Ⅰ 实验室中常用的DNA分子量的测定方法有哪些
第一种方法最常用
1)紫外吸收法也就是测量OD(260)和OD(280)的吸收值,这样的方法其它的杂质对测量结果影响大一点,因为其它杂质在这两个吸收波长也有吸收.
(2)荧光法,用PicoGreen荧光染料,测定DNA,RNA浓度比较灵敏,并且适合测量低浓度和微量DNA和RNA,并且受其它杂质的影响不大,缺点要有专门的荧光检测仪器,试剂比较昂贵.
纯化DNA可以买试剂盒,主要有膜吸附法,磁珠分离法,都很方便.
RNA与DNA最重要的区别一是RNA只有一条链,二是它的碱基组成与DNA的不同,RNA没有碱基T(胸腺嘧啶),而有碱基U(尿嘧啶).所以导致他们有以下性质上的不同.
1.两性解离:DNA无,只有酸解离,碱基被屏蔽(在分子内部形成了H键).RNA有,有PI.
2.粘度大:DNA;RNA,粘度由分子长度/直径决定,DNA为线状分子,RNA为线团.
3.碱的作用:DNA耐碱RNA易被碱水解.
4.显色反应:
鉴别DNA和RNA+浓HCl RNA ------→ 绿色化合物
DNA ------→ 蓝紫色化合物苔黑酚
二苯胺啡啶溴红(荧光染料)和溴嘧啶都可对DNA染色,原理是卡在分子中,DNA的离心和电泳显色可用它们.
DNA和RNA的鉴别染色
利用吖啶橙的变色特性可鉴别DNA和RNA.吖啶橙作为一种荧光染料已被用于染色固定,非固定细胞核酸,或作溶酶体的一种标记.观察死亡细胞荧光变色性变化以及区别分裂细胞和静止细胞群体.虽然测定DNA和RNA含量时较难获得好的重复性结果,但该方法已被许多实验室广泛采用.
5.溶解性:都溶于水而不溶于乙醇,因此,常用乙醇来沉淀溶液中的DNA和RNA.DNA溶于苯酚而RNA不溶,故可用苯酚来沉淀RNA.
6.紫外吸收:核酸的λm=260nm,碱基展开程度越大,紫外吸收就越厉害.当A=1时,DNA:50ug/ml,RNA和单链DNA:40ug/ml,寡核苷酸:20ug/ml.用A260/A280还可来表示核酸的纯度.
7.沉降速度:对于拓扑异构体(核苷酸数目相同的核酸),其沉降速度从达到小依次为:RNA ; 超螺旋DNA > 解链环状DNA ; 松弛环状DNA ; 线形DNA也就是在离心管中最上层是线形DNA,最下面是RNA.
8.电泳:核苷酸、核酸均可以进行电泳,泳动速度主要由分子大小来决定,因此,电泳是测定核酸分子量的好方法.
9.DNA分子量测定最直接的方法:用适当浓度的EB(溴嘧啶)染色DNA,可以将其他形式的DNA变成线形DNA,用电镜测出其长度,按B-DNA模型算出bp数,根据核苷酸的平均分子量就可计算出DNA的分子量.
Ⅱ 基因检测有哪些方法
基因检测是通过血液、其他体液、或细胞对DNA进行检测的技术。基因是DNA分子上的一个功能片段,是遗传信息的基本单位,是决定一切生物物种最基本的因子;基因决定人的生老病死,是健康、靓丽、长寿之因,是生命的操纵者和调控者。
因此,哪里有生命,哪里就有基因,一切生命的存在与衰亡的形式都是由基因决定的,包括您的长相、身高、体重、肤色、性格等均与基因密不可分。基因检测可以确定个体性,也可以通过群体比较而确定其群体(祖源)特征,大海捞针先缩小区域、再检测个体性。
Ⅲ 什么是DNA检测
DNA检测即基因检测是通过血液、其他体液、或细胞对DNA进行检测的技术,是取被检测者外周静脉血或其他组织细胞,扩增其基因信息后,通过特定设备对被检测者细胞中的DNA分子信息作检测。分析它所含有的基因类型和基因缺陷及其表达功能是否正常的一种方法。
因为基因是遗传的基本单元,携带有遗传信息的DNA或RNA序列,通过复制,把遗传信息传递给下一代,指导蛋白质的合成来表达自己所携带的遗传信息,从而控制生物个体的性状表达。所以人们能了解自己的基因信息,明确病因或预知身体患某种疾病的风险或是否正常。
基因检测对某些疾病而言具有非常重要的意义,比如乳腺癌,结直肠癌,肺癌,宫颈癌等。可以发现家族易感基因,进行零级预防,延缓临床症状的出现。基因检测是有局限的,它存在特异性及敏感性的问题。
如果基因的突变导致了蛋白的改变,就会产生癌症。但这个基因在突变过程中,我们人类还有一个修复基因,来纠正它的错误。其实正常人的基因每天都在突变,但为什么不是所有的人得癌症,就是因为有修复基因的存在。
当突变和修复失衡,蛋白质发生了变异,人体才会失去正常功能。可以说,我们每天都在癌变,但是大部分并没有形成癌症。所以基因不是一成不变的,而是一个动态的过程。这就是基因检测的局限性所在。
(3)检测dna分子的方法专业术语扩展阅读;
20世纪40-70年代,科学家逐渐了解到生物的遗传信息是DNA承载的,DNA的碱基序列决定了生物的所有性状,而控制每个性状的序列被称为基因。英国科学家弗雷德里克·桑格于1975年发明了“链终止法”DNA测序技术,从此,人类从分子层面认识了生物遗传的本质。
1980年代起,美国领头发起了人类基因组计划,其最终目标是把人类DNA全部进行测序。这个计划不仅促进了人类对基因的理解,而且极大地促进了基因测序技术的成熟。各种基因芯片和二代测序的发展也让基因测序的价格飞速下降。测序价格的下降,也促进了人们对疾病机制的了解。
当测序技术开始发展时,一些医生和生物学家开始尝试使用测序技术对一些已知由基因突变导致的疾病——比如遗传病——进行诊断和研究。当时,基因测序的价格还不是普通民众能够接受的,这项技术也仅仅在科学研究中被使用。
Ⅳ DNA检测的原理、方法和手段。
要看你是要测DNA的序列还是仅仅检测有没有DNA。如果要检测DNA的存在就用二苯胺试剂在水浴加热的条件下观察到蓝色现象(原理是DNA遇二苯胺试剂在水浴加热的条件呈蓝色),如果要检测DNA的序列就通过DNA分子杂交技术对从生物细胞内提取的DNA分子进行测序(原理是DNA的碱基互补配对原则),如果是检测DNA在细胞中的位置就用甲基绿吡罗红滴一滴在显微镜下观察观察到细胞核呈绿色,细胞核外有部分点为红色(原理是甲基绿好吡罗红对DNA和RNA的亲和力不同,甲基绿对DNA亲和力强吡罗红对RNA的亲和力强)
Ⅳ 高考 什么是DNA分子杂交技术
DNA分子杂交技术:一种对基因工程中基因是否进入受体细胞的检测技术。此概念有别于分子杂交技术,DNA分子杂交技术是针对于DNA而言,分子杂交技术针对对象可以是DNA也可以是RNA。
核酸分子杂交具有很高的灵敏度和高度的特异性,因而该技术在分子生物学领域中已广泛地使用于克隆基因的筛选、酶切图谱的制作、基因组中特定基因序列的定性、定量检测和疾病的诊断等方面。
因而它不仅在分子生物学领域中具有广泛地应用,而且在临床诊断上的应用也日趋增多。 利用DNA探针还可以用于环境监测,如检测饮用水中病毒的含量。此法更快速、灵敏。
(5)检测dna分子的方法专业术语扩展阅读:
核酸分子杂交作为一项基本技术,已应用于核酸结构与功能研究的各个方面。核酸分子杂交具有很高的灵敏度和高度的特异性,因而该技术在分子生物学领域中已广泛地使用于克隆基因的筛选、酶切图谱的制作、基因组中特定基因序列的定性、定量检测和疾病的诊断等方面。
因而它不仅在分子生物学领域中具有广泛地应用,而且在临床诊断上的应用也日趋增多。在医学上,目前已用于多种遗传性疾病的基因诊断(gene diagnosis),恶性肿瘤的基因分析,传染病病原体的检测等领域中,其成果大大促进了现代医学的进步和发展。
基因工程第三步目的基因的鉴定中:
1、鉴定目的基因是否整合到染色体DNA上:DNA-DNA分子杂交。
2、鉴定目的基因是否准确表达蛋白质:RNA-DNA分子杂交或抗原-抗体杂交。
Ⅵ 基因检测方法有哪些
基因是遗传的基本单元,携带有遗传信息的DNA或RNA序列,通过复制,把遗传信息传递给下一代,指导蛋白质的合成来表达自己所携带的遗传信息,从而控制生物个体的性状表达。基因检测是通过血液、其他体液、或细胞对DNA进行检测的技术,是取被检测者外周静脉血或其他组织细胞,扩增其基因信息后,通过特定设备对被检测者细胞中的DNA分子信息作检测,分析它所含有的基因类型和基因缺陷及其表达功能是否正常的一种方法,从而使人们能了解自己的基因信息,明确病因或预知身体患某种疾病的风险。
基因检测可以诊断疾病,也可以用于疾病风险的预测。疾病诊断是用基因检测技术检测引起遗传性疾病的突变基因。应用最广泛的基因检测是新生儿遗传性疾病的检测、遗传疾病的诊断和某些常见病的辅助诊断。
一般有三种基因检测方法:生化检测、染色体分析和DNA分析。
1.生化检测
生化检测是通过化学手段,检测血液、尿液、羊水或羊膜细胞样本,检查相关蛋白质或物质是否存在,确定是否存在基因缺陷。用于诊断某种基因缺陷,这种缺陷是因某种维持身体正常功能的蛋白质不均衡导致的,通常是检测测试蛋白质含量。还可用于诊断苯丙酮尿症等。
2.染色体分析
染色体分析直接检测染色体数目及结构的异常,而不是检查某条染色体上某个基因的突变或异常。通常用来诊断胎儿的异常。
常见的染色体异常是多一条染色体,检测用的细胞来自血液样本,若是胎儿,则通过羊膜穿刺或绒毛膜绒毛取样获得细胞。将之染色,让染色体凸显出来,然后用高倍显微镜观察是否有异常。
3.DNA分析
DNA分析主要用于识别单个基因异常引发的遗传性疾病,如亨廷顿病等。DNA分析的细胞来自血液或胎儿细胞。
基因检测可以分为以下五类:
1.基因筛检
主要是针对特定团体或全体人群进行检测。大多数通过产前或新生儿的基因检测以达到筛检的目的。
2.生殖性基因检测
在进行体外人工授精阶段可运用,筛检出胚胎是否带有基因变异,避免胎儿患有遗传性疾病。
3.诊断性检测
多数用来协助临床用药指导。
4.基因携带检测
基因携带者如果与某些特殊基因相结合,可能会导致下一代患基因疾病,通过基因携带者的检测可筛检出此种可能,作为基因携带者婚前检查、生育时的参考。
5.症状出现前的检测
检测目的是了解健康良好者是否带有某种突变基因,而此基因与特定疾病的发生有密切的联系。
临床意义
1.用于疾病的诊断
如对结核杆菌感染的诊断,以前主要依靠痰、粪便或血液培养,整个检验流程需要在两周以上,采用基因诊断的方法,不仅敏感性大大提高,而且在短时间内就能得到结果。
2.了解自身是否有家族性疾病的致病基因,预测患病风险
资料证实10%~15%的癌症与遗传有关,糖尿病、心脑血管疾病等多种疾病都与遗传因素有关。如具有癌症或多基因遗传病(如老年痴呆、高血压、糖尿病等)的人可找出致病的遗传基因,就能够有针对性地调整生活方式,预防或者延缓疾病的发生。
3.正确选择药物,避免滥用药物和药物不良反应
由于个体遗传基因上的差异,不同的人对外来物质产生的反应也会有所不同,因此部分患者使用正常剂量的药物时,可能会出现药物过敏、红肿发疹的现象。根据基因检测的结果,可制定特定的治疗方案,从而科学地指导使用药物,避免药物毒副反应。
Ⅶ 细胞内DNA、RNA、蛋白质常用的分子生物学检测方法shi
细胞内DNA用甲基绿检测,而rna用吡罗红检测,蛋白质则用双缩脲试剂检测。
Ⅷ 对目的基因进行鉴定和检测,有多种方法和技术,从分子
基因鉴定时一定要先经过PCR技术,直接进行鉴定是不行的。
基因鉴定技术是一项生物学检测技术,人体细胞有总数约为30亿个碱基对的DNA,每个人的DNA都不完全相同,人与人之间不同的碱基对数目达几百万之多,因此通过分子生物学方法显示的DNA图谱也因人而异,由此可以识别不同的人。所谓“DNA指纹”,就是把DNA作为像指纹那样的独特特征来识别不同的人。由于DNA是遗传物质,因此通过对DNA鉴定还可以判断两个人之间的亲缘关系。
基因鉴定的原理其实是DNA分子杂交,这种分子杂交是在缓冲液中进行的,由于DNA分子杂交时,两个分子相遇的机会不是很大,所以就需要众多的带有目的基因的DNA与待测的DNA分子,而PCR技术就是将目的基因进行扩增的一种技术手段,所以在进行基因鉴定时并不是直接进行鉴定的,而是先进行PCR技术将目的基因扩增再进行鉴定。
Ⅸ DNA检测需要哪些步骤 DNA检测中需要哪些设备哪些试剂
DNA检测:即基因检测,指通过基因芯片对被测者细胞中的DNA分子进行检测,分析出被检测者所含的各种致病基因和疾病基因情况的一种技术.检测的时候,先把受检者的基因从血液或其他细胞中提取出来.然后用可以识别可能存在突变的基因的引物和PCR技术将这部分基因复制很多倍,用有特殊标记物的突变基因探针方法、酶切方法、基因序列检测方法等判断这部分基因是否存在突变或存在敏感基因型.目前基因检测的方法主要有:荧光定量PCR、基因芯片、液态生物芯片与微流控技术等.
PCR扩增仪和相关计算机设备是最基本的的仪器.选用不同方法所用到的试剂和仪器会有一定差异.
Ⅹ DNA检测的方法都有哪些
DNA检测
技术有很多,主要分为定性和定量方法。给你举几个:1,分子杂交技术,(包括southern杂交,northern杂交,基因芯片等)分子杂交分析的基本原理是基于DNA探针检测变性而且固定在硝酸纤维素膜上的宿主细胞DNA。这些探针可以不依赖宿主细胞DNA来制备,例如用随机引物制备探针。探针上标记酶﹑生物素﹑放射性同位素﹑地高辛(Dig)等。由于地高辛标记核酸探针,操作方便、灵敏度高,已标记的探针在4℃贮存可达两年之久,方便随时应用,所以现在常采用地高辛标记核酸探针,用光标记法将光敏Dig标记到探针上,制成光敏-Dig-核酸探针,再与固定在硝酸膜上的靶核酸进行靶DNA分子杂交,使之与抗Dig-碱性磷酸酶结合,最后可用不同的检测方式进行检测,
发光检测
和显色检测均可,灵敏度可达10pg以下2,基于DNA结合蛋白的方法Threshold®
Immunoassay分析系统是基于两种DNA序列非特异性蛋白,单链DNA(ssDNA)结合蛋白(SSB)和抗ssDNA
的单抗。检测的基本过程是当生物素—DNA单链结合蛋白和尿素酶—抗ssDNA
的单抗与变性的宿主细胞DNA结合最终形成复合物,通过亲合素将此复合物连接到生物素—硝酸纤维素膜,在通过洗涤所有非特异性的被洗脱掉,最后放于有
尿素溶液
的读数仪,尿素酶催化尿素分解成NH3和CO2
导致PH值发生变化,读数仪根据PH值的变化换算成DNA的量,从而达到检测残余DNA含量的目的。3,PCR法,其中以实时定量PCR法最为突出荧光定量
PCR是基于PCR扩增时,在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,产物的增加可以通过荧光信号指示,通过实时监控PCR体系中的荧光信号,对样本中初始模板进行定量分析。定量PCR可实时检测产物量,通过加入已知浓度的
标准样品
绘制标准曲线,然后根据待测样品在标准曲线中的位置推算初始模板的浓度,从而达到检测残余DNA含量的目的。此外,对DNA的定量技术也有很多,可以看下这篇文章《核酸定量技术及其在生物检测中的应用》