、猫每1公斤体重2～10毫克，每日2次。

注射用乳糖酸红霉素的用法用量为：临用前，先用灭菌注射用水溶解（不可用氯化钠注射水），然后用5%葡萄糖注射液稀释后滴注，浓度不应超过0.1%。静脉注射一日量为，每1公斤体重，马、牛、羊2～4毫克，猪2～6毫克，犬、猫2～10毫克，分2次注射。

硫氰酸红霉素注射液的用法用量为：肌内注射，一次量每1公斤体重，马、牛、猪、羊1～2毫克，犬、猫1～5毫克，一日2次。

硫氰酸红霉素可溶性粉的用法用量为：混饮，每1升饮水，鸡2.5克，连用3～5天。本品应密闭在干燥处保存。

硫氰酸红霉素水溶剂，每1克含红霉素46～56毫克，用法用量：家禽混饮，每1升饮水中加2.4克，屠宰前3天停用。

在使用红霉素时应注意以下几点：

①红霉素在酸中不稳定，能被胃酸破坏，故内服时要同时服用制酸剂碳酸氢钠。如为肠溶片则不必服碳酸氢钠。同时忌与酸性物质配伍。②本品毒性较低，但有时也可引起过敏反应，如可引起药物热、荨麻疹等。给母牛每1公斤体重静注12.5毫克后能见到延续几分钟的不安、流涎和呼吸增数。③注射用乳糖酸红霉素，不能用生理盐水溶解，以免产生沉淀。④静脉注射浓度过高或速度过快，易发生疼痛和静脉炎。⑤与青霉素同用可使青霉素效力减弱。

（2）泰乐菌素是从弗氏链霉菌的一类似菌株培养液中取得。为白色结晶，微溶于水，具弱碱性。一般成盐后易溶于水，根据成盐的不同可分为磷酸泰乐菌素、酒石酸泰乐菌素等，为畜禽专用抗生素。

泰乐菌素对革兰氏阳性菌和一些阴性菌有抗菌作用，对金黄色葡萄球菌、化脓链球菌、肺炎链球菌、化脓棒状杆菌均呈敏感，也对鸡支原体病（慢性呼吸道病）的防治特别有效，但对猪支原体肺炎仅有预防性功效，对敏感菌引起的牛乳腺炎、肺炎和子宫炎等，肌注也有效。本品主要用于畜禽细菌及支原体感染，亦可作猪的饲料添加剂以促进增重和提高饲料转换率。

其制剂有：泰乐菌素片、泰乐菌素注射液、注射用酒石酸泰乐菌素、酒石酸泰乐菌素可溶性粉、磷酸泰乐菌素预混剂等，具体的用法用量如下：

泰乐菌素片，内服一日量，每1公斤体重，犬、猫20～40毫克（效价），分3～4次。

泰乐菌素注射液，肌内注射一次量，每1公斤体重牛2～4毫克（效价），猪2～8毫克（效价），犬、猫6～20毫克（效价），一日1次。

注射用酒石酸泰乐菌素，皮下或肌内注射，一次量，每1公斤体重，猪、禽5～13毫克（效价）。

酒石酸泰乐菌素可溶性粉，混饮，每1升饮水中，鸡0.5克（效价），连饮5～7日。产蛋期禁用，宰前5天停止给药。

磷酸泰乐菌素预混剂，混饲，每1000公斤饲料猪10～100克（效价），鸡4～50克（效价），注意宰前5天停止给药。

泰乐菌素有一定的安全范围。但使用时，犬内服会有呕吐和下泻的副作用，鸡皮下注射会发生暂时颜面肿胀，猪偶有直肠水肿，部分脱肛及皮肤出现红斑、瘙痒等，停药后几天内消失。本品的水溶液遇铁、铜、铝、锡等离子多形成络合物而减效。另本品对产蛋母鸡和泌乳奶牛禁用。

（3）螺旋霉素由链丝菌的培养液中取得。为白色或淡黄色结晶性粉末，其盐酸盐易溶于水。抗菌作用同其他大环内酯类抗生素，但效力较红霉素差，主要用于防治葡萄球菌感染和鸡支原体病。亦用于猪的饲料添加剂。其用法用量为：常用盐酸盐治疗量，皮下或肌内注射，一次量，每1公斤体重，马、牛4～10毫克，猪、羊10～50毫克，家禽20～50毫克，每日1次。内服量为注射量的2～3倍；家禽可用0.04%的饮水给药3天；饲料添加量，每1000公斤饲料，猪加5～20克，仔猪加5～100克。

（4）北里霉素（柱晶白霉素）：本品是由链霉菌产生的大环内酯类抗生素。为白色或淡黄色粉末，难溶于水，在室温中稳定。其酒石酸盐极易溶于水。本品的抗菌谱同红霉素，对革兰氏阳性菌有较强的抗菌作用，对一些革兰氏阴性菌、支原体、立克次氏体、勾端螺旋体等也有效。用于治疗革兰氏阳性菌、支原体和勾端螺旋体所致的感染，并可促进猪、鸡等畜禽生长。其制剂有北里霉素片、北里霉素预混剂、注射用酒石酸北里霉素、酒石酸北里霉素可溶性粉等，其用法用量为：

北里霉素片，内服一次量，每1公斤体重，猪20～30毫克（2万～3万单位），鸡20～50毫克（2万～5万单位），一日1～2次。

北里霉素预混剂，混饲每1000公斤饲料，以有效成分计，促生长量，猪5～50克（500万～5000万单位），鸡5～10克（500万～1000万单位）；治疗量，猪80～300克（8000万～3亿单位），鸡100～300克（1亿～3亿单位），连用5～7天。注意产蛋期禁用，宰前2天停止给药；治疗疾病时连续使用不得超过5～7天。

注射用酒石酸北里霉素，皮下或肌内注射，一次量，每1公斤体重，猪2～55毫克，鸡25～50毫克，一日2次。

酒石酸北里霉素可溶性粉，混饮，每1升饮水中，以有效成分计，猪100～200毫克（1亿～2亿单位），鸡250～500毫克（2.5亿～5亿），5天为1疗程，连用1～2个疗程。猪宰前3天、鸡宰前2天停止给药。鸡产蛋期禁用。

‘捌’ 如何防治磺胺类药物中毒

磺胺类药物广泛应用于家禽某些传染病、球虫病、卡氏白细胞虫病的防治，但在发挥其治疗作用的同时，对家禽也有伤害作用，并可能引起急性或慢性中毒。不同种类、不同品种、不同日龄的家禽对磺胺类药物的敏感性差异很大。一般来说，纯种比杂种家禽敏感，雏禽比成年禽敏感。用量过大或长期服用治疗量磺胺类药物是导致本病的主要原因。

（1）主要症状和剖检变化 急性病鸡的冠和肉髯苍白，从体表细心观察，可见皮下广泛出血，有时眼睑和肉髯也有出血，有些病鸡下痢，死亡多因出血过多所致。而慢性中毒的病鸡，精神沉郁，食欲减少，生长减慢，羽毛松乱，冠和肉髯苍白，产蛋量下降，薄壳蛋、软壳蛋增多。

剖检病鸡的主要变化是皮肤、肌肉、内脏器官出血。轻症的鸡骨髓由正常的暗红色变为淡红色，严重时变为黄色；肠道有弥漫性出血斑点，盲肠内有血液，腺胃、肌胃角质层出血；肝肿胀，呈黄色或褐色，并有出血点及坏死灶；脾肿胀，有出血性梗死和灰色结节灶；心肌见有刷状的出血，心肌中的灰色结节区与肝、脾、肾及肺中的病变相类似。

（2）防治 一旦发现鸡群出现磺胺中毒，应立即停止使用含有磺胺的饲料或饮水。

已见广泛出血的病例，目前尚无特效药物可救治。轻度中毒的病鸡，可用0.1%碳酸氢钠、5%葡萄糖水代替饮水1～2天，并加大饲料中维生素K和B族维生素的含量，有一定作用。例如，可在饲料中添加0.04%～0.05%维生素K₃或维生素K₄。每只鸡肌肉注射维生素B₁₂2毫克或叶酸50～100毫克，或按每只鸡0.5～1毫升计算，将复合维生素B溶液拌入饮水中，连续用药3～5天。

预防应注意使用磺胺类药物时，计算、称量要准确，搅拌应均匀，使用时间不宜太长，尤其是对于雏鸡及使用磺胺喹恶啉及磺胺二甲嘧啶时更应注意；对磺胺类药物特别敏感的雏鸡，应尽量避免使用磺胺类药物，确需使用剂量不宜太大，使用时间一般不得超过3～5天；使用磺胺类药物期间，应提高饲料中的维生素K、维生素B的含量；将2～3种磺胺类药物联合使用，不但可提高防治效果，减慢细菌耐药性的形成，而且相对减少用药量。