Ⅰ 碱性磷酸酶是测定什么的指标
正常范围：成人 32～92U／L；
儿童 （小于10岁）36～213U／L。
检查介绍：碱性磷酸酶是一种磷酸单酯酶，广泛存在于人体组织和体液中，以骨、肝、乳腺、肠粘膜、肾，胎盘中。
临床意义：增高：
①阻塞性黄疸、肝硬化、肝坏死，碱性磷酸酶明显升高（肝细胞性黄疸则升高不明显）。
②原发性和继发性肝癌时碱性磷酸酶亦明显升高，与癌组织中或癌肿周围肝细胞合成碱性磷酸酶增加有关。
③其他肿瘤如乳腺癌、肺癌、卵巢癌、骨细胞瘤、骨肉瘤等，碱性磷酸酶增高时，提示可能有肝脏转移。
④变形性骨炎、成骨细胞癌、佝偻病、骨软化、甲状腺及甲状旁腺功能亢进、肾小管性酸中毒、遗传性磷酸酶过多症
⑤很多药物可使碱性磷酸酶增高，如巴比妥类、抗生素（红霉素、庆大霉素、氯霉素、卡那霉素、氨苄青霉素等）。
减低：常见于重症慢性肾炎、乳糜泻、贫血、恶病质、儿童甲状腺功能不全或减退、维生素C缺乏症坏血病）。营养不良、呆小症、遗传性低磷酸酶血症。
Ⅱ 碱性磷酸酶染色法 怎么做
本试验是一个酶组织化学试验，酶组织化学是在不破坏组织细胞的条件下，检测酶的存在，定位与活性的学科，即在酶的存在，分布及其用在显微镜下变成可见的。生命是有序的，包括时间的有序及其空间的有序。其中美的空间有序性在于其细胞组织结构的精确位置，各种酶的自己的位置保证了化学活动的有效进行。
酶的定位方法必须准确，其显示方法必须具有高度的特异性，使酶本身具有可见性，这是一种直接的方法，目前主要有免疫荧光化学法，该法敏感性高，速度快，但成本高。如果有相同的抗原决定簇时，则会有交叉反应。方法成熟，使用广泛的还是经典的组织化学方法。下面以碱性磷酸酶的显示方法来学习经典酶组织化学的理论及操作。经典酶组织化学不是显示酶本身，常采用的方法是：在一定条件下，使细胞中的酶作用于酶的底物，使其产物在原地进行捕捉、沉淀转化为有色产物。碱性磷酸酶（AKP）的显示方法最早由Gomeri（1939）提出，现在这种方法称为Gomeri法。碱性磷酸酶是指磷酸单酯酶Ⅰ，它能在pH8.6~10.0的最适条件下分解磷酸单酯，对于与磷酸相接的醇基没有特异性，Gomeri法是让该酶在碱性条件下，分解甘油磷酸钠，产生磷酸根。
在孵育液中加入CaCl2，分解产生的磷酸根离子立即被Ca2 原位捕捉形成沉淀。
HPO2-- Ca2 →→CaHPO4 ↓（无色沉淀）
因出现的是无色沉淀，故还不能在光镜下观察到，尚需转化为有色沉淀，先让制片与Co（NO3）2反应生成磷酸钴：
CaHPO4 Co（NO3）2 →→CoHPO4 ↓（无色沉淀） Ca（NO3）2
再让它与硫化铵反应生成黑色的硫化钴沉淀。
CoHPO4 （NH4）2S→→（NH4）2HPO4 CoS ↓（黑色沉淀）
我们可以在显微镜下观察到黑色沉淀的位置，由于以上的这些操作都是在原位进行的，可以认为黑色沉淀的位置就是酶所在的位置，这类方法是让酶作用于底物而将酶显示出来。因此制作酶组织切片的时候不能使酶失活，还要尽量避免酶所需的反应的产物扩散，否则不会得到正确的结果。
Ⅲ 请教5，试述显示细胞内DNA和碱性磷酸酶的原理和方法
（1）细胞内特异显示DNA的方法是福尔根反应：首先用酸水解去除RNA，仅保留DNA，同时除去DNA上嘌呤脱氧核糖核苷酸的嘌呤，使脱氧核糖的醛基暴露，所暴露的自由醛基与希夫试剂反应呈紫色，从而显示细胞内DNA所在部分。
（2）特异检测碱性磷酸酶的方法是格莫瑞方法：
①样品制备时首先要保存酶的活性；采用冷冻切片，以冷丙酮，甲醛进行短期固定；
②将样品与甘油磷酸酯（底物）共同温育，恢复酶2+的活性；
③酸水解作用释放的磷酸根与Ca结合生成不溶性的磷酸钙；
④进一步转变成金属银或硫化铅等有颜色的化合物；
⑤金属沉淀或显色的部分，即碱性磷酸酶存在的活性部分
Ⅳ 肝功能检查碱性磷酸酶升高原因有哪些
很多化验肝功能的检查者对于碱性磷酸酶升高的原因不了解，那么，呢?下面我们专门请教了济南中医肝病医院的专家们。 碱性磷酸酶在肝脏中存在于肝小管膜，肝碱性磷酸酶是在人体发现的几种碱性磷酶酶同工酶中的一种。各种实验室方法可以检测血清碱性磷酸酶，因此，比较通过不同技术测得的结果可能会有差别。碱性磷酸酶升高的原因是什么呢? 碱性磷酸酶是反映胆道梗阻的敏感指标(在明显的胆道梗阻者中极少见正常值)，受肝内或肝外胆汁排泄的影响。 轻度碱性磷酸酶升高的原因常见于肝炎、肝硬化; 单独的碱性磷酸酶升高的原因可能提示浸润性肝病，包括肿瘤、脓肿、肉芽肿、淀粉样变。 碱性磷酸酶升高的原因与胆道梗阻、硬化性胆管炎、原发性胆汁性肝硬化有关，进一步检查常包括肝脏超声检查、抗线粒体抗体和胆管造影术。 肝病病毒要提高警惕，切勿忽视不理，要及时到正规肝病医院进行正规治疗。济南中医肝病医院是一家肝病专科医院，在治疗肝病上有着丰富的经验，拥有国际先进的检测诊疗设施、权威的专家队伍、规范高效的治疗方案。 独家引进的“超氧自体血激活疗法”更是治疗肝病的一大利器，大部分患者在使用该疗法后当天即可好转，5-7天明显见效，一般一个疗程病毒临床治愈。是广大乙肝患者最佳的选择。同时配合七十六辨扶正还原疗法，从七十六个方面辨证分析、科学用药、扶正为本、祛除毒邪;治疗手段多样化、固本还原、标本兼治;还能够调理腑脏，改善人体内环境。与西医有效结合，滋养肝脏。 通过介绍，相信您对碱性磷酸酶升高有了一定的了解，如果您还有什么疑问，可以拨打我们的免费救助热线与权威肝病专家进行咨询。他们一定会解开您心中的疑问，给予您最耐心的解答。
Ⅳ 酶活性分析的常用方法
一、量气法
在封闭的反应系统中如有气体变化，通过测量变化后的气体体积或压力很容易计算出气体变化量，这是量气法的基本原理。曾在检验科广泛应用的Van-slyke测二氧化碳结合力的方法就是量气法的一个典型例子。Warburg进一步加以发展，设计出专用于测定酶活性的华勃呼吸仪。这种仪器特别适用于测定那些在反应中产生或消耗气体的酶，例如氧化酶反应涉及到O2的消耗，脱羧酶会产生CO2。但也不仅限于这些酶，科学家采用与CO2气体保持平衡过的重碳酸盐体系，可用来测定各种产生H+的酶反应，如各种还原酶，可使NADH变为NAD和H+，而H+会促使反应体系中重碳酸盐变为CO2气体。
二、比色法与分光光度法
在20世纪上半个世纪华勃仪得到研究实验室广泛的应用，并在酶学上得到丰硕的成果。但此法操作烦琐，技术要求高而且灵敏度低。临床常规中很少使用。多使用简单易行的比色法测酶活性。在上半个世纪建立了一些适用于常规工作的测酶活性浓度的方法，如测定淀粉酶的Somogyi法，碱性磷酸酶的Bodansky法、King法等等。这些方法都是在酶和底物作用一段时间后停止酶反应，加入各种化学试剂与产物或基质反应呈色，用比色计在可见光处比色，同时将被测物质作标准管或标准曲线，比较后计算出在此段时间内产物生成量或底物消耗量，从而求得反应速率v。
比色法从50年代起逐步被分光光度法所取代。这是因为分光光度法有以下几个显着优点：一是测定范围不只局限在可见光，还可扩展到紫外和红外部分。这就为扩大测定酶范围提供了可能性。二是提供了寻找一类不需停止酶反应就可直接测定产物生成量或底物消耗量方法的可能性。例某一酶催化下列反应A－＞B＋C，A、B、C三种物质用分光光度法的吸收光谱如图17-1所示。
图17-1 A、B、C三种物质的吸收曲线
可以看到C在560nm处有一吸收峰，而A和B在此处无吸光度变化因此无需停止酶反应，只要在560nm处测定吸光度变化就很容易计算出C的变化速度，而且C物质比A、B二物质有更高的吸收峰，即灵敏度最高。
这类方法中最成功的是Warburg在50年代利用NAD（P）H和NAD（P）吸收光谱差异建立的测酶活性浓度方法。NAD（P）H在340nm处有一吸收峰，而NAD（P）在此波段却毫无吸光性。因此建立了一类和原来比色法截然不同方法。不需停止酶反应，在340nm根据吸光度变化，就可观察到酶反应变化全过程。
第三个优点是不需要如比色法那样，作标准管或标准曲线，因为分光光度计使用近似单色光的光源，在此条件下，某一特定物质的吸光度为常数，即人们所熟悉的摩尔吸光度（molar absorbance）。根据此值从吸光度△A/△T不难计算出酶催化反应速度v。
分光光度计的这些简便、准确等特点使它在近年来已逐步取代比色法而成为目前最流行的方法。其缺点是需要精确带恒温装置的分光光度计，在经济不发达地区尚难推广。
分光光度法的技术多样化。设计得当可用于各种酶的测定。表17-2是一些可用于分光光度法的氧化还原物质特性。
除了前述的NAD(P)H系统可用于脱氢酶测定外，可利用黄素单核苷酸（FMN）和黄素腺嘌呤二核苷酸（FAD）来测定各种含这二个辅基的酶。它们的氧化型在450nm有一很强吸收峰，而还原型的吸光度很低，同样细胞色素还原型在可见光有一个非常明显和很窄的吸收峰，都使人们很容易用分光光度法研究这些酶的作用。上述物质主要用于氧化还原酶的测定。
科学家还设计出一系列人工合成酶的底物，用于其它酶的分光光度法测定。例如合成了很多对硝基酚的衍生物，用于各种水解酶的测定。碱性磷酸酶底物磷酸对硝基酚就是一个成功例子。又如测芳香基硫酸酯酶，可使用人工合成的硫酸对硝基酚为底物，其分解产物的吸收峰由原来的278nm变为318nm，Webb成功地在330nm进行此酶监测
表17-2 一些氧化还原物质的特性
物质 波长（nm） 克分子吸光度
还原型 氧化型
NAD，NADP 340 6300 0
FMN 450 12200
FAD 450 11300
细胞色素C 550 29500 8300
亚甲蓝（等消光点） 610 0 41000
二氢酚吲哚酚 600 0 21000
吩嗪甲酯硫酸 388 1500 22000
抗坏血酸 265 15100
连二亚硫酸盐 314 8000 0
氰化铁（亚铁） 420 0 1020
分光光度法的上述原理还可以用于其它酶的测定，如烯醇化酶、延胡索酸水解酶的底物由于含不饱和键，在330nm处有很强吸收峰，而酶作用产物无此不饱和键。则不难在330nm处对这些酶进行直接测定。
此后在分光光度法的发展过程中又导入了酶偶联技术。使得分光光度法几乎能测定所有的酶。因此临床实验室工作者如不能很好掌握分光光度法的技术，不了解各种影响因素，要作好酶的测定是很困难的。
三、荧光法和同位素法
分光光度法有一个缺点，即灵敏度较低。有些标本中酶浓度很低时往往测不出来。此时可考虑改用荧光法，可将测定灵敏度提高2-3个数量级。如科学家合成了一系列甲基伞形酮的衍生物，可取代对硝基酚衍生物做为一些水解酶的底物，由于水解产物甲基伞形酮有强烈荧光，大大提高测定的灵敏度，就是分光光度法中最常用的NAD(P)H反应系统，也可改用荧光法，在340nm紫外线激发下NAD(P)H产生强烈的蓝色荧光，而NAD(P)不被激发。此外，还可使用在荧光法基础上发展起来的时间分辨荧光法，例如北京医院就曾利用此种灵敏度极高方法测定很难用其它方法检测的脑脊液中微量的烯醇化酶。荧光法不易掌握，对所用的试剂、容器和仪器都要求很高，否则易产生非特异荧光干扰测定，或者引起荧光的淬灭使测定不准，故此种方法多用于研究实验室，少用于常规实验室。为提高灵敏度，还可使用同位素标记的底物进行酶测定，例如，有人以C12标记的乙酰胆碱为底物测定胆碱酯酶，在酶作用后以离子交换法分离出含C14的乙酸。同位素方法由于对人体有害，操作麻烦，目前已很少使用。
四、其它方法
离子选择电极法，旋光法等有时用于测定特定的酶，当酶反应牵涉到有酸碱变化时，很容易用pH仪直接观察酶反应过程中H+的变化。直接用pH仪测酶反应有两个缺点：一是随pH变化，会偏离酶作用的最适pH值，不可避免地引起酶反应速度变慢。其二是如测定的标本不是纯酶时标本中其他蛋白及其它有缓衡能力的物质将会影响所测pH变化的程度。此时如改用电位滴定仪则更为适合。此仪器可在酶反应过程中不断向反应体系中加入酸或碱以维持反应体系pH的恒定，而加入的酸碱量只与体系中H+变化量相关，和反应体系中缓衡能力无关。
同样如酶反应中有O2变化，可使用氧电极来监测酶反应过程，这可用来测定葡萄糖氧化酶活性，Chappell还成功地将此技术用于测线粒体的氧化能力。还曾有人尝试用二氧化碳和氨电极测酶，由于这些电极反应时间较慢，不利于检测酶反应速度。有些酶的反应物为光学异构体，则可根据旋光度变化来追踪酶反应。某些反应物如羟基酸本身虽无旋光性，但与钼结合后产生很高的旋光性。根据此特性建立了测定延胡索酸水合酶的方法。还有个别酶的测定使用了极谱法、高效液相色谱法等。总之，实验室工作者完全可以根据实验室现有仪器和技术，创造性地建立一些新的测活性浓度的方法。
Ⅵ 谢谢你的答复，我已经采纳你的答案为最佳答案。我想问你：骨碱性磷酸酶怎么检测是通过抽血吗
人血清中含有的碱性磷酸酶同工酶分别来自骨骼、肝脏、小肠和胎盘组织(在妊娠时)。胎盘型和小肠型碱性磷酸酶同工酶的活性能相对容易被区分，而区别骨型和肝型这两种同工酶活性就相当困难，因为这两种同工酶来源于同一基因，其动力学性质、电泳迁移率和其他理化性质均十分相似，且相互间有交叉免疫反应，目前鉴别和定量测定骨型碱性磷酸酶的方法可以分为两大类：电泳法和非电泳法。
电泳法主要利不同的同工酶之间物理性状、分子大小及荷电量的不同而进行。根据所用的支持特和操作的方法可分为：醋酸纤维薄膜电泳、琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、等电聚焦电泳和亲和电泳等。其中以等电聚焦电泳和亲和电泳的分辨效果较好。等电聚焦电泳分辨率高特别适合次级同工酶的分离。Sinaha等报告的一种固相pH梯度等电聚焦电泳以聚丙烯酰胺为载体，用两性电解质制成固定的pH梯度凝胶，避免了由于不稳定的pH梯度而引起的所谓“阴极漂移”现象。该法可将等电点准确到小数点后两位并把正常血清的10条酶带压缩在pH3.90～4.79范围。Rosalki等建立的亲和电泳法是利用麦胚植物血凝素(WGA)能特异地和骨型碱性磷酸酶结合形成WGA-骨型碱性磷酸酶复合物，该复合物在电场中不泳动或泳动很慢，从而将骨、肝型碱性磷酸酶清楚地分开。该方法简便，重复性好，骨型碱性磷酸酶的批内与批间CV分别为3.2％和5.2％。亲和电泳的分离效果与WGA的浓度有关，其最适浓度随电泳条件而异。因此，采用不同的电泳载体和不同的缓冲液时均应重新评价WGA的最适用量。
非电泳法有化学抑制法、热失活试验、亲和沉淀法和免疫分析法等[1]。化学抑制法、热失活试验灵敏度和特异性较差。目前只用作鉴别某些病理血清碱性磷酸酶组织来源的过筛试验。亲和沉淀法和亲和电泳法一样利用麦胚植物血凝素的作用将骨型碱性磷酸酶和其他组织来源的碱性磷酸酶分开，然后测定骨型碱性磷酸酶的活性。该方法操作简便，有较好的灵敏度和特异性，但是当血清标本含有胆汁型碱性磷酸酶时，由于该酶也能和麦胚植物血凝素结合而使骨型碱性磷酸酶假性增高。近年建立的免疫分析法能把灵敏度、特异性、可靠及操作简便等特性很好地结合起来，从而满足了临床的常规应用。由Garnro等报道的放射免疫测定法测定的是骨型ALP的免疫活性蛋白而不是酶活力，并具有可以接受的特异性。而最近由Gomez等[1]应用对骨型碱性磷酸酶特异很强的单克隆抗体建立的免疫分析法具有高度的敏感性和特异性，而且操作简便重复性好，被认为是目前鉴别和定量骨型ALP的最佳方法。
本文来自:大众医药网
http://www.51qe.cn/pic/30/15/13/19/037.htm
Ⅶ 谁能告诉我，怎样用对-硝基苯磷酸盐（即PNPP）法测定碱性磷酸酶（ALP）活性
【步骤】
（1）用吸管吸掉96孔板内的培养液，用PBS冲洗3遍，加入含25mmol/L二乙醇胺，1mmol/L氯化镁和6.7mmol/L PNPP的反应液。
（2）每孔150ul.37℃避光放置半小时,然后加0.1mol/L氢氧化钠100ul终止反应,用酶标仪于405nm波长下测定OD值.
（3）样品OD值在ALP标准曲线上读取酶活性值(U/L).
ALP标准曲线绘制:
取PNP0.0111克用三蒸水溶解后稀释至250ml,此时PNP的浓度为320umol/L.依次稀释到160 umol/L，80umol/L,40umol/L,20umol/L,10umol/L和5mol/L.相当于ALP1280 U/L,640U/L,320U/L,160U/L,80U/L,40U/L和20U/L(活性值).用酶标仪于405nm波长下测定PNP的OD值.以ALP活性值作为自变量,对应的OD值作为应变量,求得直线回归方程.
【结果】测定碱性磷酸酶的含量
还有其他方法来测定，比如
以ALP为目标物的检测方法有
1 Gomori钙钴法
2偶氮偶联法
3碱性磷酸酶染色试剂盒法。
4.PNPP偶氮法
5. BCIP/NBT比色法
6 茜素红法
7. von Kossa法
Ⅷ 碱性磷酸酶米氏常数的测定底物浓度的选择要注意什么
碱性磷酸酶米氏常数的测定底物浓度的选择要注意：加入碱性溶液是为了终止反应。从底物浓度高的开始加起是因为低的可能本来就已经停止反应了，所以影响不大，浓度高的还在反应的可能性比低的大。
酶浓度：在反应条件一定时，酶浓度与反应速度成正比。按照中间产物学说，只有［S］>>［E］时，酶才能被底物分子饱和，反应速度才能达到最大值。因此当标本酶活力过高时，应将标本适当稀释后再加以测定。
临床意义
临床上测定ALP主要用于骨骼、肝胆系统疾病的诊断和鉴别诊断，尤其是黄疸的鉴别诊断。对于不明原因的高ALP血清水平，可测定同工酶以协助明确其器官来源。儿童在生理性的骨骼发育期，碱性磷酸酶活力可比正常人高1～2倍。处于生长期的青少年，以及孕妇和进食脂肪含量高的食物后均可以升高。
以上内容参考：网络-碱性磷酸酶
Ⅸ 如何看血常规化血+清钙磷碱性磷酸酶测定+肝功十三项测定+微量元素3项
有感染的可能，建议一个星期后复查。
