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热抵抗检测方法

发布时间:2022-09-05 21:29:50

‘壹’ 几种特殊检验标本的采集方法

几种特殊检验标本的采集方法

特殊检验标本有哪些你知道吗?如何采集特殊检验标本你了解吗?下面是我为大家带来的关于几种特殊检验标本的采集方法的知识,欢迎阅读。

糖耐量试验

1、病人准备:试验前3日停用胰岛素治疗,每日食物中糖含量控制在250-300克,且维持正常活动,影响试验的药物(如:咖啡因、口服避孕药、水杨酸盐等)应在3日前停用,试验前8-14小时不进食。

2、标本采集:临床上常用方法是清晨抽空腹血2ml后,将75克无水葡萄糖溶于200-300ml水中,5分种内饮完。再于给糖后0.5、1、2、3小时各取血1次。

3、标本类型、标本量:干燥管,采血2ml。

4、标本保存条件:2-8℃保存。

胰岛素释放试验准备同上。

高危型人乳头瘤病毒检测

1、病人准备:三天内不能做阴道冲洗或使用阴道;24小时内不能有性生活;非月经期采样检查。

2、标本采集:

2.1放置阴道张开器,用专用取样刷置于子宫颈口与粘膜交界处逆时针转三圈,停留10秒钟;

2.2将取样刷放于专用试管中,在切口处折断多余部分;

2.3拧紧盖子,送检。

3、标本类型、标准量:宫颈刷出物,尽量避免保存液在取样过程中散出,否则标本量不够无法检测。

4、标本保存:4℃可保存3周;-20℃可保存半年。

膜式液基超薄细胞学检测(TCT)

1、病人准备:病人在检查前三天停止性生活,检查前停止用药,并清洗外阴部。

2、标本采集:采集标本应用专用TCT采样器,医生用窥阴吕扩开阴道后先观察,如果宫颈表面粘液、血液者,应先用棉签轻轻擦净粘液血液,再用TCT采样器抵住宫颈表面转动5-10次。然后取出采样器迅速保存液瓶内均匀数次,再拧紧瓶盖,在瓶身上写上病人姓名贴上条形码,填写送检单,送检。

3、标本类型:宫颈脱落细胞

4、标本保存:装有标本析保存液瓶在常温下可保存1-3月,如冰箱内可保存时间更长。

5、注意事项:

5.1 用取样器采集标本时,取样器前面的长毛刷应插进颈管内以便采集颈管上皮及移行区上皮细胞,采样时动作应轻柔,用力适中,太大容易损伤宫颈,太小不能采到足够用于诊断上皮细胞。

5.2 送检单及标本瓶上应写清病人姓名、年龄,并贴上条形码,送检单应详细填写各项内容,特别是月经情况、用药史及妇科治疗情况以便正确诊断。

唐氏综合征检查

让患者了解筛查意义和局限性,在知情同意书上签名。并在申请单上务必填写孕妇出生日期、体重、身高、吸烟状况、用药情况、准确孕周(B超或末次月经计)、糖尿病胰岛素治疗情况、单或双胎、联系电话,否则无法作出风险评估。孕早期唐氏综合征在孕9-13+6周抽血,孕中期唐氏综合征(AFP、Freeβ-HCG、uE3)在孕15~20周抽血。

染色体标本

1、用一次性注射器吸取肝素钠抗凝剂将针筒充分润湿后将肝素钠全部排除,抽静脉血3ml(如果用稀释后的肝素抗凝,按1:9的比例抽血3ml)或用无菌肝素抗凝管直接采血3 ml。尽快轻轻摇匀。

2、将注射器帽盖密封盖上注射器后送检,可使用原注射器包装袋封装好。

3、采血和运送过程严格无菌操作,严防溶血、凝血。

4、标本保存:存放于4~10℃冰箱中,可保留24小时,建议尽快送检。

微量元素标本采集:

微量元素标本极易受到污染,为保证检验结果准确有效,采血人员在采血过程中应按以下要求操作。

1、采血时不要戴乳胶手套(对锌、钙有污染),可用薄膜手套,或不戴手套把手洗干净。

2、采血时按纯水、碘酒、酒精顺序清洁取血区皮肤(碘酒中含较多微量元素,一定要用酒精将碘酒拭干,或者不用碘酒消毒)

3.保证采血场所的清洁,不要使用风扇降温。

性病培养全套标本采集:

1、支原体(MH+UU)培养+药敏:

1.1病人在采集标本时至少停用抗生素一周以上。

1.2支原体对干、热抵抗力差,标本采集后应尽快接种于运输培养基中送检。

1.3女性:用沾取少许无菌生理盐水的棉拭子取宫颈管内口1-2CM处单层柱壮上皮细胞,取样拭子不可碰阴道壁,将拭子按无菌手续支原体运输培养基中送检。

1.4男性:用特别细的无菌棉拭子沾取无菌盐水少许深入尿道口内2-2.5cm处取分泌物,将拭子按无菌手续在运输培养基中送检。 检验地带网

1.5前列腺液亦可用棉拭子尽量多的沾取于运输培养基中。

1.6中段尿可直接送检。

2.淋球菌培养+药敏

2.1病人在采集标本做该项目时至少停用抗生素一周以上。

2.2男性尿道炎急性期患者可用沾有少许生理盐水的.无菌拭子取脓性分泌物。

2.3非急性期病人,可用无菌细小棉拭子沾取少许生理盐水轻轻插入尿道2-4cm处,转动拭子,然后取出。

2.4女性患者先用无菌棉拭子擦去宫颈口分泌物,再用另一沾有生理盐水的棉拭子插入宫颈口内1cm处旋转,取出分泌物。

2.5采取标本以后马上把棉拭子插入运输培养基中送检。

3.沙眼衣原体抗原检测

3.1标本类型:男性主要有尿道拭子样本,尿液样本和直肠拭子样本,眼部采集眼结膜样本。女性主要有子宫拭子样本,阴道拭子样本及眼结膜样本。婴儿主要为眼部和肺部感染,可采集眼结膜和喉咙拭子样本。不可以使用血清或者血浆检测。

3.2男性尿道:将拭子直接插入尿道内2-3cm,旋转10秒后停留10-20秒后取出,放入采样试管中。若采样部位有异常分泌物,应先进行淋球菌检查。

3.3女性宫颈:先用一支大棉拭子擦去宫颈表面黏液,将该棉拭子丢.用另一拭子插入同一位置,转动10秒后停留10-20秒后放入采样管内.注意整个采样过程避免与阴道接触!若样本黏液过多或者带血应该尽量重新取样。

3.4尿液采样要求:

1)患者在采样前至少两小时没有排尿;

2)只采集最初的10-15ml尿液。

4.念珠菌培养+药敏

4.1病人在采集样本做该项目时至少停用药物一周以上。

4.2样本采集:怀疑阴道念珠菌感染需要做培养及做药物敏感试验的患者用沾有生理盐水的棉拭子沾取大量豆腐渣样白带或可疑白正带悬于无菌试管中送检。

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‘贰’ 哪种细菌对热抵抗力最强

哪种细菌对热抵抗力最强
最小的微生物:原核微生物支原体是目前已知的生物界最小的、能独立繁殖的原核微生物,支原体是目前已知的最小的原核微生物
抵抗力最强的微生物:细菌芽孢
目前世界上最大的微生物:它和其它的微生物不同点在于这种微生物并不需借由显微镜便可直接经由肉眼察觉到它的存在.Fishelson、Montgomery及Myrberg三人于1985年所出版的刊物中,发现一种生长于红海水域中的热带鱼(名叫surgeonfish)之小肠管道中的微生物是当时世界上所发现最大的微生物.这种微生物的名子叫做Epulopiscium fishelsoni.它外形与与雪茄烟很像,其长度约为200~500μm ( 1 mm=103μm),最长可到达600μm.其体积大小约为大肠杆菌的100万倍

‘叁’ )影响微生物对热抵抗力的因素

a 菌种不同,它们之间的细胞结构特性及细胞组成特性不同,对热的抵抗力也不一样,就一种微 生物来说,其个体的差异对热的抵抗力也不同。不同特性的微生物抗热力一般说来嗜热菌大 于嗜温菌和嗜冷菌,芽孢大于非芽孢菌,球菌大于非芽孢杆菌,革兰氏阳性菌大于革兰氏阴 性菌,霉菌大于酵母菌,霉菌和酵母的孢子大于其菌丝体。细菌的芽孢和霉菌的菌核抗热力 特别大。 b 同一菌种处于不同生育阶段对热的抵抗力也不一样,在同样条件下,对数生长期的菌体抗热 力较差,而稳定期的老细胞较大,老龄的细菌芽孢较幼龄的细菌芽孢抗热力强。
c 微生物个体数量的影响,菌数越多,抗热力越强,因微生物群集在一起时,受热致死不是同一 时间而是有先有后,同时菌体能分泌一些保护作用的蛋白性物质,菌多分泌的保护性物质也多, 抗热性也就增强 d 基质的影响因素

‘肆’ 食品安全检测手段有哪些

食品安全事件的频频发生,致使食品安全检测受到高度重视,国家投入了大量的财力用以购买检测设备、食品安全检测机构加班加点工作、科研人员努力研发新型检测方法、人大代表也在两会中对食品安全检测提出了建议。这对我国食品的食品安全水平的提高起到了巨大的推动作用,但是在如此频繁的检测工作下我国食品安全问题仍然时有出现,究竟是哪些漏洞造成了这一现象的产生?
1.食品安全检测机构相似度高、检验项目重复
我国现有食品安全检测机构约1100家,这些检测机构隶属于质检部门、卫生部门、农业部门、食品药品监督管理部门、工商行政部门等。有些实验室之间从实验室设置、仪器种类甚至型号都相同,造成了很多检测机构的检验项目一致,仅检测的样品不同。如农业部门的检测样品多为蔬菜、水果、谷物等初级农产品;质监部门的检测样品除原材料外,多为加工食品;FDA的检测多为餐饮原料乳、肉、鱼、蛋、蔬菜、谷物等,以及部分餐饮产品。但这些检测项目都具有高度的相似性,都包括细菌和霉菌检测、化学污染检测,而且大部分检测机构都能对细菌学检验、农药残留、重金属、兽药残留等进行检测,而不能对二恶英等物质进行检测。
2.样品检测重复
检测机构的重复设置、缺乏特色,必然带来重复检测,如牛奶的三聚氰胺检测,原料乳由农业检验机构检测一遍;到企业生产过程中,企业、质检部门的检测机构再检测一遍、进入流通领域后工商部门又检测一遍,其结果必然导致热点问题、热点食品每个部门都去检测,而有些食品检测项目则无人问津。致使检验人员天天满负荷工作,没有时间研究新的危害因素,从而导致刚解决完一个食品安全问题,又曝出一个新问题,检测机构疲于应付一个接一个的检测任务。
3.产品检测效能低
由于食品的特殊性,特别是预包装食品,检测后就会失去食用价值,因此只能依靠抽样检测结果来推断其总体水平。这样就会存在抽样误差的问题,特别是目前我国的初级农产品,由于分散式种、养,一个样品并不一定具备代表性。例如对猪肉中瘦肉精进行抽样检测,如果这些猪是从不同养殖户那分散收购的,那么抽样检测几乎没有意义,即使抽样率为90%,合格率是100%,也不敢肯定剩下的10%一定没有问题,这样就会使检测的效能大大降低。
造成这种局面的根本原因是我们在食品安全管理中过分强调且依赖了检测的作用。即使检测方法很准确、检测样本很有代表性,但这种对产品的检测只能是事后发现问题食品,处理问题食品,却无法改变食品的安全性。因此,必须将食品安全检测延伸到食品生产企业,将检测作为工具,用于判断生产原材料、生产环境、生产工艺、包装材料、从业人员等各个环节是否能够保障食品的安全。这就好比一个糖尿病患者测定血糖水平,其目的不在于知晓自身的血糖高低,而在于判断药物、饮食、运动等各个环节是否能够有效地控制血糖。
但是,就我国目前的食品生产企业而言,原来各工艺参数的制订是为了满足生产工艺的需要。后来很多食品生产企业虽然实行了HACCP体系,但在对关键控制点设定限值时,几乎没有一个企业是通过实验获得的数据,都是照抄其他企业或者引用法律条文。我们知道,即使是同一种食品、相同的加工工艺,如果原料产地不同,微生物种群不同,热抵抗力也不同,加热温度和时间自然也应该有所区别;如果不同企业所处的地理环境不同,环境温度不同,加热时间又会不一样;还有如果企业所用的设备不同,其加热功率、热传导系数也会不同。因此,奥普斯仪器的小编觉得食品生产企业应该通过实验获得具体的工艺参数,并以此为参考制订关键控制点的关键限值,才能真正发挥HACCP的食品安全控制作用。并且,相比小包装的产品检测,针对原材料的检测频次可以大大降低,检测成本也会随之降低。
再有,有些食品生产企业即使购买了相关检测设备,也没有专业的技术人员。因此如果我国的检测机构能够为食品生产企业承担原材料的检测任务,为食品生产企业把好原材料质量关;与食品生产企业共同承担工艺改进方面的研究,制订有效的工艺参数,可以将食品安全的管理前移,做到预防性管理,这样才能真正提高我国食品加工行业的食品质量安全。

‘伍’ 热体质与冷体质 是怎么回事

体质有寒热之分,如何区分人体属热证还是寒证,比较简单的检测方法是:

若感到喝热水舒服,大体属寒证,一般来说,虚寒体质的人基础代谢率低,体内产热量少,四肢即便在夏季也是冷的,他们面色较常人白,很少口渴,也不喜欢接触凉的东西,包括进空调房间。

若感到喝凉水舒服,大体属热证,实热体质的人代谢旺盛,产热多,经常脸色红赤,口渴舌燥,喜欢吃冷饮,易烦躁,常便秘。

认识自己的体质

人的体质有寒热虚实之分,先认识自己的体质,再配合相应性质的食物,便能达到保养身体之效。

寒冷体质

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“寒体质”的人,产热能量低,所以手足较冰冷,脸色比一般人苍白,容易出汗,大便稀,小便清白,肤色淡,口淡无味,喜欢喝热饮,很少口渴,即使炎炎夏日,进入冷气房也会觉得不适,需要喝杯热茶或加件外套才会舒服。这类体质的人饮食上宜选择偏温热者。

体质属冷性,较怕冷,偏向贫血症,若食用寒凉性食物时,则将使其冷症更严重,由于四肢之冰冷感增加,促使末稍血液循环不良,造成即使在天暑之际,仍有手足麻痹之感觉,一到冬天则受寒冷环境之影响疼痛更剧。

温热体质

“热体质”的人,产热能量增加,身体较有热感,脸色红赤,容易口渴舌燥,喜欢喝冷饮,小便色黄赤而量少,进入冷气房就倍感舒适。这类体质的人不太适宜服用温热性质的饮食,反而吃一些寒凉滋润的食物,方能维持身体之平衡,感觉舒服,减少全身性的热感。

体质虚与实

“体质虚”是生命活动力衰退所造成,人的精神比较萎靡。“体质实”则容易发热、腹胀、烦躁、呼吸气粗,容易便秘。

除了以上分类外,体质还有寒热虚实交杂的可能,约略可分“寒与偏寒”,“热与偏热”,又或以一般来区分。

说到食物属性,中医有所谓“四气”,这是指食物进入体内,会产生“寒、热、温、冷”的作用,如果不温不热,不寒也不凉,则归属于“平”性,而每种水果,都有其属性,一般分为“温热”、“寒凉”、“甘平”三类。

温热类水果

所谓温热水果,指的是热量密度高、糖分高的水果。吃下去后,肝脏的葡萄糖磷酸化的反应加速、肝糖合成增加、胰岛素与升糠泪素比例上升、脂肪酸合成提高,三酸甘油脂合成也提高,肝脏充满了待送出的油脂和糖,就容易上火,身体能量增加,就比较“热”。

温热类水果有:枣、栗、桃、杏、龙眼、荔枝、樱桃、石榴、菠萝等。体质燥热的人吃这类水果应适量。

寒凉类水果

体质虚寒的人对这类水果应慎用。寒凉类水果包括:柑、橘、菱、香蕉、雪梨、柿子、百合、西瓜等。

甘平类水果

甘平类水果有:葡萄、木瓜、橄榄、李子、梅、枇杷、山楂、苹果等。这种水果适宜于各种体质的人。

‘陆’ 什么事沙门氏菌

简介
沙门氏菌病的病原体。属肠杆菌科,革兰氏阴性肠道杆菌。已发现的近一千种(或菌株)。按其抗原成分,可将沙门氏菌分为甲、乙、丙、丁、戊等基本菌组。其中与人体疾病有关的主要有甲组的副伤寒甲杆菌,乙组的副伤寒乙杆菌和鼠伤寒杆菌,丙组的副伤寒丙杆菌和猪霍乱杆菌,丁组的伤寒杆菌和肠炎杆菌等。除伤寒杆菌、副伤寒甲杆菌和副伤寒乙杆菌引起人类的疾病外,大多数仅能目引起家畜、鼠类和禽类等动物的疾病,但有时也可污染人类的食物而引起食物中毒。
名称由来
1885年沙门氏等在霍乱流行时分离到猪霍乱沙门氏菌,故定名为沙门氏菌属。沙门氏菌属有的专对人类致病,有的只对动物致病,也有对人和动物都致病。沙门氏菌病是指由各种类型沙门氏菌所引起的对人类、家畜以及野生禽兽不同形式的总称。感染沙门氏菌的人或带菌者的粪便污染食品,可使人发生食物中毒。据统计在世界各国的种类细菌性食物中毒中,沙门氏菌引起的食物中毒常列榜首。中国内陆地区也以沙门氏菌为首位。
沙门氏菌病
鼠伤寒沙门氏菌
沙门氏菌病是公共卫生学上具有重要意义的人畜共患病之一,其病原沙门氏菌属肠道细菌科,包括那些引起食物中毒,导致胃肠炎、伤寒和副伤寒的细菌。它们除可感染人外,还可感染很多动物包括哺乳类、鸟、爬行类、鱼、两栖类及昆虫。人畜感染后可呈无症状带菌状态,也可表现为有临床症状的致死疾,它可能加重病态或死亡率,或者降低动物的繁殖生产力。
菌体大小(0.6~0.9)×(1~3)微米无芽胞,一般无荚膜,除鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌外,大多有周身鞭毛。营养要求不高,分离培养常采用肠道选择鉴别培养基。生化反应对本属菌的鉴别具有重要参考意义(见表)。不液化明胶,不分解尿素,不产生吲哚,不发酵乳糖和蔗糖,能发酵葡萄糖、甘露醇、麦芽糖和卫芽糖,大多产酸产气,少数只产酸不产气。VP试验阴性,有赖氨酸脱羧酶。DNA的G+C含量为50~53%。对热抵抗力不强,在60℃15分钟可被杀死。在水中存活2~3周。在5%的石炭酸中,5分钟死亡。沙门氏菌属 本属菌按生化反应分为4个亚属。亚属Ⅰ是生化反应典型的和最常见的沙门氏菌;亚属Ⅱ和Ⅳ是生化反应不典型的沙门氏菌;亚属Ⅲ是亚利桑那沙门氏菌。
沙门氏菌具有复杂的抗原结构,一般可分为菌体(O)抗原、鞭毛(H)抗原和表面(Vi)抗原3种。
传播媒介
蛋、家禽和肉类产品是沙门氏菌病的主要传播媒介,感染主要取决于沙门氏菌的血清型和食用者的身体状况,受威胁最大的是小孩、老年人及免疫缺陷个体。根据国际惯例,要求对易受沙门氏菌污染的食品进行分类管理,以使大多数食物不含沙门氏菌,从而有效预防沙门氏菌病。为此,人们在探索沙门氏菌检测方法的过程中,作出了不懈的努力,现将有关进展报告如下,并介绍两种快速检测沙门氏菌的试剂盒。
沙门氏菌的传播途径
肉的污染
肉及其制品的沙门氏菌检出率美国为20%—25%、英国为9.9%、日本检查进口家禽的污染率为10.3%,国内肉类沙门氏菌检出率在1.1%—39.5%。
蛋的污染
中国蛋及其制品沙门氏菌检出率为3.9%-43.7%,由于吃蛋引起鼠伤寒病的病例报告逐渐有增加的趋势。
环境污染
食品在加工、运输、出售过程中往往被沙门氏菌污染。沙门氏菌在粪便、土壤、食品、水中可生存5个月至2年之久。
传播问题
恢复期患者和无症状的带菌者也是常见的传染源。

‘柒’ 微生物:支原体简介

支原体
支原体(mycoplasma):又称霉形体,为目前发现的最小的最简单的细胞,也是唯一一种没有细胞壁的原核细胞。支原体细胞中唯一可见的细胞器是核糖体。

【发现】

支原体是在1898年发现的,是一种简单的原核细胞。其大小介于细菌和病毒之间。结构也比较简单,多数成球形,没有细胞壁,只有三层结构的细胞膜,故具有较大的可变性。支原体可以在特殊的培养基上接种生长,用此法配合临床进行诊断。与泌尿生殖道感染有关的主要是分解尿素支原体和人型支原体两种,约有20-30%的非淋菌性尿道炎的病人,是由以上两种支原体引起的,是非淋菌性尿道炎及宫颈炎的第二大致病菌。在成年人的泌尿生殖道中分解尿素支原体和人型支原体感染率主要与性活动有关,也就是说,与性交次数的多少、性交对象的数量有关,不管男女两性都是如此。据统计女性的支原体感染率更高些,说明女性的生殖道比男性生殖道更易生长支原体。另外,分解尿素支原体的感染率要比人型支原体的感染率为高。

【形态】

(一)形态与结构

支原体的大小为0.2~0.3um,可通过滤菌器,常给细胞培养工作带来污染的麻烦。无细胞壁,不能维持固定的形态而呈现多形性。革兰氏染色不易着色,故常用Giemsa染色法将其染成淡紫色。细胞膜中胆固醇含量较多,约占36%,对保持细胞膜的完整性具有一定作用。凡能作用于胆固醇的物质(如二性霉素B、皂素等)均可引起支原体膜的破坏而使支原体死亡。

支原体基因组为一环状以双链DNA,分子量小(仅有大肠杆菌的五分之一),合成与代谢很有限。

肺炎支原体的一端有一种特殊的末端结构(terminal structure),能使支原体粘附于呼吸道粘膜上皮细胞表面,与致病性有关。

(二)培养特性

营养要求比一般细菌高,除基础营养物质外还需加入10~20%人或动物血清以提供支原体所需的胆固醇。最适pH7.8~8.0之间,低于7.0则死亡,但解脲脲原体最适pH6.0~6.5。

大多数兼性厌氧,有些菌株在初分离时加入5%CO2生长更好。生长缓慢,在琼脂含量较少的固体培养基上孵育2~3天出现典型的“荷包蛋样”菌落:圆形(直径10~16um),核心部分较厚,向下长入培养基,周边为一层薄的透明颗粒区。此外,支原体还能在鸡胚绒毛尿囊膜或培养细胞中生长。

繁殖方式多样,主要为二分裂繁殖,还有断裂、分枝、出芽等方式,盖因缺乏细胞壁造成分裂时二个子细胞大小均所致。同时,支原体分裂和其DNA复制不同步,可形成多核长丝体。

(三)生化反应与分型

一般能分解葡萄糖的支原体则不能利用精氨酸,能利用精氨酸的则不能分解葡萄糖,据此可将支原体分为两类(见表19-1)。解脲脲原体不能利用葡萄糖或精氨酸,但可利用尿素作能源。

各种支原体都有特异的表面抗原结构,很少有交叉反应,具有型特异性。应用生长抑制试验(Growth inhibition test,GIT)、代谢抑制试验(Metabolic inhibition test,MIT)等可鉴定支原抗原,进行分型。

表19-1 人类支原体的主要生物学性状 名称 需要胆固醇 分解葡萄糖 分 解 还原四氮唑 吸附红细胞

支原体属

人型支原体

唾液支原体

发酵支原体

肺炎支原体

口腔支原体

生殖支原体

脲原体属

解脲脲原体 +++++++ --++-+- ++--+-- ------+ ---+-±- ---++-+

(四)抵抗力

支原体对热的抵抗力与细菌相似。对环境渗透压敏感,渗透压的突变可致细胞破裂。对重金属盐、石炭酸、来苏尔和一些表面活性剂较细菌敏感,但对醋酸铊、结晶紫和亚锑酸盐的抵抗力比细菌大。对影响壁合成的抗生素如青霉素不敏感,但红霉素、四环素、链霉素及氯霉素等作用于支原体核蛋白体的抗生素,可抑制或影响蛋白质合成,有杀灭支原体的作用。

二、致病性与免疫性

支原体不侵入机体组织与血液,而是在呼吸道或泌尿生殖道上皮细胞粘附并定居后,通过不同机制引起细胞损伤,如获取细胞膜上的脂质与胆固醇造成膜的损伤,释放神经(外)毒素、磷酸酶及过氧化氢等。

巨噬细胞、lgG 及 lgM 对支原体均有一定的杀伤作用。呼吸道粘膜产生的SlgA抗体已证明有阻止支原体吸附的作用。在儿童中,致敏淋巴细胞可增强机体对肺炎支原体的抵抗力。

【支原体感染】

致病支原体中,肺炎支原体起肺炎,人型支原体、解脲支原体和生殖器支原体主要泌尿生殖道感染。支原体肺炎又称原发性非典型肺炎,支原体肺炎全年均可发病,以冬季多见,可有小流行。支原体脑炎是学龄前儿童及青年人常见的一种肺炎,支原体肺炎主要通过飞沫传播,潜伏期较长,可达2~3周。支原体肺炎虽然病程较长,肺部病变较重,炎症吸收较慢,但绝大多数预后都是良好的,合并症亦少。生殖器支原体感染是近年新明确的一种性接触传播疾病。成人主要通过性接触传播,新生儿则由母亲生殖道分娩时感染。成人男性的感染部位在尿道粘膜,女性感染部位在宫颈。新生儿主要引起结膜炎和肺炎。

【支原体的实验诊断】

支原体实验室检测方法有:形态学检查、支原体培养、抗原检测、血清学方法和分子生物学方法。

解脲支原体MB抗原的研究表明:MB抗原是解脲支原体感染时被识别的主要外膜抗原,具有种特异性,包含血清特异的和交叉反应的抗原决定簇。编码MB抗原的基因长1200多个碱基、N端1/3为保守区,包含群特异的抗原决定簇:C端2/3是由重复序列组成的可变区,包含型特异的抗原决定簇,对该抗原的研究及对于研究疾病的发病机制和免疫机制起重要作用。MB抗原位于解脲支原体膜的表面,N端固定于膜上使C端重复区暴露于微生物周围的微环境。N端可以作为其分群分型的基础,C端最可能首先与宿主的防御系统相遇而引起主要的抗体反应,是理解它的发病机制和免疫机制的基础。MB抗原与疾病的关系,以及它在疾病中的作用还有待进一步探讨。

测定支原体抗体的血清学试验方法中,有支原体特异性血清学检测和非特异性血清学检测:支原体特异性血清学检测方法中,最常用的是补体结合试验,另有间接免疫荧光染色检查法、生长抑制试验、代谢抑制试验、间接血凝试验、酶免疫法和酶联免疫吸附试验(ELISA)等。支原体的非特异血清学方法有肺炎支原体冷凝集试验与MG链球菌凝集试验,对支原体肺炎能起辅助诊断的作用。检测特异性抗体IgG的方法尚不能达到早期快速诊断的目的,抗原的检测为今后研究的发展方向。目前已有用酶联免疫吸附试验、荧光标记抗体、肺炎支原体膜蛋白单克隆抗体和反向间接血凝法直接检测分泌物和体液中支原体抗原的报道,具有很高的特异度和灵敏度。人体感染肺炎支原体后,能产生特异性IgM和IgG类抗体。IgM类抗体出现早,一般在感染后1周出现,3~4周达高峰,以后逐渐降低。由于肺炎支原体感染的潜伏期为2~3周,当患者出现症状而就诊时,IgM抗体已达到相当高的水平,因此IgM抗体阳性可作为急性期感染的诊断指标。如IgM抗体阴性,则不能否定肺炎支原体感染, 需检测IgG抗体。IgG较IgM出现晚,需动态观察,如显着升高提示近期感染,显着降低说明处于感染后期。由此提示IgG与IgM同时测定,可提高诊断率,达到指导用药、提高疗效之目的。Savyon公司提供支原体IgM、IgG和IgA抗体ELISA检测试剂盒。

支原体分子生物学检测方法有基因探针和聚合酶链反应(PCR)等方法。基因探针的核酸杂交法,虽然敏感性和特异性都很高,但基因探针常用同位素标记,放射性危害大,设备要求高且繁琐难以推广,近年来发展的PCR技术,使得支原体检测变得简便、快速、敏感、特异,为支原体的检测和实验研究开辟了一个广阔的前景。

tu1血清标本中的MP抗体与板上包被的MP抗原结合

tu2抗人IgG/IgM/IgA-HRP和板上的抗原抗体复合物结合

tu3加入的底物被酶分解的产物的颜色深度与标本中抗体的浓度成正比

SeroMP支原体ELISA试剂盒

本试剂盒是检测支原体肺炎的第三代产品,它通过ELISA法在酶标板上完成人血清的IgM、IgG和IgA抗体检测。沙眼衣原体感染的诊断方法有细胞培养、直接抗原检测、分子生物学和血清学方法。直接抗原检测法中获取标本(在感染部位取材)较困难,所得结果可靠性也不强。而本试剂盒采用的血清学检测以血清为标本,可检测各个部位和各个时期的肺炎衣原体感染,并且某一类型的抗体象征疾病处于一定发展阶段。

【细胞培养支原体感染】

细胞培养(特别是传代细胞)被支原体污染是个世界性问题。国内外研究表明,95%以上是以下四种支原体:口腔支原体(M.orale)、精氨酸支原体(M.arginini)、猪鼻支原体(M.hyorhinis)和莱氏无胆甾原体(A.laidlawii),为牛源性。以上是最常见的污染细胞培养的支原体菌群,但能够污染细胞的支原体种类是很多的,国外调查证明,大约有二十多种支原体能污染细胞,有的细胞株可以同时污染两种以上的支原体。

支原体污染的来源包括工作环境的污染、操作者本身的污染(一些支原体在人体是正常菌群)、培养基的污染、污染支原体的细胞造成的交叉污染、实验器材带来的污染和用来制备细胞的原始组织或器官的污染。

组织细胞培养工作中,主要从以下几个方面来预防支原体的污染:控制环境污染;严格实验操作;细胞培养基和器材要保证无菌;在细胞培养基中加入适量的抗生素。支原体污染细胞后,特别是重要的细胞株,有必要清除支原体,常用方法有抗生素处理、抗血清处理、抗生素加抗血清和补体联合处理。支原体最突出的结构特征是没有细胞壁,一般来讲,对作用于细胞壁生物合成的抗生素,如 -内酰胺类、万古霉素等完全不敏感;对多粘菌素(polymycin)、利福平、磺胺药物普遍耐药。对支原体最有抑制活性及常用于支原体感染治疗的抗生素是四环素类、大环内酯类及一些氟喹诺酮;其他类抗生素如氨基糖苷类、氯霉素对支原体有较小抑制作用,所以常不用来作为支原体感染的化学治疗剂。InvivoGen公司研究开发的新一代支原体抗生素M-Plasmocin能有效地杀灭支原体,不影响细胞本身的代谢,并且用M-Plasmocin处理过的培养细胞,不会重新感染支原体。

支原体有时被称为类菌质体。无细胞壁,多呈不规则球状、长丝状,可分枝,营寄生共生或腐生。一般侵害对象为动植物,可造成多种疾病。

支原体(Mycoplasmal)是目前所能发现的能在无生命培基中生长繁殖的最小的微生物。

支原体体形多样,基本为球形,亦可呈球杆状或丝状,其菌落呈针尖大小,故又称之为微小支原体。支原体特点是无细胞壁及前体,细胞器极少。DNA的G+C含量低,菌体内具有非常小的染色体组,其分子量约为45×108,菌体细胞大小约为0.2-0.3μm,很少超过1.0μm。由三层蛋白质和脂质组成的膜样结构以及一层类似毛发结构组成。支原体由二分裂繁殖,形态多样。支原体用普通染色法不易着色,用姬姆萨染色很浅,革兰氏染色为阴性。支原体可在鸡胚绒毛尿囊膜上或细胞培养中生长。用培养基培养。营养要求比细菌高。由于它没有细胞壁,因此对影响细胞壁合成的抗生素,如青霉素等不敏感,但红霉素、四环素、卡那霉素、链霉素、氯霉素等作用于核蛋白体的抗生素,可抑制或影响支原体的蛋白质合成,有杀伤支原体作用,支原体对热抵抗力差,通常55℃经15分钟处理可使之灭活。石碳酸,来苏儿易将其杀死。在培养基中置入脲素并以硫酸锰作指示剂极易与其他支原体作出鉴别。

它广泛分布于自然界,有80余种。与人类有关的支原体有肺炎支原体(M-pneumonie,Mp)、人型支原体(M.humenis,MH)、解脲支原体(Ureaplasma urealyticum, UU 分解尿素支原体)和生殖器支原体(M.genitalium,MG)等。

肺炎支原体引起肺炎。现已从人类泌尿生殖道分离出来7种支原体,其中分离率较高而与泌尿生殖道疾病有关,是解脲支原体,其次是人型支原体。人型支原体(M.humenis,MH)、解脲支原体(Ureaplasma urealyticum,UU)和生殖器支原体(M.genitalium,MG)都会引起泌尿生殖道感染。

解脲支原体(ureaplasma ure-alyticum)是一种原核微生物,呈球杆状,大小为125-250毫微米,分子量4.5*108,高度多形性,没有坚硬的细胞壁,能在无细菌的培养物中增殖,能产生尿素分解酶分解尿素。特异性抗体能抑制它生长,因其缺乏坚硬的细胞膜,对青霉素耐药,对细胞膜有亲和性,生长繁殖时需要类固醇物质。四环素、红霉素、壮观霉素对之有效。婴儿或无性交接触的女性生殖道内找不到解脲支原体。而性生活越乱,这种支原体阳性率也越高。Mc Donald 1982年报告587例急性尿道炎症状病人中,209例(36%)中段尿中分离出解脲支原体。

人型支原体(mycoplasma hominis)支原体对外界环境抵抗力弱,45℃15min即可被杀死。对肥皂、酒精、四环素、红霉素敏感。

【发病机理】

支原体只能粘附在呼吸道或泌尿生殖道的上皮细胞表面的受体上,而不进入组织和血液。支原体引起细胞损害的原因为:粘附于宿主细胞表面的支原体从细胞吸收营养,从细胞膜获得脂质和胆固醇,引起细胞损伤;支原体代谢产生的有毒物质,如溶神经支原体能产生神经毒素,引起细胞膜损伤;脲原体含有尿素酶,可以水解尿素产生大量氨,对细胞有毒害作用。支原体除可以粘附于细胞、巨噬细胞表面外,还可以粘附于精子表面,从而阻止精子运动,其产生神经氨酸酶样物质可干扰精子与卵子的结合。这就是支原体感染引起不育不孕的原因之一。

在动物实验发现,小鼠腹腔巨噬细胞可以杀灭支原体,而中性粒细胞的作用不大。在体外,IgG1和IgG2抗体有调理作用。可加强巨噬细胞对支原体的杀伤作用。

【支原体与L型细菌的区别】

L型细菌是在抗生素、溶菌酶等作用下变成的一种细胞壁缺陷型细菌,其许多特性与支原体相似,在鉴定时很有必要将二者区别开来(见下表)。

表19-2 支原体与L型细菌的区别

支原体 L型细菌

自然界中广泛存在绝大多数生长需胆固醇

在遗传上与细菌无关,且无论在什么条件下也不能变成细菌

菌落较小,0.1~0.3mm 自然界很少存在生长不一定需要胆固醇

在遗传上与原菌相关,并可在诱导因素去除后回复为原菌

菌落稍大,0.5~1.0mm

主要病原性支原体

一、肺炎支原体所致

肺炎支原体(M.Pneumonia)是人类支原体肺炎的病原体。支原体肺炎的病理改变以间质性肺炎为主,有时并发支气管肺炎,称为原发性非典型性肺炎。主要经飞沫传染,潜伏期2~3周,发病率以青少年最高。临床症状较轻,甚至根本无症状,若有也只是头痛、咽痛、发热、咳嗽等一般的呼吸道症状,但也有个别死亡报道。一年四季均可发生,但多在秋冬时节。

肺炎支原体的致病首先通过其顶端结构粘附在宿主细胞表面,并伸出微管插入胞内吸取营养、损伤细胞膜,继而释放出核酸酶、过氧化氢等代谢产生引起细胞的溶解、上皮细胞的肿胀与坏死。诱发机体产生的抗体也可能参与了上述病理损伤。呼吸道分泌的SlgA对再感染有一定防御作用,但不够牢固。

肺炎支原体的诊断方法主要依靠分离培养和血清学试验。标本可采可疑病人的痰或咽试子,接种于含血清或酵母浸膏的琼脂培养基。5~10天后观察有无直径30~100um的圆形房顶样菌落。多次传代后可变为典型的“荷包蛋”样菌落,并能吸附多种动物红细胞和气管上皮细胞、HeLa细胞等,且此类吸附可被特异性抗体所抑制。分离的支原体经形态、溶血与生化反应作初步鉴定后需进一步用特异性抗血清作生长抑制试验和代谢抑制试验。用患者血清与支原体脂质抗原作补体结合试验,恢复期较急性期效价高4倍以上具有诊断价值。亦可用间接免疫荧光试验、间接血凝ELISA检测标本。另外,有1/3~3/4患者的血清可与人O型红细胞在4℃时有非特异性凝集(称为“冷凝集试验”),37℃时消失,患病一周时达到高峰。此方法简便,有助于诊断。

治疗可选用红霉素、四环素和氯霉素等。

支原体死疫苗和减毒活疫苗仍在试验中。

二、解脲脲原体

解脲脲原体(M.urealyticum)为脲原体属中唯一的一个种,因生长需要尿素而得名。菌落微小,直径仅有15~25um,须在低倍显微镜下观察,故旧称T株 (tiny strain)。菌落表面有粗糙颗粒,在合适条件下可转成典型的荷包蛋样菌落。生长需要胆固醇和尿素,分解尿素为其代谢特征,产生氨氮,使培养基pH上升,导致自身死亡。

解脲脲原体可引起泌尿生殖道感染,并被认为是非淋球菌性尿道炎中仅次于衣原体(占50%)的重要病原体。由于80%孕妇的生殖道内带有解脲脲原体,因此可通过胎盘感染胎儿而导致早产、死胎,或在分娩时感染新生儿,引起呼吸道感染。此外,解脲脲原体还可引起不孕症。

治疗用红霉素、四环素、强力霉素等高度敏感的抗生素。

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