检测白蛋白的常规方法是

‘壹’ 常用的血清蛋白质含量测定方法有哪些

四种血清总蛋白质的测定的方法：

1.基于蛋白分子中含有酪氨酸和色氨酸而使用的酚试剂比色法 由于各种蛋白质分子中上述两种氨基酸的组成比例不同，特别是白蛋白含色氨酸为0.2%，而γ-球蛋白中含量达2%-3%，导致较大的差异。Lowry的改良法在酚试剂中加入Cu2+，集中原法和双缩脲反应两者的作用，使呈色灵敏度提高。其中75%的呈色依赖于Cu2+.反应产物最佳吸收峰在650-750nm，方法灵敏度为双缩脲方法的100倍左右。有利于检测较微量的蛋白质。但试剂反应仍易受多种化合物的干扰。

2.紫外测定法 采用280nm和215/225紫外吸收值，计算蛋白质含量280nm 是由于蛋白质分子中存在芳香族氨基酸所致。方法的特异性和准确性受蛋白分子中该种氨基酸的含量比例影响甚大。尿酸和肝红素在280nm附近有干扰。紫外区200-225nm是肽健的强吸收峰。在此区域其吸收值为280nm的10-30倍，将血清稀释1000-2000倍可以消除干扰物质的影响。

3.采用沉淀反应进行散射比浊法 用磺柳酸、三氯醋酸等配方，此方法甚为简便，不需特殊仪器，技术关键在于：①选择最佳试剂浓度及温度；②混匀技术；③选用的标准；④待测标本中的蛋白浓度。

4.染料结合法 蛋白质可与某些染料特异结合，如氨基黑（amino black）与考马亮蓝（comassive brilliant blue ）。这一性质除了可以用于电泳后的蛋白质区带染色，亦可用于总蛋白质的定量。缺点是多种蛋白质与染料的结合力不一致。考马亮蓝在与蛋白质结合后的吸收峰从465nm移向595nm，这一性质可用分光光度法来定量检测。

‘贰’ 尿微量白蛋白怎么检测

以前比较规范的做法是每半年检查一次24小时尿微量白蛋白，最近半年深圳人民医院的医生好像说现在认为查随机或者晨尿微量白蛋白就可以了？

‘叁’ 蛋白的常用蛋白鉴定方法

传统的蛋白鉴定方法，如免疫印迹法、内肽的化学测序、已知或未知蛋白comigration分析，或者在一个有机体中有意义的基因的过表达通常耗时、耗力，不适合高流通量的筛选。目前，所选用的技术包括对于蛋白鉴定的图象分析、微量测序、进一步对肽片段进行鉴定的氨基酸组分分析和与质谱相关的技术。 “满天星”式的2-DE图谱分析不能依靠本能的直觉，每一个图象上斑点的上调、下调及出现、消失，都可能在生理和病理状态下产生，必须依靠计算机为基础的数据处理，进行定量分析。在一系列高质量的2-DE凝胶产生(低背景染色，高度的重复性)的前提下，图象分析包括斑点检测、背景消减、斑点配比和数据库构建。
首先，采集图象通常所用的系统是电荷耦合CCD(charge coupled device)照相机;激光密度仪(laser densitometers)和Phospho或Fluoro imagers，对图象进行数字化。并成为以象素(pixels)为基础的空间和网格。
其次，在图象灰度水平上过滤和变形，进行图象加工，以进行斑点检测。利用Laplacian，Gaussian，DOG(difference of Gaussians) opreator使有意义的区域与背景分离，精确限定斑点的强度、面积、周长和方向。
图象分析检测的斑点须与肉眼观测的斑点一致。在这一原则下，多数系统以控制斑点的重心或最高峰来分析，边缘检测的软件可精确描述斑点外观，并进行边缘检测和邻近分析，以增加精确度。通过阈值分析、边缘检测、销蚀和扩大斑点检测的基本工具还可恢复共迁移的斑点边界。以PC机为基础的软件Phoretix-2D正挑战古老的Unix为基础的2-D分析软件包。
第三，一旦2-DE图象上的斑点被检测，许多图象需要分析比较、增加、消减或均值化。由于在2-DE中出现100%的重复性是很困难的，由此凝胶间的蛋白质的配比对于图象分析系统是一个挑战。IPG技术的出现已使斑点配比变得容易。因此，较大程度的相似性可通过斑点配比向量算法在长度和平行度观测。用来配比的着名软件系统包括Quest，Lips，Hermes，Gemini等，计算机方法如相似性、聚类分析、等级分类和主要因素分析已被采用，而神经网络、子波变换和实用分析在未来可被采用。配比通常由一个人操作，其手工设定大约50个突出的斑点作为“路标”，进行交叉配比。之后，扩展至整个胶。
例如：精确的PI和MW(分子量)的估计通过参考图上20个或更多的已知蛋白所组成的标准曲线来计算未知蛋白的PI和MW。 在凝胶图象分析系统依据已知蛋白质的pI值产生PI网络，使得凝胶上其它蛋白的PI按此分配。所估计的精确度大大依赖于所建网格的结构及标本的类型。已知的未被修饰的大蛋白应该作为标志，变性的修饰的蛋白的PI估计约在±0。25个单位。 同理，已知蛋白的理论分子量可以从数据库中计算，利用产生的表观分子量的网格来估计蛋白的分子量。 未被修饰的小蛋白的错误率大约30%，而翻译后蛋白的出入更大。 故需联合其他的技术完成鉴定。 蛋白质的微量测序已成为蛋白质分析和鉴定的基石，可以提供足够的信息。尽管氨基酸组分分析和肽质指纹谱(PMF)可鉴定由2-DE分离的蛋白，但最普通的N-末端Edman降解仍然是进行鉴定的主要技术。目前已实现蛋白质微量测序的自动化。 首先使经凝胶分离的蛋白质直接印迹在PVDF膜或玻璃纤维膜上，染色、切割，然后直接置于测序仪中，可用于subpicomole水平的蛋白质的鉴定。 但有几点需注意：Edman降解很缓慢，序列以每40 min 1个氨基酸的速率产生;与质谱相比，Edman降解消耗大;试剂昂贵，每个氨基酸花费3～4$。 这都说明泛化的Edman降解蛋白质不适合分析成百上千的蛋白质。然而，如果在一个凝胶上仅有几个有意义的蛋白质，或者如果其他技术无法测定而克隆其基因是必需的，则需要进行泛化的Edman降解测序。
近来，应用自动化的Edman降解可产生短的N-末端序列标签，这是将质谱的序列标签概念用于Edman降解，业已成为一种强有力的蛋白质鉴定。当对Edman的硬件进行简单改进，以迅速产生N-末端序列标签达10～20个/d，序列检签将适于在较小的蛋白质组中进行鉴定。若联合其他的蛋白质属性，如氨基酸组分分析、肽质质量、表现蛋白质分子量、等电点，可以更加可信地鉴定蛋白质。选择BLAST程序，可与数据库相配比。目前，采用一种Tagldent的检索程序，还可以进行种间比较鉴定，又提高了其在蛋白质组研究中的作用。 质谱已成为连接蛋白质与基因的重要技术，开启了大规模自动化的蛋白质鉴定之门。用来分析蛋白质或多肽的质谱有两个主要的部分，(1)样品入机的离子源，(2)测量被介入离子的分子量的装置。
首先是基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱(MALDI-TOF)为一脉冲式的离子化技术。它从固相标本中产生离子，并在飞行管中测其分子量。
其次是电喷雾质谱(ESI-MS)，是一连续离子化的方法，从液相中产生离子，联合四极质谱或在飞行时间检测器中测其分子量。
在MALDI-TOF中，最重要的进步是离子反射器(ion reflectron)和延迟提取(delayed ion extraction)，可达相当精确的分子量。在ESI-MS中，纳米级电雾源(nano-electrospray source)的出现使得微升级的样品在30～40 min内分析成为可能。
将反相液相色谱和串联质谱(tandem MS)联用，可在数十个picomole的水平检测;若利用毛细管色谱与串联质谱联用，则可在低picomole到高femtomole水平检测;当利用毛细管电泳与串联质谱连用时，可在小于femtomole的水平检测。甚至可在attomole水平进行。目前多为酶解、液相色谱分离、串联质谱及计算机算法的联合应用鉴定蛋白质。下面以肽质指纹术和肽片段的测序来说明怎样通过质谱来鉴定蛋白质。
(1)肽质指纹术
由Henzel等人于1993年提出。用酶(最常用的是胰酶)对由2-DE分离的蛋白在胶上或在膜上于精氨酸或赖氨酸的C-末端处进行断裂，断裂所产生的精确的分子量通过质谱来测量(MALDI-TOF-MS，或为ESI-MS)，这一技术能够完成的肽质量可精确到0。1个分子量单位。所有的肽质量最后与数据库中理论肽质量相配比(理论肽是由实验所用的酶来“断裂”蛋白所产生的)。配比的结果是按照数据库中肽片段与未知蛋白共有的肽片段数目作一排行榜，“冠军”肽片段可能代表一个未知蛋白。若冠亚军之间的肽片段存在较大差异，且这个蛋白可与实验所示的肽片段覆盖良好，则说明正确鉴定的可能性较大。
(2)肽片段的部分测序
肽质指纹术对其自身而言，不能揭示所衍生的肽片段或蛋白质。为进一步鉴定蛋白质，出现了一系列的质谱方法用来描述肽片段。用酶或化学方法从N-或C-末端按顺序除去氨基酸，形成梯形肽片段(ladder peptide)。
首先以一种可控制的化学模式从N-末端降解，可产生大小不同的一系列的梯形肽片段，所得一定数目的肽质量由MALDI-TOF-MS测量。另一种方法涉及羧基肽酶的应用，从C-末端除去不同数目的氨基酸形成肽片段。化学法和酶法可产生相对较长的序列，其分子量精确至以区别赖氨酸和谷氨酰胺。或者，在质谱仪内应用源后衰变(post-source decay，PSD)和碰撞诱导解离(collision-inced dissociation，CID)，目的是产生包含有仅异于一个氨基酸残基质量的一系列肽峰的质谱。因此，允许推断肽片段序列。 肽片段PSD的分析在MALDI反应器上能产生部分序列信息。首先进行肽质指纹鉴定。 之后，一个有意义的肽片段在实验仪器质谱仪被选作“母离子”，在飞行至离子反应器的过程中降解为“子离子”。在反应器中，用逐渐降低的电压可测量至检测器的不同大小的片段。但经常产生不完全的片段。现在用肽片段来测序的方法始于70年代末的CID，可以一个三联四极质谱ESI-MS或MALDI-TOF-MS联合碰撞器内来完成。在ESI-MS中，由电雾源产生的肽离子在质谱仪的第一个四极质谱中测量，有意义的肽片段被送至第二个四极质谱中，惰性气体轰击使其成为碎片，所得产物在第三个四极质谱中测量。与MALDI-PSD相比，CID稳定、强健、普遍，肽离子片段基本沿着酰胺键的主架被轰击产生梯形序列。 连续的片段间差异决定此序列在那一点的氨基酸的质量。由此，序列可被推测。由CID图谱还可获得的几个序列的残基，叫做“肽序列标签”。这样，联合肽片段母离子的分子量和肽片段距N- C端的距离将足以鉴定一个蛋白质。 1977年首次作为鉴定蛋白质的一种工具，是一种独特的“脚印”技术。利用蛋白质异质性的氨基酸组分特征，成为一种独立于序列的属性，不同于肽质量或序列标签。Latter首次表明氨基酸组分的数据能用于从2-DE凝胶上鉴定蛋白质。 通过放射标记的氨基酸来测定蛋白质的组分，或者将蛋白质印迹到PVDF膜上，在155℃进行酸性水解1 h，通过这一简单步骤的氨基酸的提取，每一样品的氨基酸在40min内自动衍生并由色谱分离，常规分析为100个蛋白质/周。依据代表两组分间数目差异的分数，对数据库中的蛋白质进行排榜，“冠军”蛋白质具有与未知蛋白质最相近的组分，考虑冠亚军蛋白质分数之间的差异，仅处于冠军的蛋白质的可信度大。Internet上存在多个程序可用于氨基酸组分分析，如AACompIdent，ASA，FINDER，AAC-PI，PROP-SEARCH等，其中，在PROP-SEARCH中，组分、序列和氨基酸的位置被用来检索同源蛋白质。 但仍存在一些缺点，如由于不足的酸性水解或者部分降解会产生氨基酸的变异。故应联合其他的蛋白质属性进行鉴定。

‘肆’ 尿微量白蛋白的尿微量检测

尿微量白蛋白指高于正常，但常规方法无法检出的白蛋白尿，他的检测作为早期肾损害诊断的重要指标已受到广泛重视，测定方法包括放射免疫法、ELASA法等。应用较多的是免疫透射比浊法，但报告方式不一，有的以每升尿中白蛋白量表示，有的以24小时排泄量表示，常用的报告方式是以白蛋白/肌酐比值报告。我们以不同表示方法对正常人尿白蛋白的正常值进行了统计分析，并对部分高血压、糖尿病患者进行测定，现报告如下。 1.仪器与方法：尿微量白蛋白测定试剂盒，肌酐测定试剂盒均购于凯创公司。仪器应用瑞士产Cobas MIRA plus全自动生化分析仪。尿白蛋白测定，取标本10 ml，1 500×g离心10分钟，取上清10 μl，加缓冲液250 μl，抗血清50 μl，测定波长340 nm，反应温度37℃，测定时限300秒，5点定标，范围5～200 mg/L。肌酐采用Jaffe′s法，尿标本预先用生理盐水30倍稀释测定。
2.对象：对照组，健康人70例(男43例，女27例)，平均年龄41.2岁(21～54岁)，均排除高血压、糖尿病及其他和肾病有关病史。糖尿病组，42例(男28例，女14例)，平均年龄51.2岁(34～72岁)，病程2～20年。高血压组，62例(男39例，女23例)，平均年龄44.5岁(31～71岁)，血压范围160～190/95～120 mmHg，病程2～27年。临床诊断Ⅰ期21例，Ⅱ期41例，其中Ⅱ期患者以眼底动脉硬化或心脏改变为诊断依据，尿常规分析蛋白定性均为阴性。
3.标本：对照组均分别留取24小时尿和随机尿，测定24小时白蛋白和每升白蛋白及白蛋白/肌酐比值，并以不同方法计算正常值，患者组均取随机尿测定白蛋白及肌酐，以白蛋白/肌酐比值报告，以上标本均当日测定。 1.不同计算方法尿白蛋白正常值：以mg/L计算，范围2.2～41.7，均值12.7；以mg/gCr计算，范围2.7～26.1，均值8.1；以mg/24 h计算，范围2.4～34.3，均值11.4。因尿白蛋白值呈非正态分布，低值无临床意义，在建立参考范围时以百分位数法按单侧值95%上限确定。从以上结果可见，不同计算方法的结果正常值范围有明显差异，尤以每升结果报告时，由于受尿量影响较大，正常范围较宽，这样易使部分异常标本落入正常范围而延误诊断。
2.高血压组：诊断Ⅰ期、Ⅱ期高血压的标准是以是否累及血管、脏器为依据，我们测定的41例Ⅱ期患者中，常规尿蛋白定性均未发现肾脏损害，诊断是以眼底改变和心电图改变为主。我们将测定结果依据高血压病期、病程、舒张压水平分组进行统计，结果。Ⅰ期21例，范围4.6～38.2 mg/gCr，均值17.8 mg/gCr；Ⅱ期41例，范围5.1～62 mg/gCr，均值29.7 mg/gCr；舒张压95～105 mmHg 34例，范围4.6～43.4 mg/gCr，均值16.4 mg/gCr；舒张压106～120 mmHg 28例，范围5.0～62 mg/gCr，均值31.2 mg/gCr；病程2～10年19例，4.6～40.2 mg/gCr，均值13.1 mg/gCr；病程11～15年，28例，范围4.6～54.2 mg/gCr，均值19.3 mg/gCr；病程16～27年，15例，范围5.1～62 mg/gCr，均值37.2 mg/gCr。上述结果中以正常值? mg/gCr为界，Ⅰ期高血压中有4例超过正常值，Ⅱ期高血压中有14例超过正常值，说明这些患者已有轻度肾损害。尤其1期高血压中有五分之一患者出现尿白蛋白异常，尿白蛋白的值与病程及血压水平相关。
3.糖尿病组：42例糖尿病患者按病程分组，2～10年28例，尿白蛋白为5.2～39.6 mg/gCr，均值21.2 mg/gCr，大于25 mg/gCr 13例；11年以上组14例，结果为10.4～68.
1 mg/gCr，均值29.4 mg/gCr，大于25 mg/gCr 8例。通过了解病史并分析结果，坚持长期口服药物或注射胰岛素治疗者与不经常治疗两者结果间有明显差异(P?.01)。
测定尿微量白蛋白最理想的方法是留取24小时标本，但因留取困难，在实际应用上受到限制。随机尿测定是目前最常用，最易行的方法。但应同时测定肌酐，因每日肌酐排除量相对恒定，可避免尿量变化对结果的影响。
尿微量白蛋白测定是一种灵敏、简便、快速的测定方法，易于在常规实验室中广泛应用，对早期肾损害的诊断远远优于常规定性或半定量试验。

‘伍’ 血清白蛋白的测定方法

血清清蛋白测定一般采用溴甲酚绿比色法，目前首选推荐的清蛋白定量方法

‘陆’ 血清白蛋白检测的英文资料

血清白蛋白检测 serum albumin detection

Serum albumin, often referred to simply as albumin, is the most abundant plasma protein in humans and other mammals. Albumin is essential for maintaining the osmotic pressure needed for proper distribution of body fluids between intravascular compartments and body tissues. It also acts as a plasma carrier by non-specifically binding several hydrophobic steroid hormones and as a transport protein for hemin and fatty acids.

Types
The human version is human serum albumin.
Bovine serum albumin, or BSA, is commonly used in immunodiagnostic proceres, clinical chemistry reagents, cell culture media, protein chemistry research and molecular biology laboratories (usually to leverage its non-specific protein binding properties).

[edit] General characteristics
Albumin (when ionized in water at pH 7.4, as found in the body) is negatively charged. The glomerular basement membrane is also negatively charged in the body; some studies suggest that this prevents the filtration of albumin in the urine. According to this theory, that charge plays a major role in the selective exclusion of albumin from the glomerular filtrate. A defect in this property results in nephrotic syndrome leading to albumin loss in the urine. Nephrotic syndrome patients are sometimes given albumin to replace the lost albumin.

Because smaller animals (for example rats) function at a lower blood pressure, they need less oncotic pressure to balance this, and thus need less albumin to maintain proper fluid distribution.

Serum albumin contains eleven distinct binding domains for hydrophobic compounds. One hemin and six long-chain fatty acids can bind to serum albumin at the same time

Human serum albumin is the most abundant protein in human blood plasma. It is proced in the liver. Albumin comprises about half of the blood serum protein. It is soluble and monomeric.

The gene for albumin is located on chromosome 4 and mutations in this gene can result in various anomalous proteins. The human albumin gene is 16,961 nucleotides long from the putative 'cap' site to the first poly(A) addition site. It is split into 15 exons which are symmetrically placed within the 3 domains that are thought to have arisen by triplication of a single primordial domain.

Albumin is synthesized in the liver as preproalbumin which has an N-terminal peptide that is removed before the nascent protein is released from the rough endoplasmic reticulum. The proct, proalbumin, is in turn cleaved in the Golgi vesicles to proce the secreted albumin.

The reference range for albumin concentrations in blood is 30 to 50 g/L. It has a serum half-life of approximately 20 days. It has a molecular mass of 67 kDa.

Functions of albumin
Maintains oncotic pressure
Transports thyroid hormones
Transports other hormones, particularly fat soluble ones
Transports fatty acids ("free" fatty acids) to the liver
Transports unconjugated bilirubin
Transports many drugs, and serum albumin levels can affect the half-life of drugs.
Competitively binds calcium ions (Ca2+)
Buffers pH

[edit] Pathology

[edit] Hypoalbuminemia
Low blood albumin levels (hypoalbuminemia) can be caused by:

liver disease / Cirrhosis of the liver (most commonly)
Decreased proction (as in starvation/malnutrition/malabsorption)
Excess excretion by the kidneys (as in nephrotic syndrome)
Excess loss in bowel (protein losing enteropathy e.g. Menetrier's)
Burns (Plasma loss in the absence of skin barrier)
Redistribution (hemodilution [as in Pregnancy], increased vascular permeability or decreased lymphatic clearance)
Acute disease states (referred to as a negative acute phase protein)
Mutation causing analbuminemia (very rare)

[edit] Hyperalbuminemia
Typically is a sign of severe dehydration.

[edit] Glycation (Glycosylation) of Serum Albumin
It has been known for a long time that human blood proteins like hemoglobin [1] and serum albumin [2][3] may undergo a slow non-enzymatic glycation, mainly by formation of a Schiff base between ε-amino groups of lysine (and sometimes arginine) resies and glucose molecules in blood (Maillard reaction). This reaction can be inhibited in the presence of antioxidant agents [4]. Although this reaction may happen normally [5] , elevated glycoalbumin is observed in diabetes mellitus [6].

Glycation has the potential to alter the biological structure and function of the serum albumin protein [7][8][9][10]. Moreover, the glycation finally can result in the formation of Advanced Glycosylation End Procts (AGE), which result in abnormal biological effects. Accumulation of AGEs leads to tissue damage via alteration of the structures and functions of tissue proteins, stimulation of cellular responses, through receptors specific for AGE-proteins, and via generation of reactive oxygen intermediates. AGEs also react with DNA, thus causing mutations and DNA transposition. Thermal processing of proteins and carbohydrates brings major changes in allergenicity. AGEs are antigenic and represent many of the important neoantigens found in cooked or stored foods [11]. They also interfere with the normal proct of nitric oxide in cells [12].

Although there are several lysine and arginine resies in the serum albumin structure, very few of them can take part in the glycation reaction [13][14]. It is not clear exactly why only these resies are glycated in serum albumin [15].

[edit] Testing for albumin loss via the kidneys
In the healthy kidney, albumin's size and negative electric charge exclude it from excretion in the glomerulus. This is not always the case, as in some diseases including diabetic nephropathy, a major complication of uncontrolled diabetes where proteins can cross the glomerulus. The lost albumin can be detected by a simple urine test.[16] Depending on the amount of albumin lost, a patient may have normal renal function, microalbuminuria, or albuminuria.

[edit] Amino Acid Sequence
The approximate sequence of human serum albumin is:

MKWVTFISLL FLFSSAYSRG VFRRDAHKSE VAHRFKDLGE ENFKALVLIA FAQYLQQCPF EDHVKLVNEV TEFAKTCVAD ESAENCDKSL HTLFGDKLCT VATLRETYGE MADCCAKQEP ERNECFLQHK DDNPNLPRLV RPEVDVMCTA FHDNEETFLK KYLYEIARRH PYFYAPELLF FAKRYKAAFT ECCQAADKAA CLLPKLDELR DEGKASSAKQ RLKCASLQKF GERAFKAWAV ARLSQRFPKA EFAEVSKLVT DLTKVHTECC HGDLLECADD RADLAKYICE NQDSISSKLK ECCEKPLLEK SHCIAEVEND EMPADLPSLA ADFVESKDVC KNYAEAKDVF LGMFLYEYAR RHPDYSVVLL LRLAKTYETT LEKCCAAADP HECYAKVFDE FKPLVEEPQN LIKQNCELFE QLGEYKFQNA LLVRYTKKVP QVSTPTLVEV SRNLGKVGSK CCKHPEAKRM PCAEDYLSVV LNQLCVLHEK TPVSDRVTKC CTESLVNRRP CFSALEVDET YVPKEFNAET FTFHADICTL SEKERQIKKQ TALVELVKHK PKATKEQLKA VMDDFAAFVE KCCKADDKET CFAEEGKKLV AASQAALGL

Where the italicized first 24 amino acids are signal and propeptide portions not observed in the transcribed, translated and transported protein but present in the gene. There are 609 amino acids in this sequence with only 585 amino acids in the final proct observed in the blood.

‘柒’ 如何选择合适的蛋白含量测定方法

选择一种蛋白测定方法时，需要考虑两个重要因素：缓冲液的化学组成和检测的蛋白量。基于dford方法的Quick Start Bradford和Bio–Rad 蛋白测定灵敏度高，可以兼容糖、巯基乙醇、DTT等。而对于去污剂和NaOH这两种干扰Bradford测定的物质，DC蛋白测定却可以兼容。

如果蛋白是在loading buffer中，准备跑1D或2D电泳，或者刚从细胞裂解液中抽提出来，需要定量，那么RC DC蛋白测定更合适。

(7)检测白蛋白的常规方法是扩展阅读：

常见测试方法：

Quick Start Bradford蛋白测定是一种简单、精确的蛋白浓度定量方法。现成的1倍浓度染料和7 个预稀释浓度(0.125、0.25、0.5、 0.75、1.0、1.5、2.0 mg/ml)的蛋白标准品，让你拥有现成的检测工具。无需稀释标准品和染料，一步完成蛋白浓度定量。

Bio–Rad 蛋白测定也是一种简单的蛋白浓度测定方法。该方法适应标准浓度测定、低浓度微量测定，或96孔微孔板的快速测定。它的基本原理和流程和上面的Quick Start Bradford都是一样的，不过要麻烦一点点。因为除了要稀释蛋白标准品，配成几个不同浓度之外，还要稀释染料，再过滤除去不溶颗粒。

Quick Start Bradford 和Bio–Rad 蛋白测定方法的起源都是Bradford染料结合方法 (Bradford 1976)，该方法检测考马斯亮蓝G–250染料与蛋白结合时(主要结合碱性或芳香族氨基酸残基)的颜色变化。这种测定方法能定量多数蛋白或多肽(分子量> 3,000–5,000 Da)，操作简单、速度快，灵敏度高，与一些还原剂(如DTT、巯基乙醇)兼容。

DC (Detergent Compatible) 蛋白测定是一种适用于含有去垢剂的蛋白样品比色测定方法。该方法类似于常规的Lowry 测定方法 (Lowry et al.1951)，但经过改良，节省了操作时间。DC 蛋白测定只需要15分钟的温育过程，而且吸光值读数能保持2小时的稳定。

RC DC (Recing agent Compatible & Detergent Compatible) 蛋白测定是一种适用于含还原剂和去垢剂的蛋白样品比色测定方法。

以 Lowry 方法(Lowry et al.1951)为基础的 RC DC 蛋白测定，具有原来DC蛋白测定的特点，并能与更多的试剂兼容，简化了复杂蛋白样品溶液的定量测定。吸光值至少稳定1小时。

除了与DC 蛋白测定兼容的试剂外，RC DC 蛋白测定还与以下试剂和缓冲液兼容：2% CHAPS、350 mM DTT、0.1MEDTA、Laemmli 缓冲液、10% beta-巯基乙醇、ReadyPrep 抽提试剂等。

‘捌’ 测定血清总蛋白的参考方法是

总蛋白的六种检测方法
（一）凯氏定氮法
将血清与强酸一起加热消化，使血清中的含氮化合物转化为铵盐，再加碱使铵盐成为氨进经蒸馏分离出来，最后用酸滴定测定氮量，按每克氨相当于6.25g蛋白质计算蛋白质的浓度。
应用历史较久，结果较准确，是蛋白质测定的参考方法，但操作复杂，影响因素较多，且不少蛋白质的含氮量并非16%，不适用于日常工作，目前多用于标准蛋白的标定及校正其它的常规方法。
（二）双缩脲法
蛋白质中的肽键（-CONH-）在碱性条件下与Cu2+络合成紫红色复合物，产生的颜色强度在一定范围内与蛋白质含量成正比。
此反应和二分子尿素缩合后的产物双缩脲（H2N-CO-NH-CO-NH2）与碱性铜溶液作用形成紫红色的反应相似，故称为双缩脲反应。几分子中含有两个甲酰胺基(-CO-NH2)的化合物都能出现此反应。
因至少含2个-CONH-基团才能与Cu2+络合，所以氨基酸和二肽无此反应。体液中小分子肽含量极低，故血浆中除蛋白质外几乎不存在可与双缩脲试剂显色的物质，且各种蛋白质显色程度基本相同。
此法简便、准确、重复性好，在10-120g／L。浓度范围内呈良好的线性关系，批内CV值<2％，但灵敏度较其它方法稍差，是目前临床上最常规的方法。
（三）酚试剂法
蛋白质分子中的酪氨酸残基和色氨酸残基能够和酚试剂中的磷钨酸-磷钼酸反应生成蓝色化合物。Lowry改良法在酚试剂中加入Cu2+，提高了呈色的灵敏度，其中75％呈色靠铜离子产生。Lowry改良法的灵敏度为双缩脲法的100倍左右。
由于各种蛋白质中酪氨酸和色氨酸的比例不同，如白蛋白含色氨酸为0.2％，而在一些球蛋白中色氨酸含量高达2％~3％，因此使用本法测定纯粹的、单一的蛋白质较合适。此法灵敏度较高，为10~60ug／ml，因而适用于测定蛋白质含量较少的标本(如脑脊液)，但试剂反应易受还原性化合物糖类、酚类及多种药物如水杨酸、氯丙嗪和某些磺胺药的干扰。
（四）紫外分光光度法
蛋白质分子内的色氨酸、酪氨酸等芳香族氨基酸可使蛋白质溶液在280nm波长处有一吸收峰，依此性质可用于蛋白质定量。
由于各种蛋白质中芳香族氨基酸的含量和比例不同，血清中游离的酪氨酸和色氨酸在280nm处也有吸收，因尿酸和胆红素在280nm处也有干扰，因而本法的准确性和特异性都受到很大的影响。
此法敏感而且简便，由于制剂未经任何处理，蛋白质的生物活性得以保留，故常用于较纯的酶和免疫球蛋白的测定。但此法需紫外分光光度计和石英比色杯。
（五）染料结合法
在酸性环境中，蛋白质分子解离出的-NH3+，可与染料的阴离子产生颜色反应。常用的染料有氨基黑、考马斯亮蓝等。这一性质可用于电泳后蛋白质的染色和血清总蛋白测定。
此法操作简便、重复性好、灵敏度高、且干扰因素较少。缺点是特异性不高，分子量3 000以上的多肽也参与反应。另外，不同蛋白质和染料的结合力不一致，因此很难找到一种合适的物质作标准物，使此方法的应用受到限制。
（六）比浊法
用某些酸类(如二氯醋酸、磺基水杨酸等)和血清蛋白质结合产生沉淀，然后测定其浊度，与同样处理的蛋白标准液比较，即可求得蛋白质含量。
此方法简便，不需特殊仪器。缺点是浊度形成的强弱易受多种因素影响，如加入试剂的方法、反应时的温度等。另外，蛋白质沉淀时易形成絮状物，难以获得稳定的悬浮液

‘玖’ 尿常规中的蛋白质检查用的是什么方法

医院一般用八联试纸---机器读取数据
蛋白多的话，是用24小时尿蛋白定量做细化的检测---
在家自己可以用尿蛋白试纸，2.5元可以测20次，也可以自己烧尿，滴醋观察浑浊情况---