rna检测方法

1. 小分子RNA的检测方法

实时荧光定量PCR技术是1996年由美国Applied biosystems公司推出在定性PCR技术基础上发展起来的核酸定量技术。该技术在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，使每一个循环变得“可见”，最后通过Ct值和标准曲线对样品中的DNA (或cDNA) 的起始浓度进行定量的方法。实时荧光定量PCR是目前确定样品中DNA (或cDNA)拷贝数最敏感、最准确的方法。
目前市场上miRNA qPCR检测方法主要有以下两种：1. 两步法； 2.三步加尾法。两种方法的主要差别在于qPCR之前的cDNA制备过程（如图）。其中两步法是通过独特设计的茎环结构引物进行反转录将miRNA反转录成cDNA。而三步法则是给miRNA序列加polyA尾，之后再利用反转录过程将miRNA反转录成cDNA并加上独特设计的尾部序列。

两步法的优势在于特异性很高，但是最新的研究报道显示在编辑过程中，miRNA 的3’序列的多样化现象(Heterogeneity)，这种现象的发生使得目前市场上qPCR两步检测法的准确性受到影响（如图）。而三步法则不受这一现象的影响，而且随着科学家们的不断摸索创新，三步法的特异性如今已经可以和两步法媲美。更重要的是低廉的价格也是三步检测法越来越受到广大研发人员喜爱的重要原因。

2. 检测DNA和RNA检测方法有什么区别

您好！检测DNA的方法有：1.光密度测定。2.琼脂糖电泳凝胶检测法。3。二苯胺法。
检测RNA的方法有：1.光密度测定。2.苔黒酚法。
主要的嘧啶和嘌呤具有共轭双键，使碱基，核苷，核苷酸和核酸在240-290nm的紫外波段有一段强烈的吸收峰，因此核酸具有紫外吸收特性，在260nm,处是最大的紫外光吸收值，根据朗波-比尔光吸收定律来计算出核酸含量。

3. 用什么方法检测产品是否含有DNA 和rna

DNA和RNA作为遗传物质，本身都有自己的特性，用于检测的方法也有很多，如下：

首先我们要知道：

DNA：为双链结构，由A 、C 、G、T组成，链有外显子和内含子区域，物质性质中A260/A280在1.8左右，在260nm出有最大吸收峰。

tRNA的二级和高级结构

1、抽提试剂盒分别抽提：将产品分成两份，其中一份用来抽提DNA，此样本加入RNA 酶，另一份用来抽提RNA，此样本加入Dnase I，由此抽提出来的核酸进行琼脂糖凝胶电泳或者aligent 4200/2100仪器检测，考虑到DNA和RNA可能会降解，只有样本完好时，才能轻易地辨别出来。

2、qPCR技术：如1中所示，用1中的样本进行qPCR验证，设计引物时DNA样本跨外显子区域，或者是单独设计内含子区，加标准品对照，RNA正常设计即可，由此得出的结果可以根据扩增长度和两个结果进行判定。

以上为两个最基本的方法，操作简单，成本可控，两个结合起来结果准确，当然还有一些其他的方法，并设计对照试验，采用控制变量法进行研究。

4. 快速鉴别DNA和RNA的方法

简单的应该是用甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同，甲基绿对DNA亲和力强，使DNA显现出绿色，而吡罗红对RNA的亲和力强，使RNA呈现出红色。用甲基绿、吡罗红的混合染色剂染色，可同时显示DNA和RNA的颜色

5. 细胞内DNA、RNA、蛋白质常用的分子生物学检测方法shi

细胞内DNA用甲基绿检测，而rna用吡罗红检测，蛋白质则用双缩脲试剂检测。

6. 如何检测RNA提取成功或如何检测RNA的完整性

检测RNA的完整性的方法：

1. 完整的总RNA在进行变性凝胶电泳时会产生清晰的28S和18S rRNA条带（真核样品）。28S rRNA条带的强度应当大致为18S rRNA条带的两倍。这种2:1的比率（28S：18S）是判断RNA完整性的一个很好的指标。

2. 使用变性凝胶电泳来评估RNA完整性的一个缺陷是观察所需的RNA样品量。通常情况下，需要在变性凝胶中上样至少200 ng的RNA才能在EtBr染色下进行观察。而在某些RNA制备实验中，如从穿刺活检样品或激光捕获显微切割样品中提取RNA，得率是非常低的。这种情况下，或许就不可能在进行表达谱分析实验前取出200ng的RNA来评估其完整性。其它的核酸染料，比如Moleculor Probes (Eugene, OR) 的SYBR® Gold及SYBR Green II RNA染料，相比传统的琼脂糖凝胶电泳EtBr染色方法可以显着提高灵敏度。通过使用300nm的透射光源（6 x 15瓦的灯泡）及特殊的滤光片，SYBR Gold RNA凝胶染色可以检测到低至1ng的RNA，而SYBR Green II则可以检测到2ng，从而可以使用更少的样品来进行RNA完整性分析。

3. 目前有一种快速简单的方法可以替代传统的凝胶分析方法，这种方法可以同时对RNA样品进行定量及质量评估。Agilent 2100 Bioanalyzer (Agilent Technologies)是第一款商业化的提供RNA样品状态细节信息的微流体仪器。当与RNA 6000 LabChip®（Caliper Technologies Corporation所拥有的一个注册商标）结合使用时，每次进行分析最低仅需1µl浓度为10 ng/µl 的样品。除了评估RNA完整性，这台自动化系统同样可以提供样品RNA浓度及纯度（如mRNA制备中的rRNA污染）的评估。在过去，检测浓度及纯度需要使用部分RNA样品（通过A260分光光度法），而评估完整性则需要另外使用部分样品。通过使用LabChip®系统，可以仅使用一份5ng的样品来同时对浓度、完整性及纯度进行分析。分析数据可以显示为类凝胶图像、电泳峰图及表格形式等。
   

7. 如何测量RNA浓度

1、超微量分光光度计测260nm吸收值计算。

可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸，单链、双链DNA，以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波长260 nm。

2、也可以用RNA胶（凝胶成像）检测。例如：原核生物的核糖体所含的rRNA有5S、16S及23S三种。在胶上就有三条明显大小不一的条带。凝胶迁移分析。可以用来研究RNA-蛋白相互作用。基本原理是：结合了蛋白的RNA在凝胶中的迁移速率更慢，因而可以区分出结合蛋白与未结合蛋白的RNA条带。

(7)rna检测方法扩展阅读

1、RNA的功能是：

（1）具有肽酰转移酶的活性。

（2）为tRNA提供结合位点。

（3）在蛋白质合成起始时，参与同mRNA选择性的结合，在肽链的延伸中与mRNA结合。

2、原核生物的rRNA分三类：5SrRNA、16SrRNA和23SrRNA。

真核生物的rRNA分四类：5SrRNA、5.8SrRNA、18SrRNA和28SrRNA。

S为大分子物质在超速离心沉降中的一个物理学单位，可间接反映分子量的大小。原核生物和真核生物的核糖体均由大、小两种亚基组成。

3、凝胶成像对DNA或RNA胶 进行切胶、拍照、观察、分析的实验室类仪器，凝胶成像系统可以应用于分子量计算、密度扫描、密度定量、PCR定量等生物工程常规研究。

8. 常用检测RNA的分子生物学技术有哪些

PCR技术。
分子生物学技术有PCR、分子克隆、核酸电泳、琼脂糖凝胶电泳测序、DNA，RNA提取、转化外源DNA、体外转录、逆转录、cDNA文库构建、原位杂交等。

9. 如何确认RNA的质量

1、RNA胶（凝胶成像）检测。例如：原核生物的核糖体所含的rRNA有5S、16S及23S三种。在胶上就有三条明显大小不一的条带。

2、凝胶迁移分析。可以用来研究RNA-蛋白相互作用。基本原理是：结合了蛋白的RNA在凝胶中的迁移速率更慢，因而可以区分出结合蛋白与未结合蛋白的RNA条带。

3、RNA-seq即转录组测序技术，把mRNA，smallRNA等用高通量测序技术把RNA的序列测出来。反映出RNA的表达水平。

(9)rna检测方法扩展阅读

1、RNA的功能是：

（1）具有肽酰转移酶的活性。

（2）为tRNA提供结合位点。

（3）在蛋白质合成起始时，参与同mRNA选择性的结合，在肽链的延伸中与mRNA结合。

16 S的rRNA3’端有一段核苷酸序列与mRNA的前导序列是互补的，这可能有助于mRNA与核糖体的结合。

2、凝胶成像对DNA或RNA胶 进行切胶、拍照、观察、分析的实验室类仪器，凝胶成像系统可以应用于分子量计算、密度扫描、密度定量、PCR定量等生物工程常规研究。