㈠ 微生物检测-霉菌
霉菌和酵母计数操作细则
1 设备和材料
1.1 温箱：25～28℃。
1.2 振荡器。
1.3 天平。
1.4 显微镜。
1.5 玻塞三角瓶：300mL。
1.6 试管：15mm×150mm。
1.7 平皿：直径9cm。
1.8 吸管：1mL及10mL。
1.9 酒精灯。
1.10 载物玻片。
1.11 盖玻片。
1.12 广口瓶。
1.13 牛皮纸袋：121℃灭菌20min。
1.14 金属勺、刀等。
1.15 试管架。
1.16 接种针。
1.17 橡皮乳头。
2 培养基和试剂
2.1 马铃薯－葡萄糖琼脂培养基，附加抗菌素，按GB 4789.28中4.79规定。
2.2 孟加拉红培养基：按GB 4789.28中4.81规定。
2.3 灭菌蒸馏水。
2.4 乙醇。
3 操作步骤
3.1 采样：取样时须特别注意样品的代表性和避免采样时的污染。首先准备好灭菌容器和采样工具，如灭菌牛皮纸袋或广口瓶，金属刀或勺等。在卫生学调查基础上，采取有代表性的样品。样品采集后应尽快检验，否则应将样品放在低温干燥处。
粮食(包括粮库贮粮，粮店或家庭小量存粮)样品的采集，可根据粮囤或粮垛的大小和类型，分层定点取样，一般可分三层五点，或分层随机采取不同点的样品，充分混合后，取500g左右送检。小量存粮可使用金属小勺采取上、中、下各部位的混合样品。
谷物加工制品(包括熟饭、糕点、面包等)、发酵食品、乳及乳制品以及其他液体食品，用灭菌工具采集可疑霉变食品250g，装入灭菌容器内送检。
3.2 以无菌操作称取检样25g(或25mL)，放人含有225mL灭菌水的玻塞三角瓶中，振摇30min，即为1：10稀释液。
3.3 用灭菌吸管吸取1∶10稀释液10mL，注入试管中，另用带橡皮乳头的1mL灭菌吸管反复吹吸50次，使霉菌孢子充分散开。
3.4 取1mL1∶10稀释液注入含有9mL灭菌水的试管中，另换一支1mL灭菌吸管吹吸5次，此液为1∶100稀释液。
3.5 按上述操作顺序做10倍递增稀释液，每稀释一次，换用一支1mL灭菌吸管，根据对样品污染情况的估计，选择3个合适的稀释度，分别在做10倍稀释的同时，吸取1mL稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做2个平皿，然后将凉至45℃左右的培养基注入平皿中，待琼脂凝固后，倒置于25～28℃温箱中，3d后开始观察，共培养观察5d。
3.6 计算方法：通常选择菌落数在10～150之间的平皿进行计数，同稀释度的2个平皿的菌落平均数乘以稀释倍数，即为每克(或毫升)检样中所含霉菌和酵母数。
3.7 报告：每克(或毫升)食品所含霉菌和酵母数以个/g(个/mL)表示。
㈡ 食物中的霉菌可以用什么方法检测出来
我们说的霉菌类食物就是需要通过发霉腌制的食物，这类食物包括豆腐乳，臭豆腐，黄豆酱，西瓜酱，腌制品内一般也会含有部分霉菌。
㈢ 食品微生物学检验 霉菌和酵母计数采用了什么检测技术
1、应选择菌落总数恰当的稀释倍数的平板进行菌落计数。
2、同一稀释倍数应计数两块平板取平均值。
3、最好划分出独立的房间进行菌落计数，因为霉菌孢子一旦飘洒出来，将很难清除，计数过程也应尽量避免孢子飘散的情况发生，做好防护。A、对培养液中酵母菌进行计数采用抽样检测法，A正确；B、野马的活动能力强，活动范围广，应采用标记重捕法调查其种群密度，B错误；C、分离真核细胞的细胞器采用差速离心法，C正确；D、分离高等植物叶绿体中的色素采用层析法，D错误．故选：AC．
㈣ 饲料中霉菌毒素怎么检测
霉菌毒素的检测方法很多，但由于霉菌毒素的化学结构和物理化学特性复杂，在样品中分配不均和基质的干扰，使其分析更加复杂。饲料的样品基质对霉菌毒素的影响最大，因为饲料是由多种物质混合在一起的，不同的物质中的霉菌毒素检测的程序是不同的。
通常，首先要对怀疑被污染的物质进行严格的样品处理，从样品中提取毒素，分析之前再进行洗脱除去杂质的干扰。在实际的分析中，有些方法可直接进行分离和定量，有些方法在分离和定量之前需要对霉菌毒素进行衍生。
有些霉菌毒素具有一个荧光特性的发色基团，如黄曲霉毒素(AF)、赭曲霉毒素(OT)、玉米赤霉烯酮(ZE)，样品的提取物经常用薄层色谱(TLC)和高效液相色谱(HPLC)来分离结构相似的化合物和污染物。
通过比较样品和标准品色谱的比移值(Rf)和保留时间来定性霉菌毒素，通过荧光强度和吸光度来定量霉菌毒素。一些霉菌毒素含有单端孢霉烯团，最大吸收值还不清楚，通常用气相色谱和气质联用色谱进行检测。这些样品在提取后，上样之前通常需要进行柱前衍生。
TLC和HPLC的方法对单端孢霉烯团有效，但对黄曲霉毒素的敏感性和特异性不强。TLC对谷物中的脱氧血腐镰刀菌烯醇的检测限是50～100μg/kg。
㈤ 饲料中霉菌毒素怎么检测
霉菌毒素的检测方法很多，但由于霉菌毒素的化学结构和物理化学特性复杂，在样品中分配不均和基质的干扰，使其分析更加复杂。饲料的样品基质对霉菌毒素的影
响最大，因为饲料是由多种物质混合在一起的，不同的物质中的霉菌毒素检测的程序是不同的。通常，首先要对怀疑被污染的物质进行严格的样品处理，从样品中提
取毒素，分析之前再进行洗脱除去杂质的干扰。在实际的分析中，有些方法可直接进行分离和定量，有些方法在分离和定量之前需要对霉菌毒素进行衍生。
有些霉菌毒素具有一个荧光特性的发色基团，如黄曲霉毒素(AF)、赭曲霉毒素(OT)、玉米赤霉烯酮(ZE)，样品的提取物经常用薄层色谱(TLC)和高效液相色谱(HPLC)来分离结构相似的化合物和污染物。
通过比较样品和标准品色谱的比移值(Rf)和保留时间来定性霉菌毒素，通过荧光强度和吸光度来定量霉菌毒素。一些霉菌毒素含有单端孢霉烯团，最大吸收值
还不清楚，通常用气相色谱和气质联用色谱进行检测。这些样品在提取后，上样之前通常需要进行柱前衍生。TLC和HPLC的方法对单端孢霉烯团有效，但对黄
曲霉毒素的敏感性和特异性不强。TLC对谷物中的脱氧血腐镰刀菌烯醇的检测限是50～100μg/kg。
㈥ 食品微生物检测内容有哪些
三个方面的内容：
第一类是致病菌及其毒素，比如沙门氏菌、副溶血性弧菌、单增李斯特菌、金葡菌肠毒素等，它们主要导致胃肠道疾病，严重的会造成肝、脑、肾等脏器的损害，甚至死亡。；
第二类是产毒真菌和真菌毒素，包括黄曲霉毒素、伏马菌素、展青霉素等，它们或造成人的急性中毒事件，或因长期摄入，造成消化道癌症和某些地方病。
第三类是病毒和寄生虫。
㈦ 食品霉菌和酵母分别计数是怎么样的
霉菌和酵母计数 1主题内容与适用范围
本标准规定了各类粮食、食品和饮料霉菌和酵母菌计数的检验方法。
本标准适用于各类粮食、食品和饮料中霉菌和酵母菌的计数。
2引用标准
GB 4789.28食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂
3设备和材料
3.1温箱：25～28℃。
3.2振荡器。
3.3天平。
3.4显微镜。
3.5玻塞三角瓶：300mL。
3.6试管：15mm×150mm。
3.7平皿：直径9cm。
3.8吸管：1mL及10mL。
3.9酒精灯。
3.10载物玻片。
3.11盖玻片。
3.12广口瓶。
3.13牛皮纸袋：121℃灭菌20min。
3.14金属勺、刀等。
3.15试管架。
3.16接种针。
3.17橡皮乳头。
4培养基和试剂
4.1马铃薯－葡萄糖琼脂培养基，附加抗菌素，按GB 4789.28中4.79规定。
4.2孟加拉红培养基：按GB 4789.28中4.81规定。
4.3高盐察氏培养基：按GB 4789.28中4.78规定。
4.4灭菌蒸馏水。
4.5乙醇。
5检验程序
检验程序如下：
（图略）
6操作步骤
6.1采样：取样时须特别注意样品的代表性和避免采样时的污染。首先准备好灭菌容器和采样工具，如灭菌牛皮纸袋或广口瓶，金属刀或勺等。在卫生学调查基础上，采取有代表性的样品。样品采集后应尽快检验，否则应将样品放在低温干燥处。
粮食(包括粮库贮粮，粮店或家庭小量存粮)样品的采集，可根据粮囤或粮垛的大小和类型，分层定点取样，一般可分三层五点，或分层随机采取不同点的样品，充分混合后，取500g左右送检。小量存粮可使用金属小勺采取上、中、下各部位的混合样品。
海运进口粮的采样：每一船仓采取表层、上层、中层及下层四个样品，每层从五点取样混合，如船仓盛粮超过10000t，则应加采一个样品。必要时采取有疑问的样品送检。
谷物加工制品(包括熟饭、糕点、面包等)、发酵食品、乳及乳制品以及其他液体食品，用灭菌工具采集可疑霉变食品250g，装入灭菌容器内送检。
6.2以无菌操作称取检样25g(或25mL)，放人含有225mL灭菌水的玻塞三角瓶中，振摇30min，即为1：10稀释液。
6.3用灭菌吸管吸取1∶10稀释液10mL，注入试管中，另用带橡皮乳头的1mL灭菌吸管反复吹吸50次，使霉菌孢子充分散开。
6.4取1mL1∶10稀释液注入含有9mL灭菌水的试管中，另换一支1mL灭菌吸管吹吸5次，此液为1∶100稀释液。
6.5按上述操作顺序做10倍递增稀释液，每稀释一次，换用一支1mL灭菌吸管，根据对样品污染情况的估计，选择3个合适的稀释度，分别在做10倍稀释的同时，吸取1mL稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做2个平皿，然后将凉至45℃左右的培养基注入平皿中，待琼脂凝固后，倒置于25～28℃温箱中，3d后开始观察，共培养观察5d。
6.6计算方法：通常选择菌落数在10～150之间的平皿进行计数，同稀释度的2个平皿的菌落平均数乘以稀释倍数，即为每克(或毫升)检样中所含霉菌和酵母数。
6.7报告：每克(或毫升)食品所含霉菌和酵母数以个/g(个/mL)表示。
㈧ 检测食物中霉菌微生物可以用什么方法
食品中霉菌可引起食物霉变，还会刺激人体消化道、胃部等，严重的还可损伤肝脏，造成食物中毒。
一般检测可以用孟加拉红培养基检测，或者用霉菌总数检测纸片都可以的。
㈨ 霉菌和酵母菌的测定还有什么方法
霉菌和酵母菌介绍及检测方法
一、霉菌和酵母菌介绍：
霉菌和酵母菌及其检验酵母菌是真菌中的一大类，通常是单细胞，呈圆形,卵圆形、腊肠形或杆状。霉菌也是真菌，能够形成疏松的绒毛状的菌丝体的真菌称为霉菌。
霉菌和酵母广泛分布于自然界并可作为食品中正常菌相的一部分。长期以来，人们利用某些霉菌和酵母加工一些食品，如用霉菌加工干酪和肉，使其味道鲜美；还可利用霉菌和酵母酿酒、制酱；食品、化学、医药等工业都少不了霉菌和酵母。但在某些情况下，霉菌和酵母也可造成中腐败变质。由于它们生长缓慢和竞争能力不强，故常常在不适于细菌生长的食品中出现，这些食品是pH低、湿度低、含盐和含糖高的食品、低温贮藏的食品，含有抗菌素的食品等。由于霉菌和酵母能抵抗热、冷冻，以及抗菌素和辐照等贮藏及保藏技术，它们能转换某些不利于细菌的物质，而促进致病细菌的生长；有些霉菌能够合成有毒代谢产物－霉菌毒素。霉菌和酵母往往使食品表面失去色、香、味。例如，酵母在新鲜的和加工的食品中繁殖，可使食品发生难闻的异味，它还可以使液体发生混浊，产生气泡，形成薄膜，改变颜色及散发不正常的气味等。因此霉菌和酵母也作为评价食品卫生质量的指示菌，并以霉菌和酵母计数来制定食品被污染的程度。目前已有若干个国家制订了某些食品的霉菌和酵母限量标准。我国已制订了一些食品中霉菌和酵母的限量标准。
二、检验方法：
霉菌和酵母的计数方法，与菌落总数的测定方法基本相似。主要步骤为：将样品制作成10倍梯度的稀释液，选择3个合适的稀释度，吸取1mL于平皿，倾注培养基后，培养观察，计数。对霉菌的计数，还可以采用显微镜直接镜检计数的方法。
具体检测标准参见：
GB4789.15-94，《中华人民共和国国家标准食品卫生微生物检验霉菌和酵母计数》
三、说明：
1．样品的处理。为了准确测定霉菌和酵母数，真实反映被检食品的卫生质量，首先应注意样品的代表性。对大的固体食品样品，要用灭菌刀或镊子从不同部位采取试验材料，再混合磨碎。如样品不太大，最好把全部样品放到灭菌均质器杯内搅拌2min。液体或半固体样品可用迅速颠倒容器25次来混匀。
2．样品的稀释：为了减少榈稀释倍数的误差，在连续递增稀释时，每一稀释度应更换一根吸管。在稀释过程中，为了使霉菌的孢子充分散开，需用灭菌吸管反复吹吸50次。
3．培养基的选择：在霉菌和酵母计数中，主要使用以下几种选择性培养基。
马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基（PDA）：霉菌和酵母在PDA培养基上生长良好。用PDA作平板计数时，必项加入抗菌素以抑制细菌。
孟加拉红（虎红）培养基：该培养基中的孟加拉红和抗菌素具有抑制细菌的作用。孟加拉红还可抑制霉菌菌落的蔓延生长。在菌落背面由孟加拉红产生的红色有助于霉菌和酵母菌落的计数。
高盐察氏培养基：粮食和食品中常见的曲霉和青霉在该培养基上分离效果良好，它具有抑制细菌和减缓生长速度快的毛霉科菌种的作用。
4．倾注培养。每个样品应选择3个适宜的稀释度，每个稀释度倾注2个平皿。培养基熔化后冷却至45℃，立即倾注并旋转混匀，先向一个方向旋转，再转向相反方向，充分混合均匀。培养基凝固后，把平皿翻过来放温箱培养。大多数霉菌和酵母在25－30℃的情况下生长良好，因此培养温度25~28℃。培养3d后开始观察菌落生长情况，共培养5d观察记录结果。
5．菌落计数及报告：选取菌落数10~150之间的平板进行计数。一个稀释度使用两个平板，取两个平板菌落数的平均值，乘以稀释倍数报告。固体检样以g为单位报告，液体检样以mL 单位报告。关于稀释倍数的选择可参考细菌菌落总数测定。
6．霉菌直接镜检计数法：对霉菌计数，可以采用直接镜检的方法进行计数。
在显微镜下，霉菌菌丝具有如下特征：
平行壁：霉菌菌丝呈管状，多数情况下，整个菌丝的直径是一致的。因此在显微镜下菌丝壁看起来象两条平行的线。这是区别霉菌菌丝和其他纤维时最有用的特征之一。
横隔：许多霉菌的菌丝具有横隔，毛霉、根霉等少数霉菌的菌丝没有横隔。
菌丝内呈粒状：薄壁、呈管状的菌丝含有原生质，在高倍显微镜下透过细胞壁可见其呈粒状或点状。
分枝：如菌丝不太短，则多数呈分枝状，分枝与主干的直径几乎相同，有分枝是鉴定霉功得出可靠的特征之一。
菌丝的顶端：常呈钝圆形。无折射现象。
凡有以上特征之一的丝状均可判定为霉菌菌丝。
观察视野中有无菌丝，凡符合下列情况之一者为阳性视野。
一根菌丝长度超过视野直径1/6；
一根菌丝长度加上分枝的长度超过视野直径1/6；
两根菌丝总长度超过视野直径1/6；
三根菌丝总长度超过视野直径1/6；
一丛菌丝可视为一个菌丝，所有菌丝（包括分枝）总长度超过视野直径1/6。
根据对所有视野的观察结果，计算阳性视野所占比例，并以阳性视野百分数（%）报告结果。计算公式：
每件样品阳性视野（%）=（阳性视野数 / 观察视野数）×100
㈩ 大肠杆菌和霉菌的检测方法
请参照；
GB4789-2003《食品微生物检验方法》中大肠菌群和霉菌检验。