病原检测方法优缺点

1. ELISA检测方法的原理及其优缺点是什么

1.
直接法（direct
elisa）
将抗原直接固定在固相载体上，参加酶符号的一级抗体，即可测定抗原总量，此一级抗体的特异性非常重要。
优势：操作手续简略，因无须运用二抗可防止交互反响。
缺陷：实验中的一抗都得用酶符号，但不是每种抗体都适合做符号，费用相对进步。
2.间接法（indirect
elisa）
此测定办法与直接法相似，不一样在于一级抗体没有酶符号，改用酶符号的二级抗体去辨识一级抗体来测定抗原量。
优势：二抗能够加强信号，并且有多种挑选能做不一样的测定剖析。不加酶符号的一级抗体则能保存它最多的免疫反响性。
缺陷：交互反响发作的机率较高。
3.双抗体夹心法（sandwich
elisa）
被检测的抗原包被在两个抗体之间，其间一个抗体将抗原固定于固相载体上，即捕捉抗体。另一个则是检测抗体，此抗体可用酶符号后直接测定抗原的量；或不符号，再透过酶符号的二级抗体来测定抗原的量。这两种抗体有必要当心选择，才可防止交互反响或竞争一样的抗原联系部位。
优势：高活络、高专一性，抗原无须事前纯化。
缺陷：抗原必定得具有两个以上的抗体联系部位。
4.竞争法（competitive
elisa）
样本里的抗原（自在抗原）和纯化并固定在固相载体上的抗原（固定抗原）一同竞争一样的抗体，当样品里的自在抗原越多，就能够联系越多的抗体，而固定抗原就只能联系到较少的抗体，反之亦然。经清洁过程，洗去自在抗原和抗体的复合物，只留下固定抗原和抗体的复合物，拿来与只要固定抗原的对照组成果相比拟，依据呈色区别就可计算出样品里的抗原含量。
优势：可适用比拟不纯的样本，并且数据再现性很高。
缺陷：全体的敏感性和专一性都较差。
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2. 病原微生物基因检测和其他检测有什么不同

病原微生物检测方法包括：

传统金标准：特殊染色镜检，培养药敏试验等确定病原菌和耐药基因

免疫学方法：酶联免疫技术通过已知的抗体或抗原来检测病原体的抗原或抗体

PCR检测：用已知引物引导未知片段中微量待测基因片段扩增

基因芯片：通过微加工将百万计的基因探针与核酸杂交检测技术

核酸杂交：探针和核酸按碱基互补配对原则缔成异质双链检测

宏基因组：从样品中提取总核酸，构建宏基因组文库测序分析检测

病原微生物宏基因检测法相比于其它方法：其利用宏基因组检测样本总核酸鉴定微生物的种类，检测范围更广，一次性可分析10635种微生物，包括RNA病毒，速度快48小时能完成交付，检测样本灵活，

重点：

1、可检出新发病原，解决想不到，

2、可检也罕见病原，解决没想到，

3、可检出低频率突变，解决做不到，

达瑞基因

3. 艾滋病检测试纸用的什么检测方法

艾滋病检测试纸的原理是： 艾滋病检测试纸条是使用胶体金免疫层析科技研发的新一代检测试剂，可检测血清或血浆标本中的HIV-1/2特有性抗体。所有操作时间约是15分钟，动作简便、迅速、准确、自带质控对照、无需所有附加药剂。适合于临床检验、无偿献血现场筛查等。
抗体检测
抗体检测
血清中HIV抗体是判断HIV感染的间接指标。根据其主要的适用范围，可将现有HIV抗体检测方法分为筛检试验和确证试验。
确证试剂
筛检实验阳性血清的确证最常用的是Western blot（WB），由于该法相对窗口期较长，灵敏度稍差，而且成本高昂，因此只适合作为确证实验。随着第三代和第四代HIV诊断试剂灵敏度的提高，WB已越来越满足不了对其作为确证实验的要求。
FDA批准的另一类筛检确证试剂是-免疫荧光-试验（IFA）。IFA比WB的成本低，而且操作也相对简单，整个过程在1-1.5小时内即可结束。此法的主要缺点是需要昂贵的荧光检测仪和有经验的专业人员来观察评判结果，而且实验结果无法长期保存。现在FDA推荐在向WB不能确定的供血员发布最终结果时以IFA的阴性或阳性为准，但不作为血液合格的标准。
筛检试验
筛检试验主要用于对供血员进行筛查，因此要求操作简便，成本低廉，而且灵敏、特异。2012年，世界上主要的筛检方法仍然是ELISA，还有少数的颗粒凝集试剂和快速ELISA试剂。ELISA有很高的灵敏度和特异性，操作简单，仅需要实验室配备酶标仪和洗板机即可应用，特别适合于试验室大规模筛检使用。
颗粒凝集实验是另一种操作简单方便，成本低廉的检测方法，该方法结果可通过肉眼判定，灵敏度很高，特别适合发展中国家或大量筛选供血员时使用，缺点是必须使用新鲜样品，特异性较差。
80年代后期发展起来的斑点印迹检测（Dot-blot assay）是一种快速ELISA（Rapid ELISA）方法，这种方法操作极为简便，过程短暂，整个过程多数在5-10分钟内甚至3分钟内即可结束，但该法比ELISA和颗粒凝集试剂昂贵得多。
人类免疫缺陷病毒抗体口腔粘膜渗出液检测试剂盒（胶体金法）就属于侧向免疫层析法（金免疫）类别，基于免疫层析技术通过手工操作、肉眼读取结果、20分钟即可定性得出检测结果的快速诊断试剂，用于检测口腔粘膜渗出液样本中的HIV-1型和HIV-2型抗体。可用于自愿咨询检测、不愿采血、晕针患者的初筛。该方法适用于初筛检测，凡由该试剂测定为阳性者，需进行进一步筛查确认。[3]
【HIV阴性】说明从人体内检测不到HIV抗体，阴性符号以（-）表示。不能说没有感染HIV, 要看是什么时候检测的，在窗口期内，感染者的体内还没有产生HIV抗体，或还没有产生足量的HIV抗体，这时HIV检测是阴性结果，如果在窗口期之后检测的，可以排除感染HIV的可能。
【HIV阳性】说明从人体内检测到了HIV抗体，阳性符号以（+）表示。
【检测结果不定因素】
感染还处于窗口期：从HIV进入体内到检测这段时间还不够长，因此血清还没有形成典型的抗体反应
艾滋病进展到终末期，抗体水平下降
其他非病毒蛋白抗体的交叉反应：自身免疫性疾病、某些恶性疾病、怀孕、输血或器官移植等情况下，身体可以产生一些抗体，其反应与HIVP24核心蛋白抗体引起的反应很相似

抗原检测
病原检测主要指用病毒分离培养、电镜形态观察、病毒抗原检测和基因测定等方法从宿主标本中直接检测病毒或病毒基因。由于前两种方法难度大，且需要特殊设备和专业技术人员。因此仅抗原检测和RT-PCR(反转录－PCR)可用于临床诊断。HIV-1P24抗原检测可用于HIV-1抗体不确定或窗口期的辅助诊断；HIV-1抗体阳性母亲所生婴儿早期的辅助鉴别诊断；第四代HIV-1抗原/抗体ELISA试剂检测呈阳性，但HIV-1抗体确认阴性者的辅助诊断。P24抗原检测一般用ELISA双抗体夹心法试剂，试剂必须经过SDA批准注册、在有效期内，其阳性结果必须依据试剂说明书经中和试验确认。HIV-1P24抗原检测的敏感性为30-90%，该结果仅作为HIV感染的辅助诊断依据，不能据此确诊；HIV-1 P24抗原检测阴性只表示在本试验中无反应，不能排除HIV感染，临床中一般不作为常规诊断项目。

核酸检测
HIV核酸检测可用于HIV感染的辅助诊断、病程监控、指导治疗方案及疗效判定、预测疾病进展等。常用的HIV病毒载量检测方法包括逆转录PCR实验（RT-PCR）、核酸序列扩增实验（NASBA）、分支DNA杂交实验（bDNA）以及实时荧光定量PCR技术。值得注意的是，每一种HIVRNA定量系统都有其最低检测限，即可以测出的最低拷贝数或国际单位，RNA定量检测时未测出不等于样品中不含有病毒RNA，因此HIV核酸定性检测阴性，只可报告本次实验结果阴性，但不能排除HIV感染；HIV核酸检测阳性，可作为诊断HIV感染的辅助指标，不能单独用于HIV感染的诊断。报告HIV核酸定量检测结果时应按照仪器读数报告结果，注明使用的实验方法、样品种类和样品量，当测定结果小于最低检测限时，应注明最低检测限水平。
HIV核酸定性检测也可用于HIV感染的辅助诊断，在分析HIV基因亚型和变异等基础研究中应用。通常使用PCR或RT-PCR技术，使用分子生物学实验室通用的扩增试剂，引物可来自文献或自行设计，应尽量覆盖所有或常见的毒株，也可使用复合引物。报告定性检测结果时应注明反应条件和所使用的引物序列。此外，利用核酸检测方法的高度敏感性，使用集合核酸扩增检测技术和方法，对高度怀疑感染人群且抗体阴性的样品进行集合核酸检测，可及时发现窗口期感染者。该方法较单份样品的核酸检测具有更高的成本效益。aware天猫

4. 艾滋病抗体的检查方法

艾滋病病毒抗体检测
艾滋病病毒抗体检测：检测血液中的艾滋病病毒抗体是目前最常用的检测艾滋病病毒感染的实验室方法，一般要经过两个步骤：首先做初筛试验，如果为阳性，再做确认试验，确认试验阳性才可诊断为艾滋病病毒感染。
常用的方法有：
1病原检测病原检测主要指用病毒分离培养、电镜形态观察、病毒抗原检测和基因测定等方法从宿主标本中直接检测病毒或病毒基因。由于前两种方法难度大，且需要特殊设备和专业技术人员。因此仅抗原检测和RT-PCR(反转录－PCR)可用于临床诊断。
2 抗体检测血清中HIV抗体是判断HIV感染的间接指标。根据其主要的适用范围，可将现有HIV抗体检测方法分为筛检试验和确证试验。
3 确证试剂筛检实验阳性血清的确证最常用的是Western blot（WB），由于该法相对窗口期较长，灵敏度稍差，而且成本高昂，因此只适合作为确证实验。随着第三代和第四代HIV诊断试剂灵敏度的提高，WB已越来越满足不了对其作为确证实验的要求。FDA批准的另一类筛检确证试剂是-免疫荧光-试验（IFA）。IFA比WB的成本低，而且操作也相对简单，整个过程在1-1.5小时内即可结束。此法的主要缺点是需要昂贵的荧光检测仪和有经验的专业人员来观察评判结果，而且实验结果无法长期保存。现在FDA推荐在向WB不能确定的供血员发布最终结果时以IFA的阴性或阳性为准，但不作为血液合格的标准。
4筛检试验筛检试验主要用于对供血员进行筛查，因此要求操作简便，成本低廉，而且灵敏、特异。目前世界上主要的筛检方法仍然是ELISA，还有少数的颗粒凝集试剂和快速ELISA试剂。ELISA有很高的灵敏度和特异性，操作简单，仅需要实验室配备酶标仪和洗板机即可应用，特别适合于试验室大规模筛检使用。颗粒凝集实验是另一种操作简单方便，成本低廉的检测方法，该方法结果可通过肉眼判定，灵敏度很高，特别适合发展中国家或大量筛选供血员时使用，缺点是必须使用新鲜样品，特异性较差。80年代后期发展起来的斑点印迹检测（Dot-blot assay）是一种快速ELISA（Rapid ELISA）方法，这种方法操作极为简便，过程短暂，整个过程多数在5-10分钟内甚至3分钟内即可结束，但该法比ELISA和颗粒凝集试剂昂贵得多。金免疫测定是以胶体金为标记物，以硝酸纤维素膜为载体的固相免疫测定，分为渗滤和层析两种形式。用于HIV抗体检体金试纸条属于金免疫层析，且大多数为间接法及双抗原夹心法，两种方法各有优缺点，但都简单而快速，数分钟即可得出结论，不需仪器设备，操作人员不需特殊训练，试剂稳定，适用于单份测定等。

5. 简述细菌检测的方法及优缺点

简述细菌检测的方法及优缺点：
可以直接用显微镜观察其运动情况。另外，鞭毛是细菌的运动器官，因此还可以通过检测细菌鞭毛的存在来间接判断细菌是否具有动力。记忆中的方法有这些：

1.使用显微镜
可以用普通的光学显微镜，通过一些特殊的方法观察菌液中细菌的活动情况。有条件的话还可以使用一些比较高端的显微镜，比如相差显微镜等。
2.使用半固体培养基进行培养
有鞭毛的细菌可沿穿刺线扩散生长，穿刺线周围会变模糊；无鞭毛的细菌只能沿穿刺线生长，周围澄清透明。
3.鞭毛染色
使用特殊染料染色，以方便在显微镜下观察。
4.免疫学方法
通过抗原抗体反应，检测细菌鞭毛的存在。

6. 请教病原微生物分型的方法种类及优劣势比较。谢谢！

病原微生物的分子分型方法
近年来，随着分子牛物学技术快速发展，新的诊断技术和方法不断涌现并广泛应用于临床微生物的检测，为病原微牛物的致病性、流行性、变异性以及耐药性分析等方面提供J，重要的信息。目前，应用分子生物学技术对病原微牛物进行分型的方法包括：脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gelelectrophoresis。PFGE)分型、聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)分型、生物芯片分型、多位点序列分型(muhilocus sequencetyping，MI。ST)、质粒DNA图谱分型以及限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism，RFLP)分型等。
1．脉冲场凝胶电泳分型PFGE技术以其重复性好、分辨力强而被誉为细菌分子分型的“金标准”。它可以用于大分子DNA的分离，其分辨范围达到10 Mb，而普通琼脂糖凝胶电泳仅能分离小于500 Kb的DNA。PFGE的基本原理是通过电场的不断改变，使包埋在凝胶中的DNA分子的泳动方向发
生改变，小分子DNA比大分子DNA泳动快，从‘‘ii在凝胶上按DNA分子大小呈现出特异的电泳图谱。病原微生物的基因组DNA经脉冲场凝胶电泳，使大片段DNA有效分离。DNA条带的密度反映了病原微生物基因组DNA的含量以及分子的大小，最终达到分型的目的。目前，PFGE已被广泛的应用于病原微牛物的分型，Swaminathan等∽J已经建立了针对大肠杆菌0157：H7、沙门菌属的Typhimurium血清型、李斯特菌、志贺菌属等病原微生物分型的标准PFGE操作方法。有研究认
为PFGE的分辨力强于核糖体分型和随机扩增多态性DNA(random amplified polymorphic DNA，RAPD)分型。当采用1个限制件核酸内切酶的分辨力不强时，可以采用2种限制性核酸内切酶加以提高。当然，PFGE也有一些局限，如耗时长、成本高等。另外，电泳图谱易受操作人员技术水平等因素的影响，这为不同实验室问的比较带米一定困难¨
2．聚合酶链反脱分犁PCR技术自1985年发明以来，以其灵敏度高和特异性强受到了人们的高度重视，成为核酸扩增和检测的一种常规方法H]。用于病原微生物分子分型的PCR方法主要有RAPD分型和重复序列PCR分犁2种。RAPD是建移在PCR基础卜-的1种可对整个未知序列的基因
组进行多态性分析的分子生物学方法。该方法以基冈组DNA为模板，以单个人T．合成的随机多态核苷酸序列(通常为10个碱基)为引物，在热稳定的DNA聚合酶的作用下进行PCR扩增，扩增产物经琼脂糖或聚内烯酰胺凝胶电泳后，对其进行多态性分析。反应小同基因组DNA特点，从而对病原微生物进行分型。RAPD可以在物种没有任何基因组信息的情况下分析其DNA多态性，对模板DNA的纯度要求不高。无需DNA探针和分子杂交。重复序列PCR分型足Versalovic于1996
年描述的1种细菌基因组指纹分析方法，即PCR扩增细菌基因组中广泛分布的短重复序列，经电泳图谱比较分析揭示基因组间的差异[5]。研究表明重复序列PCR分型与RAPD分型有相同的分辨力[6]，但操作相对复杂。然而，重复序列PCR分型的再现性非常好，这是RAPD无法比拟的。此外，多重PCR、巢式PCR等也呵用于病原微生物的分型，虽然各有长处，但也存在分辨力弱、重复性差、结果解析困难等不足，因此，还未广泛应用于临床。
3．生物芯片分型 生物芯片技术是将生物大分子，如寡核苷酸、cDNA、基冈组DNA、肽、抗原以及抗体等固定在诸如硅片、玻璃片、塑料片、凝胶和尼龙膜等固相介质上形成生物分子点阵，当待测样品中的生物分子与生物芯片的探针分子发生杂交或相互作用后，利．}}j激光共聚焦显微扫描仪对杂交信号进行检测和分析例。其用于病原微生物分型的基本原理是将代表各个亚型的特异基因制成1张芯片，经反转录就可检测样本中病原微生物的亚型进行辨别。液态芯片(suspension arraytechnology，SAT)，又称微球蛋白芯片(proteinbeadarrays，PBA)，是近年来出现的1种新的芯片技术。其原理是甩2种荧光染料按照不同比例将直径为5．6 ttm的微球染成100种颜
色，每种颜色的微球共价结合1种牛物探针，可以是抗原、抗体、配体，也可以是核酸或酶，分针对1种待检物。混合载有100种不同颜色的微球，就可以在1个反应孔里同时完成100种不同的生物反应。随后微球成单列通过2束激光照射的管道，计算机采集并处理每种颜色微球的荧光强度变化就可以分别对每个待测物进行定性或定量的检测。该系统口‘用于多种微生物抗原、抗体和特定基因的联合检测。目前，该方法已应用于临床HPV的分型检测。与固态芯片相比，液态芯片在反
应动力学、反应速度、检测敏感性、稳定性以及自动化程度方面都有较大的优势，因此，不少学者看好液态芯片的应用前景。
4．多位点序列分型 随着DNA测序技术的快速发展，分子分型日益趋向于染色体的单一或多个位点的多态性上。MI。ST分型是指测定对多个管家基囡中长度约为470 bp的核心片段的核苷酸序列，对其组合进行索引编号，不同的菌株对应不同的序列型，从而揭示菌株间等位基因的多样性。Maid—en等[83发现，MI，ST可用于脑膜炎奈瑟球菌的分型。他们认为，多个管家基因的序列分析比较在实验过程的ⅡI操作性与结果的可靠性之间取得了平衡，且结果准确，所得数据在不同的实验窜问具有良好的可比性，即MLST对某哆菌株具有较强的种内分辨力【9 J。Chen等no]应用MLST对我国台湾地区12家医院分离到的51株白色假丝酵母菌进行遗传特征分析，结
果发现了7个管家基因序列的83个多态性位点和45个二倍体序列类型。其中，36．1％是同义突变，63．9 oA为非同义突变。他们认为，MI。ST的分辨力较PFGE更强，能分辨某患者所感
染的白色假丝酵母菌随时间推移‘‘ii发生的微小种内进化。但MLST的缺点是它的高额费用和操作过程所需的特定仪器。这使得这项技术只能局限在大型的全球性流行病学研究中心
使用，影响其在医院推广普及。
5．质粒DNA图谱分型 细菌质粒分析是较早被使用的病原微牛物分子分型方法。该方法包括萃取质粒DNA和琼脂糖凝胶电泳。由于不同菌株质粒DNA序列和大小不同，
通过琼脂糖凝胶电泳分离得到的DNA质粒图谱也不同，从而可以对不同菌株进行分型。菌株携带的质粒越多则质粒DNA图谱分型方法的特异性越强。质粒网谱分型的优点是操作相对简单，只需要简单的设备就可以完成，耗时短，费用低廉。但质粒图谱分型有一难以克服的缺陷。即质粒可以自发的丢失、获取以及在同种细菌甚至是在异种细菌之间转移，这就造成了质粒图谱的不稳定性。另外，质粒图谱型方法小能区分那些大小相同而DNA序列不同的质粒¨“。
6．限制性片段长度多态性分型 RFI。P是指基因组DNA经限制性核酸内切酶消化，消化后的片段再通过琼脂糖凝胶电泳进行分离。用限制性核酸内切酶BglⅡ和EcoRI等消化病原微生物基因组DNA，可以产生大量短的片段，通过电泳后得到的DNA图谱可用于病原微生物的分型。几乎所有
的病原微牛物分离株都町以通过这种方法分型，但由于基因组DNA巨大，酶切后产生的片段众多，且含有大量的莺叠片段，这使得蔚株间图谱的一致性分析面I临诸多用难口“。RFLP分
型分辨力弱于PFGE分型，且操作比较复杂。

7. 病原微生物学免疫诊断技术综述

摘要：病原微生物种类繁多，变异迅速，快速鉴定病原微生物的检验技术也在不断发展前进着。目前，应用比较广泛的病原微生物检测方法主要有直接涂片镜检、分离培养、生化反应、血清学反应、核酸分子杂交、基因芯片、多聚酶链反应等，该文对这些检测技术进展做一综述。 对人和动物具有致病性的微生物称为病原微生物，又称病原体，有病毒、细菌、立克次体、支原体、衣原体、螺旋体、真菌、放线菌、朊粒等。这些病原微生物可引起感染、过敏、肿瘤、痴呆等疾病，也是危害食品安全的主要因素之一。近年来出现的SARS、高致病性禽流感、西尼罗病毒感染等疾病的传染性极强，往往造成世界性大流行，因此对病原体的检测必须做到快速、准确。常规病原学检测方法操作繁琐，检测周期长，而且对操作人员技术水平要求比较高。随着医学微生物学研究技术的不断发展，病原学诊断已不再局限于病原体水平，深入到分子水平、基因水平的检测手段不断出现并被应用于临床和实验室 J。核酸分子杂交技术、PCR技术、基因芯片技术等检测方法，自动化程度高，快速省时、无污染、结果精确，可以准确灵敏地鉴定病原微生物。1 传统的病原微生物的检测方法传统的病原微生物学实验室检查以染色、培养、生化鉴定等为主，将标本直接涂片染色镜检和接种在培养基上进行分离培养是对细菌或真菌感染性疾病进行病原学诊断的常用方法。1．1 直接涂片镜检病原微生物体形体积微小，大多无色半透明状，将其染色后可借助显微镜观察其大小、形态、排列等。直接涂片染色镜检简便快速，对那些具有特殊形态的病原微生物感染仍然适用，例如淋球菌感染、结核分枝杆菌、螺旋体感染等的早期初步诊断。直接涂片镜检不需要特殊的仪器和设备，在基层实验室里仍然是十分重要的病原微生物检测手段。1．2 分离培养与生化反应 分离培养主要用于临床标本(如血液、痰、粪便等)或培养物中有多种细菌时对某一种细菌的分离。细菌的生长繁殖需要一定时间，检测周期较长，不能同时处理批量样本。为解决这一问题，各种自动化培养和鉴定系统不断产生，传统鉴定方法也在逐步改进，大大加快了检验速度。例如Microscan WalLCAway全自动微生物分析仪，可同时做细菌鉴定和药敏试验，检验500多个菌种。苛养菌如肺炎链球菌、淋病奈瑟菌、流感嗜血杆菌等对营养要求比较高，常规培养阳性率低。雍刚 等将不要同比例的葡萄糖、玉米淀粉、生长因子、酵母粉、氨基酸等特殊增菌剂加入到巧克力培养基中制成了新型淋病奈瑟菌培养基，大大提高了淋病奈瑟菌的分离培养率。苏盛通等在营养琼脂中加人了中药红枣、赤小豆培养甲型链球菌、乙型链球菌、肺炎链球菌等细菌，生长指数明显高于血平板。1．3 组织细胞培养 活组织细胞培养适于专营活组织细胞内生存的病原体，包括病毒、立克次体、衣原体等。不同病原体敏感的组织细胞是不一样的，将活细胞从病原体敏感的动物组织中取出在体外进行原代培养或用病原体敏感细胞系进行传代培养，再将病原体接种于相应的组织细胞中后，病原体可在其中繁殖增长，引起特异性的细胞病变效应。也可以将病原体直接接种于敏感动物体内，引起相应组织器官出现特异的病理学改变。往往可以根据这些特异的病变对病原体进行鉴定。2 血清学与免疫学检测血清学检测是通过已知的抗体或抗原来检测病原体的抗原或抗体从而对病原体进行快速鉴定的技术，简化了鉴定步骤，常用的方法包括血清凝集技术、乳胶凝集实验、荧光抗体检测技术、协同凝集试验、酶联免疫测试技术等。酶联免疫技术的应用大大提高了血清学检测的敏感性和特异性，不仅可检测样本中病原体抗原，也可检测机体的抗体成分。幽门螺奸菌在我国人群感染率高达50％ ～80％ ，应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测唾液中抗HP抗体来诊断HP感染，其结果满意。乙型肝炎病毒(HBV)在我国人群中感染率极高，ELISA应用于乙型肝炎病人早期血清学诊断的效果最为明显。临床上致病菌往往和非致病菌混合在一起，如何从这些细菌中分离出目标菌是关键。免疫磁珠分离技术(IMBS)是近年来发展起来的在微生物检测领域中一种新技术。其基本原理是将特定病原体的单抗或多抗或二抗偶联到磁珠微球上，通过抗原抗体反应形成磁珠一目标病原体复合物或磁珠一一抗一目标病原体复合物，在外部磁场磁力的作用下，将目标病原体分离出来。目前已经开发出了针对各种病原体的免疫磁珠，如大肠埃希菌、李斯特菌、白色念珠菌、军团菌等，广泛应用到各级科研和实验室 。经IMBS分离出的白色念珠菌可直接在显微镜下检测，检测时间缩短至4 h。IM—Bs还可以和其它检测技术联合来检测病原菌，免疫磁珠分离得到的目标菌可继续用于分离培养使大肠埃希菌0157最低检测限由200 cfu·g 提高到2 cfu·g～；IMBS结合聚合酶链反应(IMBS—PCR)可对培养条件比较特殊的细菌如苛养菌、厌氧菌进行快速检测，肉类中的产毒素型产气荚膜梭菌经IMBS．PCR检测，检测时间缩短到10 h，最低检测限可达10cfu·g～，有研究者利用IMBS结合实时荧光定量PCR(IMBS—RT—PCR)成功检测出了水中的轮状病毒和草莓的诺如病毒，检测时间大大缩短；Leon—Velarde等利用IMB8结合酶联检测，大大提高了沙门菌的检测效率。3 基因检测随着科技水平发展，分子生物学检测技术日新月异，对病原微生物的鉴定已不再局限于对普通外部形态结构和生理生化特性等的一般检验上，而是深入到了分子水平、核酸水平。病原微生物的核酸序列即基因片段都是特异的，有别于其他种或属，检测其特有的基因片段序列可用来鉴别病原微生物。随着科技的发展，基因检测技术逐渐代替其它检测技术，成为临床检验科和基础实验室对病原体的主流检测技术。3．1 核酸杂交技术具有一定互补序列的核苷酸单链在液相或固相中按碱基互补配对原则缔成异质双链的过程叫核酸杂交，其杂交双方是所使用探针和要检测的核酸。在病原微生物检测中核酸分子杂交主要包括膜上印迹杂交和核酸原位杂交两种。膜上印迹杂交是指将核酸从微生物细胞中分离出来，纯化后在体外结合到一定的固相支持物上，与存在于液相中标记的核酸探针进行杂交。核酸原位杂交是指标记的核酸探针直接与细胞或组织切片中的核酸进行杂交。探针还可以用荧光标记，在荧光显微镜或激光扫描共聚焦显微镜下即可鉴别病原体还可显示在三维空间中的位置。核酸分子杂交检测技术与其它方法相比显着地优点是简便、敏感、快速、特异。Wong 等用荧光标记2个不同的寡核苷酸探针从血液标本中检测出假单胞菌属和不动杆菌属的细菌，最低检测限为10 cfu·mL～，特异度为100％ ，检测时间不到2 h。寡核苷酸探针是针对病原体特异基因序列设计的，可以将待检测的病原体定位在不同的分类等级，如科、属、种、亚种“ 。（病原微生物检测技术进展）3．2 基因芯片技术基因芯片(DNA chip)又称为DNA微阵列(DNA microarray)或DNA芯片，是生物芯片的一种 j，是核酸分子杂交技术发展延伸而来的。通过微加工技术，将数以万计甚至百万计的基因探针即DNA片段有规律地排列成二维DNA探针阵列，固定到硅片、玻片等固态支持物上，与标记的样品分子进行核酸杂交，用于基因检测工作。其测序原理与核酸杂交一样，但解决了传统核酸杂交技术操作繁杂、检测效率低、自动化程度不高的缺点。基因芯片在病原微生物感染诊断上的应用，大大缩短了确诊所需要的时间，而且能检测出病原体是否耐药、对那些抗生素耐药、对那些抗生素敏感。Naas 等设计的基因芯片可以检测出铜绿假单胞菌、肠杆菌属、鲍氏菌属中各型B一内酰胺酶类耐药基因。蔡挺等设计的基因芯片检测出大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、鲍氏不动杆菌、阴沟肠杆菌对l7种抗菌药物的耐药率。Batchelor 等开发的基因芯片可以检测出编码耐超广谱8．内酰胺酶、磺胺类、四环素类、氨基糖甙类等47个耐药基因的大肠埃希菌和沙门氏菌。基因芯片技术同样还有些问题有待解决，如提高芯片的特异性和检测信号的敏感性，降低芯片的制作成本等，而且多数芯片都需要昂贵的检测仪器，这些问题使得基因芯片到目前主要局限于实验室研究而未能广泛应用于临床病原微生物的检测与鉴定。（病原微生物检测技术进展）3．3 PCR技术聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction，PCR)是一种在体外是用已知寡核苷酸引物引导未知片段中微量待测基因片段并进行扩增的技术。由于PCR可以对待测基因进行扩增，特别适用于病原体感染早期的诊断，但是如果引物特异性不强，可能会造成假阳性的出现。PCR技术在近20年里发展迅速，从基因扩增到基因的克隆和改造以及遗传分析，可靠性逐步提高。Jbara 用PCR和传统法直接检测75例样本中的流感嗜血杆菌、脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌，与传统方法相比，PCR检测的特异度和灵敏度分别为87．3％ 和100％ 。1988年Chamberian等提出了多重PCR的概念，同一PCR反应体系里加上二对以上引物，可同时扩增出多个核酸片段，适合大量样本的分析与鉴定。多重PCR具有：(1)高效性，在同一反应体系内可同时检出多种病原微生物，或对同一病原微生物的不同型别进行分型；(2)系统性，多重PCR很适宜于成组病原体的检测，如几种肝炎病毒同时感染；淋球菌、梅毒螺旋体、艾滋病病毒等多重性病病原体的感染；需特殊培养的无芽胞厌氧菌感染；破伤风杆菌，炭疽杆菌，产气荚膜杆菌，鼠疫耶尔森菌等战伤感染细菌感染；(3)经济简便性，多种病原体在同一反应管内同时被检出，节省试剂、节约费用、节省时间，为临床提供更快更多更准确的诊断信息。Reyes等 用多重PCR从90例发热但培养阴性的儿童细菌性脑膜炎脑脊液样本中检测出了脑膜炎奈瑟球菌、肺炎链球菌、流感嗜血杆菌，特异度100％ ，敏感度89％。实时荧光定量PCR，在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程。具有高度灵敏、高度特异、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点。实时荧光定量PCR对性病病原体早期确诊、窗口期筛查、疗效检测、基因变异分析和预后评估等具有重要价值，为流行病学调查提供帮助 J。王娉等 建立了多重实时荧光定量PCR反应体系，同一体系能同时快速检测出耐甲氧西林和产肠毒素A的金黄色葡萄球菌。荧光基团标记的特异性引物可准确反映病原体感染和药物疗效，特别适用于不可人工培养和难以培养的病原体如病毒、衣原体等感染的诊断。基因芯片技术与多重PCR结合可以通过PCR对目的基因进行放大，通过基因芯片的荧光探针增加检测的灵敏性和特异性，使得两种检测技术的优势互补，已广泛应用于病原微生物的检测。将病原体特异性基因作为靶基因设计出引物与探针，进行多重PCR扩增，制备出寡核苷酸芯片，再对待测样本靶基因进行多重PCR扩增，将扩增产物与病原菌多重PCR基因芯片检测体系杂交，可根据杂交信号直观地判读样品中所含病原体的种类、型别、毒力、侵袭力，从而对病原体进行检测和鉴定。（病原微生物检测技术进展）3．4 其它基因检测技术分子生物学技术飞速发展，各种新的基因检测手段不断出现。Notomi等于2000年开发出一种新的环介导恒温核酸扩增法(1oop—mediated isothermal amplifi—cation of DNA，简称LAMP)，针对靶基因序列上6或8个特异区域设计出4或6条引物，在具有链置换活性的DNA聚合酶的作用下形成环状结构和链置换对目标DNA大量扩增。短短几年LAMP已被广泛应用于疾病诊断、食品检验、环境监测、生物安全等各方面心 ]。李蒙等 运用LAMP法60 min检测了16例开放性伤口深部伤口感染分泌物中的破伤风芽孢梭菌，其中阳性为4例，最低检测限为4 x 10 。有研究报道l2 用LAMP技术快速检测了200例肺结核患者的痰标本，结核分枝杆菌的阳性检出率远远高于培养法和染色法。多位点可变数目串联重复序列分析(Multiple—locus Variable—nun—ber Tandem repeat Analysis，MLVA)是一种根据病原体基因组中可变数目串联重复序列的特征来对病原体基因分型的一种技术，广泛应用于金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、炭疽芽胞杆菌等的基因分型与鉴定 ⋯。4 小结与展望对病原体进行快速准确的检测和鉴定是传染病防治工作的首要问题。随着生物学研究由宏观领域向微观领域的发展，病原体检测方法也从组织形态学水平深入到分子水平、基因水平。近年来发展起来的病原微生物高通量检测技术样本需要量少、快速省时、无污染、诊断结果精确、自动化程度高，相信随着研究的不断进展和深入，这些高通量诊断技术和方法必将在病原微生物的诊断分析方面起到越来越重要的作用，而多种检测技术的联合和综合更是有着广阔的应用前景。

8. 列举5种消化道寄生虫的病原学检查方法,并分别说出每种方法的优缺点

血液寄生虫，需要采血检验，犬焦虫，弓形虫等，旋毛虫寄生肌肉，还有体外寄生虫。