什么方法特异性检测

A. 检测基因表达的方法

主要用探针检测mRNA或用抗体检测出表达的蛋白质(转录水平上对特异mRNA的检测和翻译水平上对特异蛋白质的检测)

一、外源基因转录水平的鉴定

基因表达分为转录及翻译两阶段，转录是以DNA（基因）为模板生成mRNA的过程，翻译是以mRNA为模板生成蛋白质的过程，检测外源基因的表达就是检测特异mRNA及特异蛋白质的生成。所以基因表达检测分为两个水平。

即转录水平上对特异mRNA的检测和翻译水平上对特异蛋白质的检测。转录水平上的检测主要方法是Northern杂交，它是以DNA或RNA为探针，检测RNA链。和Southern杂交相同，Northern杂交包括斑点杂交和印迹杂交。

也可用RT-PCR（reverse transcribed PCR）方法检测外源DNA在植物体内的转录表达。其原理是以植物总RNA或mRNA为模板进行反转录，然后再经PCR扩增。

如果从细胞总RNA提取物中得到特异的cDNA扩增条带，则表明外源基因实现了转录。此法简单、快速，但对外源基因转录的最后决定，还需与Northern杂交的实验结果结合。

二、外源基因表达蛋白的检测

表达蛋白的检测方法有三种：

1、生化反应检测法：主要通过酶反应来检测；

2、免疫学检测法：通过目的蛋白（抗原）与其抗体的特异性结合进行检测，具体方法有Western杂交、酶联免疫吸附法（ELISA）及免疫沉淀法；

3、生物学活性的检测。

Western杂交是将聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）电泳分离抗原（Antigen）固定在固体支持物上（如硝酸纤维素膜，NC膜）。不同分子量大小的蛋白质在凝胶中迁移率不同，据此可确定特定的抗原存在与否以及相对丰度，或者蛋白质是否遭到降解等。

蛋白质电泳后转到NC膜，放在蛋白质（如牛血清蛋白BSA）或奶粉溶液中，温育，以封闭非特异性位点，然后用含有放射性标记或酶标记的特定抗体杂交，抗原-抗体结合，再通过放射性自显影或显色观察。

(1)什么方法特异性检测扩展阅读

外显子与内含子表达过程中的相对性 从内含子与外显子的定义来看，两者是不能混淆的，但是真核生物的外显子也并非都“显”（编码氨基酸），除了tRNA基因和rRNA基因的外显子完全“不显”之外，几乎全部的结构基因的首尾两外显子都只有部分核苷酸顺序编码氨基酸，还有完全不编码基酸的外显子，如人类G6PD基因的第一外显子核苷酸顺序。

已发现一个基因的外显子可以是另一基因的内含子，所这亦然。以小鼠的淀粉酶基因为例，来源于肝的与来源于唾液腺的是同一基因。淀粉酶基因包括4个外显子，肝生成的淀粉酶不保留外显子1，而唾液腺中的淀粉酶则保留了外显子1的50bp顺序，但把外显子2与前后两段内含子一起剪切掉，经过这样剪接，外显子2就变成唾液淀粉酶基因中的内含子。

同一基因在不同组织能生成不同的基因产物来源于不同组织的类似蛋白，可以由同一基因编码产生，这种现象首先是由于基因中的增强子等有组织特异性，它能与不同组织中的组织特异因子结合，故在不同组织中同一基因会产生不同的转录物与转录后加工作用。

此外真核生物基因可有一个以一的poly(A)位点，因此能在不同的细胞中产生具有不同3’末端的前mRNA，从而会有不同的剪接方式。由于大多数真核生物基因的转录物是先加poly(A)尾巴，然后再行剪接，因此不同组织、细胞中会有不同的因子干预多聚腺苷酸化作用，最后影响剪接模式。

B. 定性检测方法的灵敏度和特异性是什么意思

灵敏度：正确检出阳性患者的能力，也就是指在诊断疾病的时候对真正的病人不漏诊的机会有多大。灵敏度越高，假阴性越少。

特异性：正确检出阴性患者的能力，也就是指对一个健康人不造成误诊的机会有多大。特异性越高，假阳性越少。

临床灵敏度可用来衡量某种试验检测出有病者的能力，灵敏度是将实际有病的人正确地判定为真阳性的比例。

临床特异度是衡量试验正确地判定无病者的能力，特异度是将实际无病的人正确地判定为真阴性的比例。

(2)什么方法特异性检测扩展阅读；

灵敏度=真阳性人数/（真阳性人数+假阴性人数）*100%。正确判断病人的率。

特异度=真阴性人数/（真阴性人数+假阳性人数））*100%。正确判断非病人的率。

特异性就是检查发现dsDNA阳性，那他就是SLE患者的概率；敏感性就是检查dsDNA阴性，那他就不是SLE患者的概率。用来评估真阳性和真阴性的。

C. pcr的特异性检测和敏感性检测要怎么做

1. pcr灵敏度检测

   1.1 样本准备：以4次方国家一级或者二级标准品为基础样本，用阴性血清进行倍比稀释，稀释后的样本浓度分别为1000IU/ml、500IU/ml、250IU/ml、125IU/ml、100IU/ml、50IU/ml、25IU/ml，每份样本使用1000μl进行检测。

   1.2 用质检合格核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)进行检测，每个浓度每批次试剂盒做5个复管，分析各浓度标本的检出率（即阳性率）。以标本浓度值对数为横坐标，对应的检出率为纵坐标描点，用Origin的Sigmoidal Fit 的方法拟合成曲线，根据软件给出的曲线公式计算出当检出率为95%时所对应的浓度，此浓度即为本试剂盒对HBV标本的分析灵敏度。

2. pcr特异性检测

   2.1 参考样本选择：选择与目的片段相近或者感染方式相似的其他病毒或者细菌高载量样本，同时应满足临床或者其他方法确认目的片段为阴性，做5个副管扩增并且全部为阴性。以乙肝为例：选择高载量HCV、CMV、EBV、HSV2的阳性标本各1个（乙肝表面抗原为阴性）,分别检测乙肝表面抗原及乙肝核酸量。每个测5次，全部阴性或者在参考范围以下为特异性良好。

   希望能够帮到你，有其他需要可以随时交流！

D. 用什么方法检测细胞与组织内特异性蛋白

人类基因组(genome)含有3万-5万个可单拷贝的结构基因,但在一个细胞生长的特定条件下,往往只有少数基因表达.有些基因几乎普遍地在所有细胞活跃地处于表达状态,并保证其表达产物的功能.如多数酵解酶类蛋白,钙调节蛋白.此外,多数细胞均有其细胞骨架的特定组分,或产生特定代谢的酶.这些蛋白在各细胞中表现出它的组织特异性(tissue-speificprotein),当有关细胞损害过程中,它们在血循环中可以出现,可以反应该细胞的特异损害.这一事实被利用于监测某组织是否进行性损害的一种非损伤性的手段,并正在发展中. 有几种方法可以检测出特殊蛋白的组织特异性,如果该蛋白本身就是酶,可以直接测定酶的活性.例如肌酸激酶在骨骼肌中含量很高,但它们并不存在于肝内.血清中该酶的活性可以反应肌肉的损害,特别是骨骼肌的病变--肌萎缩症,或心肌损害.如果该蛋白并非具有酶活性,但可以表现一定的抗原性,可用于制备相应的抗体,用相应的免疫学方法来检测.新的组织特异性蛋白质也可以通过高分辨率的双相电泳色谱而定位,可以比较不同的组织,而检出特殊器官中特异性蛋白的存在. 一个真核细胞的胞质部分(往往指细胞在去除其亚细胞的结构组分--包括线粒体和内质网及核微粒等成分后,残留下的可溶性部分),往往尚含有20%-30%高浓度蛋白质溶液,各个蛋白质之间具有弱的相互作用

E. 艾滋病的检测都有哪些方法 5种方法测出你有没有艾滋

检测不出来的，必须说明是查艾滋的，才可以的

F. 山东已使用特异性核酸检测方法，这究竟是一种怎样的检测方法

山东省疾病预防控制中心对奥米克戎突变体采用了特异性核酸检测方法，并继续对可能的输入病例和相关本地病例进行病毒基因组监测，这有助于及时检测可能进口或与本地病例相关的Omicron突变体，它有一定的潜伏期和隐匿性感染。

与核酸检测相比，通常用于感染早期。与核酸检测相比，抗原检测速度更快，约12-20分钟即可获得初步结果。核酸检测至少需要3-4小时。从灵敏度的角度来看，核酸检测更准确。就像在家里用验孕棒检测怀孕一样，抗原检测可以在家里进行，也可以在偏远地区和条件差的基层医疗机构进行，这可以大大扩大核酸检测的范围酸检测服务。

G. 新型冠状病毒的特异性检测包括哪些

新冠病毒咽试子核酸检测，新冠病毒基因测序，肺泡灌洗液核酸检测等。很多新冠肺炎患者核酸检测几次为阴性，需多次检测可呈现阳性。患新冠肺炎要积极配合医生治疗，做好个人防护，减少病毒传播。注意监测病情变化，新冠肺炎容易发生病情恶化。