南京cck8检测细胞增殖的方法

Ⅰ cck8实验步骤及注意事项

cck8实验步骤：

1、细胞种板：将对数生长期细胞用胰蛋白酶消化，配制成细胞悬液，每孔加入100μl，使每孔细胞密度1000-5000个，边缘孔用无菌PBS填充。5%CO2，37℃培养至细胞贴壁铺满孔底。

2、按实验方案加入药物。每种处理建议设置4-6个复孔。

3、处理结束后，每个孔中分别加入10μlCCK-8溶液，轻轻敲击培养板混匀，培养箱中孵育1-4小时。

4、使用酶标仪测定450nm光吸收值，按公式计算药物对细胞的抑制率。

注意事项

1、如果暂时不测定OD值，可向每孔中加入10μl0.1M的HCl溶液或者1%SDS（w/v）溶液，室温避光保存，在24h内测定，吸光值不会发生变化。

2、如果待测物质有氧化性或者还原性，可在加CCK-8之前除去旧培养液，并用培养基洗涤两次，然后加入新鲜培养基，以去除影响。