① 检测目的基因是否表达的方法
检测目的基因是否表达的方法主要包括以下几步:
Realtime检测mRNA水平:
Western blot检测蛋白水平:
检测细胞功能指标:
综上所述,检测目的基因是否表达需要综合运用多种技术手段,从mRNA水平到蛋白水平,再到细胞功能指标,进行全面而准确的评估。
② 怎样用抗原-抗体的方法检验目的基因是否翻译出蛋白质原理是什么
检测目的基因是否进入到受体细胞的方法,一般包括分子水平检测和个体水平检测。其中分子检测有3个层次:1目的基因是否整合到受体细胞染色体dna上,2目的基因是否转录出mrna,3目的基因是否翻译出蛋白质。1和2都可以用dna分子杂交技术检测,3可以用抗体-抗原的方法检测。个体水平的检测包括抗虫、抗病的接种实验,以确定是否具有抗性及抗性的程度;基因工程产品需要与天然产品的功能进行活性比较等。
stern杂交──蛋白质分子(抗原—抗体)之间的杂交。它是检测目的基因是否表达出蛋白质的一种方法。
具体做法是:
第一步,将目的基因在大肠杆菌中表达出蛋白质;
第二步,将表达出的蛋白质注射动物进行免疫,产生相应的抗体,并提取出抗体(一抗);
第三步,从转基因生物中提取蛋白质,走凝胶电泳;
第四步,将凝胶中的蛋白转移到硝酸纤维素膜上;
第五步,将抗体(一抗)与硝酸纤维素膜上的蛋白杂交,这时抗体(一抗)与目的基因表达的蛋白(抗原)会特异结合。
由于这种抗原—抗体的结合显示不出条带,所以加入一种称为二抗的抗体,它可以与一抗结合,二抗抗体上带有特殊的标记。如果目的基因表达出了蛋白质,则结果为阳性。
③ 高二生物中的目的基因的检测与鉴定
目的基因的检测与鉴定分分子水平检测和个体水平鉴定。
个体水平鉴定简单说就是把导入了目的基因的生物体培养出来,看生物个体中是否能表达出你所需要的性状。
分子水平检测就相当麻烦了,它有三个步骤。
首先,要检测转基因生物的DNA上是否插入了目的基因。方法是采用DNA分子杂交技术,即将转基因生物的基因组DNA提取出来,同时,在外面(像基因文库中)取一段新的含有目的基因的DNA片段,用放射性同位素等作标记,以此来作为探针,将探针与基因组DNA杂交,来检测。(实际上就是DNA复制的情况,DNA复制时,一条双链的DNA分子解旋成了两条单链的DNA,而探针也是一条双链的DNA片段解旋成了两条单链的DNA片段,因为探针上也有目的基因,基因组的DNA上也有目的基因,在重新形成新的2条DNA,也就是复制时,碱基互补配对,则含目的基因的探针上的单链能与同样含目的基因的基因组DNA单链配对,形成一条新的DNA双链分子,一旦形成新的DNA分子后,放射性标记能在新的DNA分子中含目的基因处发出荧光,从而表明目的基因已导入。)
其次,就是大大你说的检测目的基因是否转录出了mRNA,方法和上面一样,但不同之处是,从转基因生物中提取出的是mRNA,同样,同时,在外面(像基因文库中)取一段新的含有目的基因的DNA片段,用放射性同位素等作标记,以此来作为探针,将探针与mRNA杂交,来检测。(这里实际上和DNA的转录翻译有点像,毕竟mRNA是单链的,实际上是探针DNA解旋成两条单链的DNA片段,就像转录一样,这时的mRNA会与单链的DNA碱基互补配对,显现出标记的同位素荧光,表明mRNA上有目的基因。)所以说,mRNA与目的基因杂交,是和DNA杂交,不是mRNA与目的基因的转录出的mRNA杂交。
最后要检验的就是看目的基因能否翻译成蛋白质,就不多说了。
不知道讲的清不清楚,语文表达有限,希望你能理解啊。