药品里金黄色葡萄球菌检测方法

1. 葡萄球菌生化鉴定试剂盒有哪些试验

血浆凝固酶试验是用于鉴定葡萄球菌的一种关键方法，特别是金黄色葡萄球菌。这种试验区分结合型和游离型血浆凝固酶。结合型凝固酶直接作用于菌体表面的纤维蛋白原，将其转化为纤维蛋白；而游离型则分泌到菌体外，激活血浆中的凝血酶原转化为凝血酶，进一步作用于纤维蛋白原。测量方法有玻片法和试管法两种。玻片法中，待试菌落乳化于盐水中，加人血浆后出现凝集者为阳性。试管法则需将兔血浆与培养物混匀，37℃培养观察凝固现象。

耐热核酸酶试验涉及24小时肉汤培养物沸水浴处理15分钟后，划线刺种于甲苯胺兰-DNA平板，35℃培养24小时。若刺种线周围出现淡粉色，则为阳性。这一试验用于快速鉴别金黄色葡萄球菌。甘露醇发酵试验则用于检测金黄色葡萄球菌是否能发酵甘露醇。

Staphaurex胶乳凝集试验是一种快速简便的直接凝集试验，用于鉴定金黄色葡萄球菌。其原理是在纸片上滴加包被有纤维蛋白原和IgG抗体的聚苯乙烯胶乳，加入待鉴定菌株培养物后，若出现凝集块则为阳性。生化鉴定需注意与凝固酶阳性的葡萄球菌鉴别，可通过PYR（阴性）、VP（阳性）、鸟氨酸脱羧酶试验（阴性）等试验。

免疫学方法如酶联免疫吸附试验和对流免疫电泳可用于检测金葡菌的磷壁酸抗体。分子生物学方法如PFGE脉冲场凝胶电泳以及酶切图谱分析等，可用于更深层次的鉴定。

2. 金黄色葡萄球菌的检验过程

1、样品制备：

称取25g样品至盛有225mL7.5%氯化钠肉汤中，固体样品研磨或置均质器中做成1:10的样品混悬液。若供计数检验，可按十进制递增稀释法将样品匀液再进行适当稀释。

2、增菌与分离培养：

将上述样品匀液于36℃±1℃培养18h～24h。金黄色葡萄球菌在7.5%氯化钠肉汤中呈混浊生长。将上述培养物，分别划线接种到Baird-Parker平板和血平板，血平板36℃±1℃培养18h～24h。Baird-Parker平板36℃±1℃培养24h～48h。

金黄色葡萄球菌在Baird-Parker平板上，菌落直径为2mm～3mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明圈见图[4]。用接种针接触菌落有似奶油至树胶样的硬度，偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落；但无混浊带及透明圈。长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙并干燥。在血平板上，形成菌落较大，圆形、光滑凸起、湿润、金黄色（有时为白色），菌落周围可见完全透明溶血圈见图[5]。挑取上述菌落进行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶试验。

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