细胞焦亡的检测方法

1. 如何测定细胞死亡率，方法有哪些

取决于癌细胞是哪种类型，一般来说在药理学实验中，实体瘤死亡率的测定通常采用瘤重的称量，分别称量给药前和给药后的瘤重，直接换算成癌细胞的死亡比例。非实体瘤，如血癌，可以用白细胞计数器计数，换算成每立方毫米的癌细胞数，分别测定给药前和该药后的癌细胞数，它们之间比例的减小就是癌细胞的死亡率。根据每个细胞有一定的重量而设计的。它可以用于单细胞、多细胞以及丝状体微生物生长的测定。将一定体积的样品通过离心或过滤将菌体分离出来，经洗涤，再离心后直接称重，求出湿重，如果是丝状体微生物，过滤后用滤纸吸去菌丝之间的自由水，再称重求出湿重。不论是细菌样品还是丝状菌样品，可以将它们放在已知重量的平皿或烧杯内，于105℃烘干至恒重，取出放入干燥器内冷却，再称量，求出微生物干重。

2. 溶酶体Rag-Ragulator复合物调控RIPK1，你了解吗

在感染期间，耶尔森氏菌对蛋白激酶 TAK1 的抑制触发了成孔蛋白 Gasdermin D (GSDMD) 的裂解，这会导致一种称为细胞焦亡的炎性细胞死亡。确定溶酶体系留的调节超级复合物是耶尔森氏菌诱导的细胞焦亡的关键驱动因素。需要 GTPase Rag 的活性和 Rag-Ragulator 的溶酶体束缚来募集和激活激酶 RIPK1 和蛋白酶 caspase-8 以切割 GSDMD，从而导致细胞死亡并限制感染。相比之下，炎症小体介导的细胞焦亡不需要 Rag-Ragulator。 因此，溶酶体上的代谢信号可以调节病原细菌感染期间的细胞死亡。

为了确定耶尔森氏菌激活 RIPK1–caspase-8 依赖性细胞焦亡的分子机制，我们使用表达 Cas9 的永生化小鼠骨髓衍生巨噬细胞进行了全基因组 CRISPR 筛选，这些巨噬细胞感染了单向导 RNA 的全基因组文库–编码慢病毒。对抗 caspase-8 或 caspase-11 依赖性细胞焦亡的细胞基因组进行测序，以确定细胞焦亡所需的敲除基因。