1. 河鲀毒素检测方法
在探索和应对河鲀毒素这一危险物质的过程中，科学家们不断寻求更加精准和高效的检测方法。本文综述了多种用于河鲀毒素检测的技术，包括小鼠生物法、酶联免疫法、薄层色谱法、柱后衍生高效液相色谱检测法、气质联用法和液质联用等。这些方法在不同的领域和研究中被广泛应用，尤其是气质联用和液质联用，这些方法在国外的研究中应用较多。
小鼠生物法是最直观且常用的检测方法。通过观察特定体重小鼠在注射河鲀毒素后的死亡时间来估算毒素含量，这种方法在1941年首次应用于定量分析，当时引入了鼠单位（Mouse unit，MU）概念。然而，这种方法受限于个体差异大、重现性不好以及需要一定规模才能客观反映实验结果，因此其应用受到限制。
免疫酶技术结合了抗原抗体反应与酶的高效催化作用原理，于20世纪60年代发展起来。Watabe等在1989年首次应用牛血清白蛋白（BSA）与河鲀酸（TDA）相结合作为抗原，建立了酶联免疫吸附检测（ELISA）法，其检出限为0.3-1000.0mg/L。李世平等利用这种方法与小鼠生物试验法同步检测河鲀组织中的河鲀毒素含量，结果显示ELISA法与小鼠生物试验法测得的结果相符合，这种方法因其简便、快速和高灵敏度在河鲀毒素的定量检测和预防中毒方面具有广泛的应用前景。
高效液相色谱（HPLC）是一种在分析和制备领域广泛应用的技术，以其高分离效率、良好分辨率和快速检测能力着称。张虹等采用醋酸与TTX结合形成离子对，在ODS柱上使用紫外检测器直接测定TTX含量，该方法操作简便、快速且准确，最低检测限为50ng。王小逸等利用蒸发光散射检测器进行TTX测定，适用于微克水平的河鲀毒素含量测定。刘海新等采用柱后衍生高效液相色谱法检测水产品中的河鲀毒素含量，样品先由0.1%乙酸提取，再经过C18固相萃取柱净化，以庚烷磺酸钠为离子对试剂，应用反相离子对液相色谱分离河鲀毒素，采用在线柱后衍生系统，荧光检测器定量检测。这种方法在一定浓度范围内呈良好的线性相关，回收率和相对标准偏差在合理范围内，定量限为1μg/g。
质谱技术的发展使得色谱质谱联用成为分析行业最有效和最准确的分析方法之一。SaitoT在1993年利用气-质联用从刀鱼中检测到TTX及其同分异构体的存在。Nagashima等在20世纪90年代使用气-质联用从暗纹东方鲀肝脏中检测到河鲀毒素的存在。吴平谷等采用2%乙酸/甲醇提取河鲀毒素，通过C18和SLH固相萃取柱净化，BSTFA衍生，采用气相色谱—质谱法全扫描方式测定。液相色谱质谱法与气相色谱质谱法相比，具有更广的应用范围，无需衍生化，简化了分析手段。
荧光法是最早的定量检测TTX的仪器分析方法之一。Saito等在1976年首次提出荧光法，原理是通过加碱水解后生成的2-氨基6-羟甲基8-羟基喹唑啉（C9碱）具有荧光性质，建立了最早的荧光分析法。虽然荧光分光光度计在中国的使用不如紫外分光光度计普遍，但陈玉仁等通过定量生成草酸钠，这种方法在紫外区具有明显吸收峰的特点，建立了一种紫外分光光度法。相比于荧光法，该方法仪器设备更便宜，最低检出限接近。
Nagashima等建立了薄层色谱快原子轰击质谱的测定方法，先在LHP-K板上进行TLC纯化TTX及其衍生物，然后使用质谱定量，最低检出限为0.1g。这种方法可以区分在其他TLC方法中难以区分的TTX和脱水TTX，无需TMS硅烷化，即使被测物的TLC行为不清时也可以进行测定。
1988年，王健伟研究建立了无需水解的薄层色谱（TLC）分析方法用于TTX的定量检测，采用火焰离子检测器，无需将TTX降解为C9碱，避免了衍生反应过程中可能存在的干扰。
河鲀毒素(tetrodotoxin,TTX)是鲀鱼类（俗称河豚鱼）及其它生物体内含有的一种生物碱。其分子式为C11H17O8N3，分子量为319。该毒素经腹腔注射对小鼠的LD50为8μg/kg。曾一度被认为是自然界中毒性最强的非蛋白类毒素。河鲀毒素的化学性质稳定，一般烹调手段难以破坏。中毒后也缺乏有效的解救措施。河豚毒素纯品的国际市场价每克可达21万美元，具有极高商业价值。
2. 请问河豚鱼毒素(TTX)的检测方法是什么有国标吗有没有快速检测方法及其相关资料呀
河豚毒素（TTX）定量酶联免疫检测试剂盒说明书
ELISA-kit for TTX
本测试盒用间接竞争免疫分析法定量测定河豚鱼中的河豚毒素（TTX）。该测试盒反应孔可拆卸，可测单份样品，也可测多份样品。定量分析时需有含450nm波长的微孔板酶标仪。
1 概要
河豚毒素（TTX）是一种强神经毒素，其性质稳定，加热、盐腌及高温烹煮均不易使其被破坏。河豚鱼中常含有河豚毒素。我国沿海居民素有食用河豚鱼的习惯。因误食或食用加工不当的河豚鱼而发生人畜中毒的事件每年都有发生。故准确检测河豚鱼中的河豚毒素对预防和控制河豚毒素中毒，具有重要意义。本检测方法具有灵敏、快速、简便、特异性好、取样量小并可同时检测大量样品等优点。
2 测定原理
本试剂盒采用固相酶联免疫吸附原理，利用间接竞争ELISA法进行测定。用抗原包被微孔板，加入河豚毒素标准品或样品、抗河豚毒素单克隆抗体进行孵育后，将未与包被抗原结合的抗体洗去；再加入酶标记的抗鼠IgG抗体孵育，加入显色液，经过终止液终止后，用酶标仪在450nm处测定OD值。
3 提供的物品
微孔板
5个浓度的TTX标准溶液（各0.5mL）
标准1：0ng/mL ……………………………………………………………直接使用
标准2：10.0ng/mL ………………………………………………………直接使用
标准3：20.0ng/mL ………………………………………………………直接使用
标准4：50.0ng/mL ………………………………………………………直接使用
标准5：200.0ng/mL ………………………………………………………直接使用
抗体溶液(6mL) …………………………………………………………………直接使用
酶标物(12mL) …………………………………………………………………直接使用
显色液(12mL) …………………………………………………………………直接使用
终止液(6mL) ………………………………………………………………………直接使用
浓缩洗液(30mL) …………………………………………………………………稀释使用
4 盒中未提供，需自备物品
微孔板酶标仪（含450nm）、离心机、电炉、微量移液器、磁力搅拌器
量筒、漏斗、容量瓶、快速定性滤纸、分液漏斗
乙酸、氢氧化钠、去离子水或蒸馏水、PBS缓冲液
5 操作者注意事项
标准溶液中含有TTX毒素，应特别小心。
终止液为0.5M硫酸，避免接触皮肤。
每次加样后立即将所有试剂放回2~8 ℃。
每步加样时间应控制在5min内。
孵育过程中应避光。
不要使用过期试剂盒。
不要交叉使用不同批号试剂盒中的试剂。
6 储存条件
保存试剂盒于2~8℃。不要冷冻
显色液对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。
将不用的微孔板放进原铝箔袋中，置2~8℃保存。
7 试剂变质的标志
标准1的吸光度值小于0.5个单位（A450nm<0.5）时，表示试剂可能变质。
8 样品处理
8.1 鲜河豚鱼中河豚毒素的检测
----称取5g河豚鱼样品(肌肉、皮或内脏)，剪碎，加入25mL 0.1%的乙酸，用烧杯在电炉上煮沸搅拌10min。此步骤应注意不要让液体沸出容器，应控制加热温度，并不断搅拌。
----待冷却至室温后，上清用快速定性滤纸过滤于50mL离心管中
----沉淀用20mL0.1% 乙酸洗到烧杯中，再煮沸3min
----冷却至室温后，所有的液体及煮沸的样品都加到离心管中，3000rpm离心10min。
----取上清，量体积，置分液漏斗中
----加入等体积乙醚，振摇1分钟，静置分层。放出水层，量体积后至另一分液漏斗中，再加入等体积的乙醚，振摇1分钟，静止分层。
----将水层放入50mL容量瓶中，用1M氢氧化钠调节提取液中的pH值至6.5~7.4，然后加入PBS至50mL，提取液4℃保存备用。
8.2 鱼片、鱼干制品中河豚毒素的检测
-----样品中的TTX用0.1%乙酸在水浴中超声提取，提取液中的TTX用ELISA方法进行检测，若样品中TTX含量低于检出限则报告为<100mg/kg；样品中TTX含量在100~3000mg/kg之间，直接按ELISA实验结果报告；如果样品中TTX含量达到3000mg/kg，则需采用小鼠生物测定法进行验证，确认毒性反应后再按照ELISA实验结果报告。
9 酶免疫分析程序
----浓缩洗液为10倍浓缩液，使用时与去离子水或蒸馏水按体积比1:9稀释后使用。
----取所需数量的板条插入微孔架，用洗液洗涤微孔板3min×2次，记录样品及标准的位置。
----加入50mL标准品或处理好的样品到微孔，每个标准和样品必须使用新的吸头。
----加入50mL抗河豚毒素单克隆抗体溶液到每个微孔（注意移液器管尖不要接触到孔中的液体，避免交叉污染）中，37℃孵育90min。
----甩掉孔中液体，用洗液洗涤微孔板3min×3次，最后一次应在吸水纸上拍打以完全除去孔中液体。
----每孔加入酶标物100mL，37℃孵育60min。
----用洗液洗涤微孔板3min×5次，最后一次应在吸水纸上拍打以完全除去孔中液体。
----每孔加入显色液100mL（2滴），37℃孵育12min。
----每孔加入终止液50mL（1滴），立即用酶标仪在波长450nm处测定吸光度值（OD值）。
注：在定量分析中，显色液和终止液需要用移液器准确量取。
10 样品浓度计算
以标准溶液OD值与标准1的OD值的比值为纵坐标（即标准品OD比），所对应标准溶液浓度（ng/mL）的对数值为横坐标，制作标准曲线。根据样品OD值与标准1的OD的比值（即样品OD比），可从曲线上得到对应点的横坐标，即为TTX浓度的对数值，求得反对数即为测定液中TTX浓度C（ng/mL），按下列公式计算出样品中TTX含量：
TTX含量（mg/kg）= 10×C×K
式中：C：测定液中TTX浓度（ng/mL）
K：提取液的稀释倍数
11 主要技术指标及参数
11.1 最低检出浓度10.0 ng/mL。
11.2 加标回收率在70~120%，条内变异系数＜10%，条件变异系数＜15%。