⑴ 基因检测方法有好几种,哪一种方式比较好
需要按照实际需求去选择,没有哪个最好的说法,合适的就是最好的
常用基因诊断技术:
一、Southern印迹法(Southern blot)
基本原理是:硝酸纤维膜或尼龙滤膜对单链DNA的吸附能力很强,当电泳后凝胶经过DNA变性处理,覆以上述滤膜,再于其上方压上多层干燥的吸水纸,借助它对深盐溶液的上吸作用,凝胶上的单链DNA将转移到滤膜上。转移是原位的,即DNA片段的位置保持不变。转移结束后,经过80℃烘烤的DNA,将原位地固定于膜上。
当含有特定基因片段已原位转移到膜上后,即可与同位素标记了的探针进行杂交,并将杂交的信号显示出来。杂交通常在塑料袋中进行,袋内放置上述杂交滤膜,加入含有变性后探针的杂交溶液后,在一定温度下让单链探针DNA与固定于膜上的单链基因DNA分子按碱基到互补原理充分结合。结合是特异的,例如只有β珠蛋白基因DNA才能结合上β珠蛋白的探针。杂交后,洗去膜上的未组合的探针,将Ⅹ线胶片覆于膜上,在暗盒中日光进行放射自显影。结合了同位素标记探针的DNA片段所在部位将显示黑色的杂交带,基因的缺失或突变则可能导致带的缺失或位置改变。
二、聚合酶链反应
近年来,基因分析和基因工程技术有了革命性的突破,这主要归功于聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)的发展和应用。应用PCR技术可以使特定的基因或DNA片段在短短的2-3小时内体外扩增数十万至百万倍。扩增的片段可以直接通过电泳观察,也可用于进一步的分析。这样,少量的单拷贝基因不需通过同位素提高其敏感性来观察,而通过扩增至百万倍后直接观察到,而且原先需要一、二周才能作出的诊断可以缩短至数小时。
三、扩增片段长度多态性
小卫星DNA和微卫星DNA的长度多态性可以通过PCR扩增后电泳来检出,并用于致病基因的连锁分析,这种诊断方法称为扩增片段长度多态性(amplified fragment length polymorphism,Amp-FLP)连锁分析法。PCR扩增后,产物即等位片段之间的差别有时只有几个核苷酸,故需用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离鉴定。此法多用于突变性质不明的连锁分析.
四、等位基因的特异寡核苷酸探针诊断法
当基因的突变部位和性质已完全明了时,可以合成等基因特异的寡核苷酸探针(allele-specific oligonucleotide,ASO)用同位素或非同位素标记进行诊断。探针通常为长20bp左右的核苷酸。用于探测点突变时一般需要合成两种探针,与正常基因序列完全一致,能与之稳定地杂交,但不能与突变基因序列杂交;另一种与突变基因序列一致,能与突变基因序列稳定杂交,但不能与正常基因序列稳定杂交,这样,就可以把只有一个碱基发生了突变的基因区别开来.
PCR可结合ASO,即PCR-ASO技术,即先将含有突变点的基因有关片段进行体外扩增,然后再与ASO探针作点杂交,这样大大简化了方法,节约了时间,而且只要极少量的基因组DNA就可进行。
五、单链构象多态性诊断法
单链构象多态性(signle strand conformation polymorphism,SSCP)是指单链DNA由于碱基序列的不同可引起构象差异,这种差异将造成相同或相近长度的单链DNA电泳迁移率不同,从而可用于DNA中单个碱基的替代、微小的缺失或手稿的检测。用SSCP法检查基因突变时,通常在疑有突变的DNA片段附近设计一对引物进行PCR扩增,然后将扩增物用甲酰胺等变性,并在聚丙烯酰胺凝胶中电泳,突变所引起的DNA构象差异将表现为电泳带位置的差异,从而可据之作出诊断。
⑵ 如何用dnaman比对两个基因的序列
如何用dnaman比对两个基因的序列
所谓重叠基因是指两个或两个以上的基因共有一段DNA序列,或是指一段DNA序列成为两个或两个以上基因的组成部分。重叠基因有多种重叠方式。例如,大基因内包含小基因;前后两个基因首尾重叠一个或两个核苷酸;几个基因的重叠,几个基因有一段核苷酸序列重叠在一起,等等。重叠基因中不仅有编码序列也有调控序列,说明基因的重叠不仅是为了节约碱基,能经济和有效地利用DNA遗传信息量,更重要的可能是参与对基因的调控。
⑶ 怎么找基因序列
根据基因的构成原理寻找基因序列,如下:
A、C、G和T分别代表组成DNA的四种核苷酸——腺嘌呤,胞嘧啶,鸟嘌呤,胸腺嘧啶。每个字母代表一种碱基,两个碱基形成一个碱基对,碱基对的配对规律是固定的,即是:A-T,C-G。典型的他们无间隔的排列在一起,例如序列AAAGTCTGAC。
任意长度大于4的一串核苷酸被称作一个序列。关于它的生物功能,则依赖于上下文的序列,一个序列可能被正读,反读;包含编码或者无编码。DNA序列也可能包含“junk DNA”。
注:带有遗传讯息的DNA片段称为基因,其他的DNA序列,有些直接以自身构造发挥作用,有些则参与调控遗传讯息的表现。组成简单生命最少要265到350个基因。
(3)基因序列比较的方法有哪些扩展阅读:
基因序列的特点:
脱氧核糖核酸是一种由核苷酸重复排列组成的长链聚合物,宽度约22到24埃(2.2到2.4纳米),每一个核苷酸单位则大约长3.3埃(0.33纳米)。在整个脱氧核糖核酸聚合物中,可能含有数百万个相连的核苷酸。
例如人类细胞中最大的1号染色体中,就有2亿2千万个碱基对。通常在生物体内,脱氧核糖核酸并非单一分子,而是形成两条互相配对并紧密结合,且如藤蔓般地缠绕成双螺旋结构的分子。
每个核苷酸分子的其中一部分会相互连结,组成长链骨架;另一部分称为碱基,可使成对的两条脱氧核糖核酸相互结合。所谓核苷酸,是指一个核苷加上一个或多个磷酸基团,核苷则是指一个碱基加上一个糖类分子。
脱氧核糖核酸骨架是由磷酸与糖类基团交互排列而成。组成脱氧核糖核酸的糖类分子为环状的2-脱氧核糖,属于五碳糖的一种。磷酸基团上的两个氧原子分别接在五碳糖的3号及5号碳原子上,形成磷酸双酯键。
这种两侧不对称的共价键位置,使每一条脱氧核糖核酸长链皆具方向性。双螺旋中的两股核苷酸互以相反方向排列,这种排列方式称为反平行。脱氧核糖核酸链上互不对称的两末端一边叫做5'端,另一边则称3'端。
⑷ 基因序列的比对方法
你可以上网在NCBI上比对,如果你要比对两个已知序列的同源性,也可以用DNAMAN等软件比对同源性等等。
NCBI网址 http://www.ncbi.nlm.nih.gov 如果还有不明白可以用网络给我短消息我们QQ上聊。
⑸ 基因序列比较怎么分析
看你是要对比几条序列了,
双序列比对需要BLAST,NCBI上有,也可以在网络搜索本地版的下载下来,
多序列比对需要cluxtal X软件, 要把所有基因序列fasta格式放在一起,需要输入所有序列的fasta格式,然后进行多序列联配!
⑹ 基因序列比较怎么分析
基因序列比较怎么分析
测序得到基因序列后一般都需要进行序列比对,看和目的序列的差异情况,常用的软件有DNAman,还有invitrogen的vectorVI也不错。此外还可以直接在网上进行比对,推荐NCBI网站的BLAST可以直接网上进行。
不用担心,多熟悉几遍就可以操作了,很简单的,要对自己有信心,加油!
⑺ 简述几种DNA测序的方法,比较优缺点
基因芯片的原理是碱基配对。样品通过一条或多条已知序列经过标记的核酸探针进行杂交,通过检测杂交结果而测定样品序列,优点是可以一次分析大量样品,缺点是容易出现假阳性。基因测序的原理是双脱氧链终止法,用仪器测定一条DNA序列,优点是准确率高,没有假阳性,只是通量略低。
⑻ 基因序列比对的意义
大自然是修补匠,而不是发明家。新序列都是由已经存在的序列的变化而来的,而不是凭空产生的。
在生物基因进化过程中,生物中的遗传基因随着地理和气候环境的不断变化而改变 ,导致了原本相同的生物基因序列在进化演变过程中有着稍微的不同,即存在着片段缺失、插入以及相同序列位置发生了改变等问题,从而在物种之间产生了不同的性状。虽然生物基因序列不同,但是在序列之间依然存在一定的相似性关系,生物学家们通过使用现代计算方法来计算出序列之间的相似性程度,从而了解生物之间 的遗传变异关系。一般来说,如果来自于不同生物的基因序列满足了一定的相似性 ,我们就可以判定两生物可能来自于同一个祖先,即具有同源性。
而同源性是一个重要的生物学概念。同源性同源性是一个重要的生物学概念。如果两个物种具有共同的进化祖先,就认为它们是同源的。同源的物种的中的许多部分是相同的。反过来,如果两个物种有相似的子串,那么通常可以断定它们来自共同的祖先。序列比对算法可用来查找这种类似的子串。计算生物学的一个主要主题就是比较序列并尝试找出两个序列的公共部分。
随着计算机技术的成熟与发展,越来越多的算法被开发出来以解决生物学问题。序列对比的算法研究作为计算机科学与生物学的交叉领域,将生命的问题用计算机技术来解决,这是令人非常着迷的。因此不论你是有着计算机的学科背景,还是像笔者我的生物学背景,亦或是业余的爱好者,我们都可以尝试用自己的知识解决该领域的问题。学科之间的交叉碰撞,思维之间的碰撞产生的反应是非常奇妙的!
⑼ 两条长短不一DNA序列该如何比较
有用过NCBI的那个网么~就是各种序列可以通过不同的方法比较,寻找相似的区段,然后匹配的。。。用那个吧,毕竟序列这个东西。。。还是很长的。。。如果是小的节段比较的话。。泪目,就查密码子,看翻译出来的氨基酸序列差的怎么样。。。先找到调节基因和启动子那些,然后再看。。。
⑽ 如何在进行基因序列比对
用比对软件吧 很多的序列比对软件 最简单的就是BLAST,有网页版的,lz可以直接网络,很多