口蹄疫疫苗中和抗体检测方法

① 猪口蹄疫做完几天产生免疫

口蹄疫产生一般为15天左右，免疫期6个月左右。

该病潜伏期1—7天，平均2—4天病牛精神沉郁，闭口，流涎，开口时有吸吮声，体温可升高到40一41℃。发病1—2天后，病牛齿龈、舌面、唇内面可见到蚕豆到核桃大的水疱，涎液增多并呈白色泡沫状挂于嘴边。采食及反刍停止。

水疱约经一昼夜破裂，形成溃疡，这时体温会逐渐降至正常。在口腔发生水疱的同时或稍后，趾间及蹄冠的柔软皮肤上也发生水疱，也会很快破溃，然后逐渐愈合。有时在乳头皮肤上也可见到水疱。

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原理：利用异硫氰酸胍方法提取RNA，在反转录酶的作用下，以RNA为模板，以引物为起点合成与RNA模板互补的cDNA链。利用西安天隆科技有限公司生产的DTC型基因扩增仪，在TaqDNA聚合酶的作用下，经高温变性、低温退火、中温延伸的循环。

使特异性DNA片段的基因拷贝数放大一倍。经过35个循环，最终使基因放大数百万倍。将扩增产物进行电泳，经溴化乙锭染色后，在紫外灯照射下，肉眼可见DNA片段的扩增带。该方法可以检测所有亚型的口蹄疫病毒，检测结果为阳性，需进一步采用分型诊断试剂盒进行进一步检测。

② 口蹄疫病毒的疫苗研究

疫苗接种是特异性预防FMD的可靠和有效手段，安全有效的疫苗是成功地预防、控制乃至最终消灭FMD的先决条件。FMD弱毒疫苗和灭活疫苗等常规疫苗都具有良好的免疫原形，在预防和控制FMD的过程中发挥着重要作用，但由于病毒毒力返强、病毒灭活不彻底、活病毒逃逸加工厂等不安全因素，世界上一些地区FMD的暴发似乎与灭活疫苗中残存的活病毒有关，促使人们寻求一种更加安全有效的FMD疫苗。随着分子生物学技术的飞速发展，FMDV基因工程疫苗如亚单位疫苗、可饲疫苗、合成肽疫苗、蛋白质载体疫苗、基因缺失疫苗、活载体疫苗、核酸疫苗等不断涌现。 基因工程亚单位疫苗是指采用基因工程手段制备病原体亚单位成分，由于亚单位疫苗只含有病原体的一部分，不会引起病原体所导致的动物发病，在安全性方面大大提高。
FMDV基因工程亚单位疫苗主要是利用各种表达系统表达VP1蛋白，制成疫苗。Kupper等（1981）等克隆了FMDVVP1基因，将其插入到原核表达载体PL启动子的下游，实现VP1基因的原核表达，并通过间接ELISA和放射免疫试验证实了其表达产物具有抗原性，从而为FMDV基因工程亚单位疫苗的研制提供了理论依据。同年Kield用大肠杆菌表达的A型FMDVVP1蛋白免疫猪和牛，都可诱导中和抗体的产生，用高浓的VP1蛋白或重复接种牛，可使牛抵抗FMDV强毒的攻击。Morgan证实：用A12-32二聚体多次接种猪，猪也可产生高水平的中和抗体，可以保护猪免受强毒的攻击，但是该技术不适合O型FMDV。已经发现FMDV结构基因和非结构基因2A、3C串联起来表达，可以产生76S的类病毒粒子，提纯该病毒粒子，用来免疫动物，其免疫效果类似于全病毒，可产生高水平的中和抗体，能抵抗强毒的攻击，并彻底解决了FMDV常规疫苗散毒的危险，显示其良好的年个月度年个前景。除此以外，酵母和杆状病毒系统也用来表达VP1蛋白，解决VP1蛋白在原核表达系统中不被修饰加工等问题，以期提高其免疫原性。 可饲（食）疫苗即利用脓杆菌或基因枪等技术，将免疫原性基因导入植株中，获得表达免疫原性蛋白的植株。
FMD转基因植物可饲疫苗是研究较早，并且效果较好的例子之一。早在1998年，Carrillo等用FMDV的主要保护性抗原基因VP1获得了转基因拟南芥，用叶浸提物免疫小鼠，可诱导产生特异性抗体，所有免疫的小鼠都能抵抗FMDV强毒半数致死量的攻击，这是有关转基因植物表达的病毒抗原使免疫动物全部获得保护的首篇报道，而且一个免疫剂量仅为25-50mg叶片。1999年Wigdorovitta等又利用苜蓿作为受体材料，成功获得了转基因苜蓿，以15-20mg剂量免疫小鼠，免疫鼠能100%抵抗致死量强毒的攻击。Carrillo等又以马铃薯作为受体材料，成功获得了表达VP1的转基因马铃薯，动物实验证实免疫鼠也能抵抗强毒的。FMDV转基因植物可饲疫苗的研究成功，将为牛、羊等草食动物FMD的防治带来光明的前景。 合成肽苗即用根据免疫抗原表位的氨基酸序列合成的抗原决定基小肽制作的疫苗。一般是从蛋白质的一级结构并结合单克隆抗体的分析，推导出蛋白质免疫主要抗原表位的氨基酸顺序，然后合成或基因工程表达这一段肽作为抗原。
Dimarch用合成O1K病毒VP1141-158和200-213片段氨基酸组成的40个氨基酸肽（半胱氨酸-半胱氨酸-200-213-脯氨酸-脯氨酸-丝氨酸-141-158-脯氨酸-半胱氨酸-苷氨酸），在其中间加上两个脯氨酸和一个丝氨酸，使多肽折成立体构型，达到提高了单段肽（141-158-脯氨酸-半胱氨酸-苷氨酸）在豚鼠中的应答水平，并提出了N-末端氨基酸（半胱氨酸-半胱氨酸）在提高保护应答的重要性。Brown等用化学法合成了FMDVVP1基因编码的140-160及200-213位肽段基因片段，并在大肠杆菌体内得到了表达，用其免疫牛、猪等都获得了较好的免疫力。Doel分别用A、O、C血清型FMDVVP1序列的141-158和200-213肽段组成的40个aa合成肽，用牛和豚鼠进行了试验，结果每个肽都产生了特异性高水平抗病毒中和抗体，在豚鼠中O、A型肽可抗各自病毒的攻击并获得完全保护，C型较差。 运用基因工程手段克隆FMDV全长cDNA，构建感染性克隆，在DNA水平上来RNA，通过缺失与病毒力相关的基因，减弱其毒力但不丧失其免疫原性。
FMDV与Mengo病毒同属小RNA病毒，人们已通过DNA重组技术，将Mengo病毒polly（C）片段缩短，构成突变体，这种突变体对小鼠无害，而且在小鼠体内能产生高水平的抗体，保护小鼠免受强毒的攻击，因而研究人员试图借鉴Mengo病毒的经验，FMDVpoly（C）片段缩短，虽然缩短了poly（C）片段的FMDV突变体的毒力没有减弱，但这给人们某种启发，对FMDV基因组特定位点的缺失，极有可能构建FMDV弱毒株。
X射线晶体分析发现，FMDV具有一定立体构象，其表面由VP1-VP3组成，在VP1的一个高度可变区域内，有一高度保守的β环状（G-H环）氨基酸序列暴露于病毒粒子的表面，其中包含精氨酸-苷氨酸-天门冬氨酸（RGD）序列，构成病毒的细胞吸附位点。Ochoa等人研究FMDVVP1基因片段的主要抗原位点G-H环合成肽晶体结构时发现，针对VP1单抗可以产生一定程序的病毒凝集和很强的抑制病毒与细胞吸附作用。Acharya等也发现含有RGD序列的感染性的cDNA克隆，制备RGD缺失或突变的病毒粒子就成为可能。Mason通过取代病毒RGD序列内的氨基酸构建FMDV突变株，使病毒不能吸附和感染细胞。以上的研究均证实RGD序列是病毒吸附宿主细胞所必需的。Mckenna等用SGSNPGSL序列取代野生型SGSGVRGDFGSL的RGD编码序列，构建了RGD缺失病毒。这种缺失RGD序列的病毒粒子不吸附和感染细胞。利用该缺失病毒进行小鼠和猪的动物试验发现，野生型病毒对照组出现典型的FMD症状，试验组无任何症状。通过免疫沉淀监测了这些动物在接种28d后的血样，其中对照组显示很强的结构蛋白活性，没有测到非结构蛋白活性，证明了野生病毒在动物中能复制，而所构建的病毒不能复制。用海福特牛对这种病毒所做的油作比较，证明在产生血清中和抗体、刺激机体产生免疫应答、动物保护等方面与灭活疫苗一致，有些优于灭活疫苗。 核酸疫苗又称基因疫苗，是将编码病原体免疫保护性抗原蛋白基因置于真表达元件的控制下，并将其导入动物机体内，通过宿主细胞的转录系统合成抗原蛋白，从而诱导宿主产生对抗原蛋白的免疫应答。由于FMDV血清型多，各型间无交叉保护性，这给FMD的仿制带来巨大的困难。90年代，随着基因免疫概念的问世及完善，为FMDV免疫带来契机。Benvenisti将FMDV完整的结构基因P1和非结构基因2A、3CD串联起来，同时加入脑心肌炎病毒（EMCV）内部核糖体进入(IRES)，并通过免疫荧光和免疫斑点技术检测到猪皮肤中，部分猪获得抵抗FMDV强毒的攻击。Shieh未了克服亚单位疫苗不能产生持久的免疫保护，通过基因免疫和亚单位疫苗联合免疫来增强其免疫效果，首先用含有FMDV主要免疫原性VP1的质粒免疫鼠，接下来VP1多肽偶合物（P29-KLH）刺激，免疫的鼠产生高效价的抗体，并具有中和FMDV活性。
总之，理想的疫苗必须安全、有效、同时还应具备价廉、易于推广等优点。虽然FMDV灭活疫苗具有良好的免疫原性，但潜在的不安全性影响其使用；另外，由于灭活疫苗制备成本高，价格昂贵，限制了该疫苗的推广。基因疫苗经验有安全性高，同时可以根据需要制备同一病毒多哥成分或多价病毒疫苗，大幅度节约生产成本等优点，因此，FMDV记忆内工程疫苗是未来的发展方向。

③ 猪口蹄疫治疗比较快的方法是什么

1、扑杀病畜及染毒动物

扑杀动物的目的是消除传染源，病毒是最主要的传染源，其次是隐性感染动物和牛、羊等持续性感染带毒动物。疫情发生后，可根据具体情况决定扑杀动物的范围，扑杀措施由宽到严的次序可为病畜→病畜的同群畜→疫区所有易感动物。

2、免疫接种

目的是保护易感动物，提高易感动物的免疫水平，降低口蹄疫流行的严重程度和流行范围。现行油佐剂灭活疫苗的注射密度达80%以上时，能有效遏制口蹄疫流行。疫苗接种可分为常年计划免疫、疫区周围环状免疫和疫区单边带状免疫。

实施免疫接种应根据疫情选择疫苗种类、剂量和次数。常规免疫应保证每年2～3次，每头份疫苗含3PD50以上。紧急预防应将每头份疫苗提高到6 PD50，并增加免疫次数。

3、限制动物、动物产品和其他染毒物品移动

目的是切断传播途径。小到一个养猪户，大到一个国家，要想保持无口蹄疫状态，必须对上述动物和物品的引入和进口保持高度警惕。疫区必须有全局观念，其易感动物及其产品运出是疫情扩散的主要原因。

4、动物卫生措施

疫区除对场地严格消毒外，还要关闭与动物及产品相关的交易市场。

5、流行病学调查

包括疫源追溯和追查易感动物及相关产品外运去向，并对之进行严密监控和处理。

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最易感染的动物是黄牛、水牛、猪、骆驼、羊、鹿等；黄羊、麝、野猪、野牛等野生动物也易感染此病。本病以牛最易感，羊的感染率低。口蹄疫在亚洲、非洲和中东以及南美均有流行，在非流行区也有散发病例。

口蹄疫发病后一般不致死，但会使病兽的口、蹄部出现大量水疱，高烧不退，使实际畜产量锐减。另外，有个别口蹄疫病毒的变种可传染给人。因此，每次爆发后只能屠宰和集体焚毁染病牲畜以绝后患。由于口蹄疫传播迅速、难于防治、补救措施少，被称为畜牧业的“头号杀手”。

④ 口蹄疫疫苗怎么打

猪场对猪口蹄疫做免疫预防可以参考一下。分主动和被动免疫，做好了话，非常好的。希望对你有用： 主动免疫，疫苗：口蹄疫O型浓缩灭活苗 后备母猪配种前接种4-5ML/头，产前30天接种4-5ML/头。 经产母猪产前30天接种4-5ML/头，产前10天再次接种一次4-5ML/头。 公猪每3个月一次，每次接种...4-5ML/头。 仔猪出生后70天接种3ML/头，仔猪出生后100天加强接种5ML/头. 被动免疫：增强机体非特异性抗体的产生，有效降低口蹄疫病毒的感染率。 猪群使用复方花青素500克+黄芪多糖500克/T,拌料饲喂。

⑤ 羊口蹄疫的治疗方法

羊口蹄疫发生于羊的口蹄疫部位或牛。一般情况下，羊口蹄疫具有相应的口蹄疫疫苗，且羊口蹄疫较易发生在春季或秋季，属于群发性疾病。因此建议提前注射疫苗。同时建议保持牛群、羊群围栏的清洁卫生。在羊群外出后，建议针对羊群居住地进行紫外线消毒。

⑥ 猪口蹄疫苗怎样打

在注射口蹄疫疫苗之前请你先选择好产品的生产厂家，如上海申联的、中农威特、新疆天康的产品都比较好。以下希望对你有所帮助。
口蹄疫疫苗——使用方法
预防口蹄疫的疫苗有牛O型口蹄疫灭活疫苗，猪O型口蹄疫灭活疫苗，牛羊口蹄疫O型鼠化弱毒疫苗等。其具体的应用为：

(1)牛O型口蹄疫灭活疫苗系选择抗原谱广、抗原性和免疫原性良好的牛源强毒OA/58为毒种，接种于BHK-21传代细胞系单层培养，制备病毒抗原，经二乙烯亚胺(BEI)灭活，加矿物油佐剂制成的乳剂疫苗。为略带粉红色或乳白色的粘滞性液体。用于各种年龄的黄牛、水牛、奶牛、牦牛预防接种和紧急接种，免疫持续期为6个月。成年牛肌肉注射3毫升，1岁以下犊牛肌肉注射2毫升。本品应防止冻结。在4～8℃条件下贮存，有效期为10个月。

(2)猪O型口蹄疫灭活疫苗系用猪源强毒接种BHK-21或IBRS-2细胞单层，收获细胞毒液，经二乙烯亚胺(BEI)灭活，与油佐剂混合乳化制成。为乳白色或淡红色粘滞性乳状液，经贮存后允许液面上有少量油，瓶底有微量水(分别不得超过1/10)，摇之即呈均匀乳状液。用于预防猪O型口蹄疫，免疫持续期6个月。疫苗注射前充分摇匀，猪耳根后肌肉注射，体重10～25公斤注射2毫升；25公斤以上注射3毫升。注意疫苗应在10℃以下冷藏包装运送。本品保存于2～10℃冷库，有效期为1年。

(3)口蹄疫O型鼠化弱毒活疫苗系用口蹄疫O型鼠化弱毒株接种乳兔，收获含毒组织并磨碎，将病毒浸出液加入等量甘油制成。为暗赤色液体。静置后，瓶底有部分沉淀；振摇后，呈均匀的混悬液。用于预防1岁以上的黄牛、牦牛和4个月以上的绵羊、山羊O型口蹄疫。牛肌肉注射2毫升，羊皮下注射1毫升，免疫持续期6～8个月。本品不能用于猪、奶牛、水牛。在-12℃以下保存，有效期为1年；在2～6℃保存为5个月；在20～22℃保存为7天。

口蹄疫疫苗
1.口蹄疫疫苗是一种灭活苗，是防治口蹄疫的发生、流行最主要的武器之一。但还存在一些缺陷，一般只能诱发短期免疫，即4个月。

2.选择使用有效疫苗。防疫接种前，要先鉴别疫苗是否过期、失效，效价是否高，疫苗瓶是否有裂损。如遇破乳或超过规定量的分层(1/10)则不能使用。

3.疫苗当天开启当天用完。疫苗入库应做好记录，使用时采取“先入先用”的原则。每瓶疫苗启用后，瓶内剩余疫苗用蜡封闭针孔于2℃~8℃储存，超过24小时不可再用。

4.器械消毒。接种用所有器械，如注射器等，用温热方法高压灭菌或用洁净水加热煮沸消毒至少15分钟。严禁使用化学方法消毒。

5.动物免疫要求。免疫前应了解接种动物品种、健康状况、病史及免疫史，凡有病、瘦弱、临产母畜(10天~15天)不应接种，待病畜康复、母畜产后再按规定补针。

6.善后处理。使用疫苗后，所有疫苗包装，如疫苗瓶、使用过的酒精棉球、碘酊棉，要集中销毁。散乱在畜舍中会成为病原的来源。

7.饲养管理。接种疫苗前后2日~3日不要投喂抗生素，在饲料中，复合维生素用量提高5％，连用1周。

防治口蹄疫疫苗反应的措施

1.接种后，少数动物因品种、个体状况，可能出现疫苗反应，应加强观察，及时用肾上腺素或其他办法治疗，以减少损失。

2.接种后的养殖户(场)，应在畜舍内外进行一次彻底消毒工作，坚持1周。

3.凡曾接触过病畜的人员，应在更换衣服、鞋帽和必要的消毒后，方可参与疫苗注射。

4.接种动物，应休息1天~2天。

5.接种高龄孕畜或瘦弱动物，应做到一观察、二诊断、三注射。