1. 细菌的鉴定有哪些
细菌的鉴定有哪些:
实验室使用常用的培养方法通常可以识别常见细菌的典型菌株。然而,当数据库中没有非典型菌株或稀有或新出现的细菌时的确会出现问题。
细菌培养往往是通过形态特征以及生长特征分辨细菌,进一步的鉴定还包括:
生化鉴定:主要是借助细菌对营养物质分解能力的不同及其代谢产物的差异对细菌进行鉴定,包括蛋白质分解产物试验、触酶试验、糖分解产物试验、氧化酶试验、凝固酶试验等。
血清学鉴定:适用于含较多血清型的细菌,用已知抗体检测未知抗原(待检测的细菌),或用已知抗原检测患者血清中的相应抗细菌抗体及其效价。血清学鉴定操作简单快速,特异性高,可在生化鉴定基础上为细菌鉴定提供确定诊断。
分子生物学检测:适用于人工培养基不能生长、生长缓慢及营养要求高不易培养的细菌,主要是对基因、蛋白质、细胞及其他生物进行大信息量分析的检测技术。16S rRNA 基因序列分析法逐渐成为临床细菌鉴定、分离的金标准。
免疫学鉴定:通过 ELISA 的方法进行细菌检测。这种方法度敏感高,但它依赖于非常特异的抗体和高度区分的蛋白质。
质谱分析:通常使用气相色谱法和质谱法的组合对脂肪酸进行分析。脂肪酸在细菌细胞膜中是必不可少的,不同的细菌种类会产生不同的脂肪酸组合。 该脂肪酸谱可用于通过与已知谱匹配来确定未鉴定的细菌种类。
2. 免疫学的检测方法
免疫学检测方法可分为体液免疫和细胞免疫。
3. 免疫学中的 琼脂免疫试验方法及结果判定
怎样用传统生物学检测技术来检测马铃薯中的农残留
生物技术检测方法具有特异的生物识别功能、极高的选择性,它可与现代的物理化学方法相结合,产生一些简单、结果精确、灵敏、专一、微量和快速、成本低廉的检测方法,因此其在食品检验中占有越来越重要的地位。
在食品检验中应用的几种生物检测技术
1 免疫法
免疫法是最灵敏的生物检测方法,具有高特异性和高灵敏性(灵敏度可达1ppb,1ppm)、操作简便、再现性好,应用前景看好。用免疫法可进行蛋白质检测,由于不同蛋白质的物理、化学性质差别极小,只能通过各种免疫方法或标记探针法加以区别。
(1) 荧光抗体法
将荧光抗体溶液滴加于固定的标本上,一定时间后用缓冲液冲洗,若有相应抗原存在,即与荧光抗体结合,在荧光显微镜下即可看到发荧光的抗体复合物。荧光抗体法在微生物污染鉴定中经常使用,最常用于沙门氏菌的检测。
(2) 放射免疫法
灵敏度高,但操作相对复杂,放射免疫法同位素半衰期短,保存及操作不便。目前应用情况受到限制。
(3) 酶联免疫吸附法
是一种基本的酶免疫检测方法,其选择性好、灵敏度高、快速、易操作、结果判断客观准确、实用性强。酶免疫法和其他免疫法一样,都是以抗体和抗原的特异性结合为基础的。以酶或辅酶为标记物,标记抗原或抗体,用酶促反应的放大作用来显示初级免疫学反应。
酶联免疫吸附法除可检测食品中的毒素、残留农及微生物外还可用于营养素的测定。
(4) 凝集反应法
当有电解质存在时,颗粒状的抗原与其特异性的抗体结合并生成可见凝集块的反应称为凝集反应,有直接反应和间接反应法。利用凝集反应可测定抗体的效价,也可用于细菌、病毒等的分类。
(5) 沉淀反应法
沉淀反应法常见的是一种琼脂扩散试验。单向扩散是利用不同抗原抗体在琼脂中不同的扩散速度而会在琼脂中出现几条相互分离的沉淀带。双向扩散则是利用抗原抗体都向中间层―――琼脂扩散而形成沉淀带,根据分离沉淀带的数量可确定抗原抗体种类。
(6) 免疫扩散法
利用蛋白质在半固体基质上的扩散作用,使抗原和抗体在浓度比例合适的部位产生沉淀带或沉淀环,从而检测蛋白质。如血清中IgG、IgA、IgM含量的测定。
(7) 免疫电泳法
免疫电泳法是将电泳和琼脂扩散沉淀反应相结合的一种方法,即先将血清或蛋白质抗原在琼脂凝胶中进行电泳。带电的蛋白质抗原向负极移动,加入抗血清后,不同区点的抗原再与抗体进行沉淀,当相应抗原抗体接触,在适当比例下形成弧形沉淀带,根据沉淀带的位置对蛋白质的各组分进行检测。如免疫球蛋白含量的测定。
4. 对新建细胞系或株的细胞确认试验可采用哪些方法列举一种或以上方法并说明其原理
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5. 免疫法鉴定微生物的原理是什么
酶联免疫法主要通过将抗原抗体免疫反应的特异性与酶的高效催化性相结合,用于检测抗原与抗体。酶免疫法又称为EL丨SA法,它通过该固相载体吸附抗体或抗原,加待测抗原或抗体,与其相应的酶标记抗体或抗原进行抗原抗体的特异免疫性反应,从而生成抗体或抗原一待测抗原或抗体一酶标记抗体或抗原的复合物,通过该复合物与酶的底物发生反应,生成有色产物。酶联免疫法抗原进行定性与定量的检测,当待测抗原或抗体后定量与有色产特量成正比,即可结合吸光度值计算出抗原或抗体后具体含量,即为酶联免疫法后检测原理
检测食品中的病原微生物
酶联免疫法可以有效检测食品中的沙门氏菌、军团菌、大肠杆菌等微生物
1.通过酶联免疫法可以可以简便,快速址检测出含沙门氏菌的食品,而且准确度较高。目前,沙门氏菌严重影响着食品的安全卫生质量,它是产生细菌性食物中毒的主要致病菌。采用EL丨SA法束检测沙门氏菌时,所采用的抗体为单克隆抗体或多克隆抗体,但是一般情况下,主要通过制备单克隆抗体的ELⅠSA方法进行检测,进行了以ELⅠSA技术为基础的全自动检测
2可以采用ELⅠSA法检测食品中的单核白细胞增多症李氏杆菌,加上该检测方法敏感度较高,而且不与沙门氏菌、耶氏菌、蜡样芽孢杆菌等发生交叉反应。因此,采用ELⅠSA法不仅检测速度较国际法42h,而且具备较高的灵敏度。
3.ELⅠSA法不工可用于食品介导的病毒的检测……
6. 实验室中抗血清制备后,抗体特异性鉴定最常采用的方法是
正确答案:B
解析:单向免疫扩散常用于待测抗原的定量测定;亲和层析和免疫吸附是分离纯化的方法;可以用特异性抗原与制备的抗血清进行双向免疫扩散试验来鉴定抗血清的特异性
。
7. 金黄色葡萄球菌的鉴别要点有哪些
1、形态染色鉴别:
革兰阳性球菌,葡萄串状排列。
2、菌落特征鉴别:
在血平板上菌落中等大小、光滑湿润、菌落呈金黄色、菌落周围有透明溶血环。
3、鉴定试验鉴别:
甘露醇发酵试验阳性,血浆凝固酶试验阳性,触酶阳性球菌,耐热核酸试验酶阳性,新生霉素试验敏感。
(7)鉴别实验的免疫学方法扩展阅读:
金黄色葡萄球菌的检验规定:
根据 GB4789.10-2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验》第一法定性检验和第二法平板计数法进行实验操作。
其中定性检验的主要步骤有检样处理、增菌、分离、镜检、肠毒素检验等,定量实验主要步骤有:检样处理、接种、培养、计数和确认试验等,常规的计数培养方法时间需要48 h左右。
卫生部于2012年12月21日实施的《速冻面米制品食品安全国家标准》,将金黄色葡萄球菌检测由定性转向定量,规定每批产品抽检5个样品中,至多只能有1个样品每克生制品中检出的金黄色葡萄球菌含量在1000至10000个之间。
8. 免疫学实验有哪些
本书主要介绍免疫学的常用实验操作操作,如实验原理、试剂配制及注意事项等。全书共分为24章,包括抗体的制备、纯化和鉴定,免疫扩散和免疫电泳技术,免投细胞功能检测,常见的细胞因子检测技术,放射免疫检测,酶免疫检测方法,荧光和化学发光免疫技术,免疫组织化学实验方法,原位杂交免疫组织化学和免疫PCR技术,免疫微球的应用,免疫电子显微镜实验方法,以及人白细胞抗原(HLA)的分型,细胞凋亡的检测方法
9. 葡萄球菌生化鉴定试剂盒有哪些试验
(1)血浆凝固酶试验:血浆凝固酶是金黄色葡萄球菌所产生的,与其致病力有关的一种侵袭性酶,其作用是使血浆中的纤维蛋白在菌体表面沉积和凝固以阻碍吞噬细胞的吞噬。血浆凝固酶分为结合型和游离型。前者结合在细菌的细胞壁上,能直接作用于血浆中的纤维蛋白原,使之转化为纤维蛋白,环绕菌体而形成凝块。而游离型血浆凝固酶则在产生后被分泌到菌体外,不能直接作用于纤维蛋白原,但可以激活血浆凝血酶原,使之转化成凝血酶,后者再作用于纤维蛋白原使其转化为纤维蛋白。具体的测量方法也因此分为玻片法和试管法两种。
玻片法将待试菌落乳化于玻片上的盐水中,经10~20S证实无自凝后,用接种环取人或兔血浆一环,与乳化菌液混合,出现凝集者为阳性,另设生理盐水为阴性对照。
试管法吸取0.5mL兔血浆与0.5mL金黄色葡萄球菌肉浸液肉汤24小时培养物充分混匀,置37℃培养,每隔半小时观察一次,连续观察6小时,出现凝固,即将小试管倾斜或倒置时,内容物不流动,判为阳性。
(2)耐热核酸酶试验:将24小时肉汤培养物沸水浴处理15min,用接种环划线刺种于甲苯胺兰-DNA平板,35℃培养24小时,在刺种线周围出现淡粉色者为阳性。本试验金黄色葡萄球菌为阳性。
(3)甘露醇发酵实验金黄色葡萄球菌可发酵甘露醇。
(4)Staphaurex 胶乳凝集实验是鉴定金黄色葡萄球菌的一种快速、简便的商品化直接凝集试验。其基本原理是在纸片上滴加包被有纤维蛋白原和IgG抗体的聚苯乙烯胶乳,然后用接种环挑取待鉴定菌株的新鲜培养物加入混匀,若出现凝集块现象即为阳性。
5. 生化鉴定如上述,注意与其他凝固酶阳性的葡萄球菌的鉴别要点:PYR(吡咯烷酮-β-萘基酰胺试验阴性;VP试验阳性;鸟氨酸脱羧酶试验阴性。
6. 免疫学方法用酶联免疫吸附试验和对流免疫电泳方法可检测金葡菌的磷壁酸抗体。
7. 分子生物学方法包括PFGE脉冲场凝胶电泳以及酶切图谱分析等。
10. 免疫学的检测方法有哪些
免疫学检测方法可分为体液免疫和细胞免疫。