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总黄曲霉素检测方法

发布时间:2022-08-26 13:04:43

Ⅰ 家庭如何检验黄曲霉素

摘要 一步式黄曲霉毒素检测金标试纸法是利用单克隆抗体而设计的固相免疫分析法。

Ⅱ 现在黄曲霉怎么怎么检测

在紫外线下,黄曲霉毒素b1,b2发蓝色荧光,黄曲霉毒素g1,g2发绿色荧光.黄曲霉毒素的相对分子量为312-346.难溶于水,易溶于油,甲醇,丙酮和氯仿等有机溶剂,但不溶于石油醚,己烷和乙醚中.一般在中性溶液中较稳定,但在强酸性溶液中稍有分解,在ph9-10的强碱溶液中分解迅速.其纯品为无色结晶,耐高温,黄曲霉毒素b1的分解温度为268℃紫外线对低浓度黄曲霉毒素有一定的破坏性.

液相色谱法
液相色谱(liquid chromatography,lc)与薄层层析在许多方面具有相似性,二者互相补充.通常用tlc进行前期的条件设定,选择适宜的分离条件后,再用lc进行黄曲霉毒素的定量测定.
免疫化学分析方法
利用具有高度专一性的单克隆抗体或多克隆抗体设计的黄曲霉毒素的免疫分析方法,也是最常用的黄曲霉毒素检测方法.这类方法通常包括放射免疫分析方法(radioimmunoassay,ria),酶联免疫法(enzyme-linked of immunosorbent assay,elisa)和免疫层析法(immunoaflinity column assay,ica).它们均可以对黄曲霉毒素进行定量测定.
(1) 免疫亲和柱-荧光分光光度法和免疫亲和术-hplc法
免疫亲和柱法和酶联免疫吸附法虽然都可达到速简便效果,但酶联免疫吸附法仅能检测单一毒素(如黄曲霉毒素b1)含量,而且易出现假阳性结果,难以控制.免疫亲和柱法(包括荧光光度法和hplc法)却能达到既定量准确又快速简便的要求.
免疫亲和柱的使用可以避免传统tlc和hplc的缺点,同时免疫亲和柱与tlc和hplc法结合可以大大提高工作效率,提高灵敏度和准确度.
黄曲霉毒素免疫亲和柱-荧光光度计法是以单克隆免疫亲和柱为分离手段,用荧光计,紫外灯作为检测工具的快速分析方法.它克服了tlc和hplc法在操作过程中使用剧毒的真菌毒素作为标定标准物和在样品预处理过程中使用多种有毒,异味的有机溶剂,毒害操作人员和污染环境的缺点.同时黄曲霉毒素免疫亲和柱-荧光光度计法分析速度快,一个样品只需10-15min,比传统方法快几个小时甚至几天时间;仪器设备轻便容易携带,自动化程度高,操作简单,直接读出测试结果,可以在小型实验或现场使用.可以进行黄曲霉毒素总量 (b1b2g1g2) 的测定,检测限可达到1ug/kg,达到黄曲霉毒素标准限量值以下测定范围为1-300ug/kg.
黄曲霉毒素免疫亲和柱-高效液相色谱法比传统的hplc法更加安全,可靠,灵敏度和准确度高.它采用单克隆抗体免疫技术,可以特效性地将黄曲霉毒素或其他真菌毒素分离出来,分离效率和回收率高.
分析原理试样中的黄曲霉毒素用一定比例的甲醇/水提取液经过过滤,稀释后,用免疫亲和柱净化,以甲醇将亲和柱上的黄曲霉毒素淋洗下来,在淋洗液中加入溴溶液衍生,以提高测定灵敏度,然后用荧光分光光度计进行定量.也可以将甲醇-黄曲霉毒素淋洗液的一部分注入hplc中,对黄曲霉毒素b1,b2,g1,b2分别进行定量分析.免疫亲和柱是用大剂量的黄曲霉毒素单克隆抗体固化在水不溶性的载体上,然后装柱而成.该方法的测定范围0-300ug/kg.
(2) 酶联免疫吸附法:
1996年,nakane 建立了辣根过氧化物酶标记抗体的测定技术.由于该方法简便,敏感,特异,可作为多种抗原或抗体的测定,20世纪70年代后期,该方法引入真菌毒素的检测中,下面介绍的是竞争性酶联免疫吸附间接法检测黄曲霉毒素b1.
原理:将已知抗原吸附在固态载体表面,洗除末吸附抗原,加入一定量抗体与待测样品(含有抗原)提取液的混合液,竞争培养后,在固相载体表面形成抗原抗体复合物.洗除多余抗体成分,然后加入酶标记的抗球蛋白的第二抗体结合物,与吸附在固体表面的抗原抗体结合物相结合,再加入酶底物.在酶的催化作用下,底物发生降解反应,产生有色物质,通过酶标检测仪测出酶底物的降解量,从而推知被测样品中的抗原量.
(3) 微柱筛选法 可以用来半定量测定各种食品中黄曲霉毒素b1,b2,g1,g2的总量.
原理 样品提取液中的黄曲霉毒素被微柱管风硅镁型吸附层吸附后,在波长365nm紫外光灯下显示蓝紫色荧光环,其荧光强度与黄曲霉毒素在一定的光密度范围内成正比例关系.若硅镁型吸附剂层未出现蓝紫色荧光,则样品为阴性(方法灵敏度为5-10ug/kg).由于在微柱上不能分离黄曲霉毒素b1,b2,g1,g2,所以测得结果为总的黄曲霉毒素含量.
(4) 一步式黄曲霉毒素检测金标试纸法
一步式黄曲霉毒素检测金标试纸法是利用单克隆抗体而设计的固相免疫分析法.由此产生的一步式黄曲霉毒素快速检测试纸可在5—10分钟完成对样品中黄曲霉毒素的定性测定.借助黄曲霉毒素标准样品,这种方法能估算黄曲霉毒素的含量,非常适用于现场测试和进行大量样品的初选.

Ⅲ 黄曲霉毒素怎么检测

检测方法

1、薄层分析法(TLC)

TLC法是检测黄曲霉素最为经典的方法,也是以前最为常用的方法,至今仍为一些检测机构所用,也是一种国标方法。其原理是针对不同的试样,用适宜的萃取溶剂将黄曲霉素从试样中萃取出来,经柱层析净化后,再在薄板上展开后分离。

利用黄曲霉素的荧光特性,根据荧光斑点的强弱与标准比较确定其含量,对于一些组分很复杂的试样要双向展开,才能获得较高的灵敏度。

TLC法设备简单,检测费用低,但操作繁琐、费时,萃取和净化效果不理想,灵敏度差,对操作人员的身体健康存在较大程度的危害。

2、液相色谱法(HPLC)

HPLC法是近年来发展起来的一种检测方法。其原理是在高效液相色谱仪上添加柱后衍生系统分离,再用荧光检测器测定。与其配套的柱后衍生系统有碘衍生化法、溴衍生化法及较为先进的电化学衍生化法和光化学衍生化法。当前,该方法大多用免疫亲和柱来净化、分离,其净化效果优异。

该法能准确地分离不同种类的黄曲霉素(例如:AFB1、AFB2、AFG1和AFM1等),检测速度快且定性与定量准确,检测限低,可作为仲裁法使用,但仪器设备价格昂贵,前处理方法相对繁琐,若用到免疫亲和柱则会使试样检测费用增加,对操作人员的身体健康仍存在一定的危害。

3、酶联免疫法(ELISA)

ELISA法也是近年来研究开发出来的一种较为新颖的方法。其原理是根据抗体和抗原之间特异性的免疫学反应,最后用测定酶活力的方法来增加测定的灵敏度。

该方法检测速度快、对人体危害小、但重复性差、试剂寿命短、需低温保存、假阳性概率较高、需要配置专门的酶标仪,且对一些富含盐和脂肪的试样需进行额外的处理。

4、毛细管电泳法(CE)

毛细管电泳(CE)也是一种新发展起来的分析黄曲霉素的方法。该方法与激光减弱荧光检测器(LIF)连用可很好地提高灵敏度。

Wei等用毛细管电泳一激光减弱荧光检测器测定AFB1、AFB2、AFG1和AFG1,取得了较为理想的分离效果,其中对AFB2的测定最为灵敏。但CE法的成本较高,操作复杂,不适宜在试样检测中广泛应用。

5、荧光光度法(IA C/S FB)

IA C/SFB法也是一种常用的国标方法。该方法的原理是利用各种黄曲霉素的荧光特性差异用荧光光度计测定试样中黄曲霉素的含量。

该方法对检测人员身体健康无危害,检测速度迅速,灵敏度高,适用于大量试样检测,且定量准确,但检测费用较高,需要配置专用设备,且不能对单一的毒素进行检测。

6、金标试纸法

金标试纸法,实际就是一种固相免疫分析法。其原理是利用抗体与抗原的特异性结合反应,可一步检测黄曲霉素。

该法可在5~10 min内完成对试样中黄曲霉素的定性测定,具有简单、快速的特点,且无须其他仪器设备的配合,既可在实验室中进行检测,也可在现场进行实地测定,但是其检测的准确度、精度有待进一步的研究。

7、生物传感器法

生物传感器是使用固定化技术将具有分子识别能力的生物活性物质与物理化学换能器结合,可以用来探测生物体内外的环境化学物质或与之起特异性交互作用后产生响应的一种装置。其中利用分子间特异亲和性制备的亲和型生物传感器为免疫传感器口。

根据能量转换器所传导的物理或化学信号的不同,免疫传感器可分为电化学免疫传感器、光学免疫传感器、压电晶体免疫传感器等。由于生物传感器具有选择性高、响应快、操作简单、携带方便和适合于现场检测等优点,因此各国科研工作者正积极探索研制新型生物传感器用于检测黄曲霉素。

(3)总黄曲霉素检测方法扩展阅读:

黄曲霉毒的危害

1993年黄曲霉毒素被世界卫生组织(WHO)的癌症研究机构划定为1类致癌物,是一种毒性极强的剧毒物质,足以说明黄曲霉毒素对身体的危害是极大的。黄曲霉毒素毒性远远高于氰化物、砷化物和有机农药的毒性,其中黄曲霉毒素B1毒性最大。

黄曲霉毒素进入体内后,主要在肝细胞内质网微粒体混合功能氧化酶系的作用下进行代谢。因此,黄曲霉毒素的危害性在于对人的肝脏组织有破坏作用,严重时可导致肝癌甚至死亡。 当然,黄曲霉毒素没有经过代谢活化是无致癌性的。

参考资料来源:网络-黄曲霉毒素检测方法

Ⅳ 某种食物中含黄曲霉素,用最简单的方法怎么检测

薄层分析法(TLC)、液相色谱法(HPLC)、酶联免疫法(ELISA)、毛细管电泳法(CE)、荧光光度法(IA C/S FB)。

1、薄层分析法(TLC)

TLC法是检测黄曲霉素最为经典的方法,也是以前最为常用的方法,至今仍为一些检测机构所用,也是一种国标方法。其原理是针对不同的试样,用适宜的萃取溶剂将黄曲霉素从试样中萃取出来,经柱层析净化后,再在薄板上展开后分离。

5、荧光光度法(IA C/S FB)

IA C/SFB法也是一种常用的国标方法。该方法的原理是利用各种黄曲霉素的荧光特性差异用荧光光度计测定试样中黄曲霉素的含量。

该方法对检测人员身体健康无危害,检测速度迅速,灵敏度高,适用于大量试样检测,且定量准确,但检测费用较高,需要配置专用设备,且不能对单一的毒素进行检测。

(4)总黄曲霉素检测方法扩展阅读:

黄曲霉毒素的毒性有三种临床特征:急性中毒、慢性中毒和致癌性,有致癌、致畸、致突变的作用。

其致癌特点是:致癌范围广,能诱发鱼类、禽类,各种实验动物、家畜及灵长类等多种动物的癌症,除主要诱发肝癌外,还可诱发胃癌、肾癌、直肠癌、乳腺癌,卵巢及小肠等部位的肿瘤,亦可导致出现畸胎。因此许多国家都制定了有关食品中黄曲霉毒素限量标准。

Ⅳ 黄曲霉素怎么检测

CSY-E96H黄曲霉毒素快速检测仪采用固相酶联免疫吸附ELISA的原理,即酶联免疫法;可定量检测粮食、食品、饲料、油脂、乳制品、药物、饮料、牛奶、酒等产品中的黄曲霉毒素(B1,B2,G1,G2 M1 M2 AFM1、AFP1、AFQ1、AFB1-2,3-环氧化物)含量。

Ⅵ 怎样检查白酒里的黄曲霉素

咨询记录 · 回答于2021-01-14

Ⅶ 家庭如何检验黄曲霉素

一步式黄曲霉毒素检测金标试纸法是利用单克隆抗体而设计的固相免疫分析法。

由此产生的一步式黄曲霉毒素快速检测试纸可在5—10分钟完成对样品中黄曲霉毒素的定性测定,借助黄曲霉毒素标准样品这种方法能估算黄曲霉毒素的含量,非常适用于现场测试和进行大量样品的初选。

薄层分析法(TLC)是检测黄曲霉素最为经典的方法,也是以前最为常用的方法,至今仍为一些检测机构所用,也是一种国标方法。其原理是针对不同的试样,用适宜的萃取溶剂将黄曲霉素从试样中萃取出来,经柱层析净化后,再在薄板上展开后分离。

(7)总黄曲霉素检测方法扩展阅读:

HPLC法是近年来发展起来的一种检测方法。其原理是在高效液相色谱仪上添加柱后衍生系统分离,再用荧光检测器测定。与其配套的柱后衍生系统有碘衍生化法、溴衍生化法及较为先进的电化学衍生化法和光化学衍生化法。当前,该方法大多用免疫亲和柱来净化、分离,其净化效果优异。

该法能准确地分离不同种类的黄曲霉素(例如:AFB1、AFB2、AFG1和AFM1等),检测速度快且定性与定量准确,检测限低,可作为仲裁法使用,但仪器设备价格昂贵,前处理方法相对繁琐,若用到免疫亲和柱则会使试样检测费用增加,对操作人员的身体健康仍存在一定的危害。

Ⅷ 怎样检测黄曲霉毒素

检测黄曲霉毒素的方法有很多,最为常见定性的方法是快速检测卡,定量的检测方法一般用液相 真菌毒素分析仪 还有ELISA检测试剂盒等!网上有很多介绍的。

Ⅸ 怎样检查白酒里的黄曲霉素

检查白酒里的黄曲霉素的方法:

1、薄层分析法,此法是检测黄曲霉素最为经典的方法,至今仍为一些检测机构所用,也是一种国标方法。其原理是针对不同的试样,用适宜的萃取溶剂将黄曲霉素从试样中萃取出来,经柱层析净化后,再在薄板上展开后分离。

2、液相色谱法,此法是近年来发展起来的一种检测方法。其原理是在高效液相色谱仪上添加柱后衍生系统分离,再用荧光检测器测定。此法能准确地分离不同种类的黄曲霉素,检测速度快且定性与定量准确,检测限低,可作为仲裁法使用,但仪器设备价格昂贵,前处理方法相对繁琐。

3、酶联免疫法,此法为近年较为新颖的方法。其原理是根据抗体和抗原之间特异性的免疫学反应,最后用测定酶活力的方法来增加测定的灵敏度。该方法检测速度快、对人体危害小、但重复性差、试剂寿命短、需低温保存、假阳性概率较高、需要配置专门的酶标仪,且对一些富含盐和脂肪的试样需进行额外的处理。

Ⅹ 牛奶黄曲霉素在临潼什么地方检测

黄曲霉毒素(黄曲霉毒素)是生长在食物和饲料黄曲霉和一组化学结构类似的产物的寄生曲霉代谢,特别是黑曲霉可产生黄曲霉毒素,但更少的生产,已经分离并鉴定了黄色有17种曲霉毒素,主要黄曲霉毒素B1,B2,G1,G2和M1代谢物在体内由通过羟基化和衍生化的,M2等B1和B2
黄曲霉毒素主要存在于发霉的花生,谷物,坚果和米饭等食品;溶解在水中的范围是从10毫克/升20毫克/升,可大量溶解于氯仿,甲醇,二甲亚砜等在中等极性的有机溶剂中不溶解于己烷,石油醚和乙醚;容易损坏的碱或强氧化剂;主要通过消化道,大多分布于肝,肾,小的分布血液,肌肉,脂肪组织的部分被吸收到体内,在体内的代谢过程主要是羟基化,甲基化和环氧化。人体暴露于黄曲霉
的主要来源被污染的食物,有两种膳食摄入的可能是:首先,由黄曲霉毒素(主要是B1)污染的植物食物摄入的方法,二是通过进料的方式进入牛奶或乳制品(包括干酪,牛奶等等)的黄曲霉毒素(主要是M1)。
黄曲霉毒素危害人体和动物健康都与相关的黄曲霉毒素抑制蛋白质的合成。 1961年,科学家发现了黄曲霉毒素污染的花生粕可诱发大鼠肝癌,发现黄曲霉毒素1962年的致癌物质。黄曲霉毒素是致癌,致突变和致畸性,可鱼,鸟,猴子等动物,家禽和诱发实验性肝癌的灵长类动物,肝脏疾病主要是出血,坏,胆管增生,肝硬化等。据报道含有B10.1毫克/公斤饲料对鳟鱼的,有可能要6个月的肝脏后;以B10.015毫克/公斤饲料含喂养大鼠,经过68至82周所有肝癌;国产致癌的黄曲霉毒素的动物实验发现,用含有黄曲霉毒素的饲料喂养小鼠已经出现在肝,乳头状瘤前胃,胃鳞状细胞癌,纤维组织的肿瘤,肾小管腺瘤之前,泪腺瘤,垂体瘤和甲状腺肿瘤。另外,M 1,G 1和B 2也有致癌作用。
吃的食物被黄曲霉素污染,会有急性中毒。基于黄疸,呕吐,厌食和发烧等症状的临床表现。腹水,下肢水肿,甚至亡,亡前出现胃肠道出血后,严重的会出现在两到三个星期。黄曲霉毒素
危险,广泛存在,以防止黄曲霉毒素中毒事件的发生,保护人类健康,世界上有70多个国家和地区的食品毒素黄曲霉毒素含量的限量要求。下面是一些国家和食品检验检疫要求的黄曲霉毒素地区:
美国联邦政府有关法律规定,人食用的食品和奶牛饲料中黄曲霉毒素含量(指B1 + B2 + G1 +共G2)是不大于20克/公斤,M1的牛奶中,其量不超过300克/千克的内容供人类食用和不超过0.5克/千克,和其它动物的饲料。
EC 1525/98规定,欧盟开始于1999年1月1日执行的直接向人食用的食品和食品成分选自由黄曲霉毒素B1的不能超过2克/千克的内容提供的规定,黄曲霉毒素B1,总B2,G1,G2,不得超过4毫克/千克。 - 日本提供不超过10微克/千克食品中黄曲霉毒素B1的含量。
食品中黄曲霉毒素B1标准允许量(GB2761-81)规定,玉米,花生,花生油不得超过20微克/公斤,玉米及花生制品(按原料翻译)不得超过20微克/公斤,大米,其他的食用油不应超过10微克/公斤,其他粮食,豆类,发酵食品不得超过5微克/千克,不得检出食品婴儿代乳品,其他食品可参照以上标准执行;牛奶及其制品中黄曲霉毒素M1的卫生标准(GB9676-88),且不得超过0.5微克/千克。方法
目前,黄曲霉毒素的测定食品中有薄层色谱法,高效液相色谱法,放射免疫测定法,酶联免疫吸附测定,免疫色谱法,微柱的筛选方法,该黄金标准试纸等。中国目前的国家标准GB用于/ T 5009.22-1996规定的毒素黄曲霉毒素B1的食物决心,GB / T 5009.23-1996规定了食品中的B1,B2,G1,G2的测定,黄曲霉毒素GB / T 5009.24-1996规定黄曲霉毒素测定食品中M1和B1的。此外,卫生部于1990年11月教育部下发了“防止食品卫生管理办法黄曲霉毒素污染。”霉

食品解毒措施是:
(1)白粉病:12%至13%或更少的粮食和花生壳模控制谷物的水分含量保持在使用化学薰蒸剂的完整性,以防止真菌感染也有一定的作用
日(2)解毒方法:。我们1)挑除霉粒:花生因黄曲霉毒素主要存在于发霉,变色,损坏和花生的收缩,除了选秀权,可以显着降低黄曲霉毒素的含量页2)冷轧加工和水擦洗:适合种植水稻,主要是由于目前的米糠和大米的表面(3毒素脱胚排毒:玉米胚芽适用法律有两种:一是浮选,磨玉米碎粒3MM所以加水搅拌,轻搓,胚光线和漂浮物,捞出浮层;二轧法,轧玉米,去掉皮和胚0.4)碱破坏毒素:适用于食用油.5)其他:如紫外线照射,盐炒法有一定的解毒作用日(三)加强食品卫生监管。

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