A. 内毒素的检测方法和原理
本法系利用鲎试剂来检测或量化由革兰氏阴性菌产生的细菌内毒素 以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法
细菌内毒素检查包括浊度法和显色基质法 供试品检测时 可使用其中任何一种方法进行试验 当测定结果有争议的时候 除另有规定外 以凝胶法结果为准
本实验操作过程硬防止微生物和内毒素的污染
凝胶法鲎试剂原理 鲎试剂为鲎科动物东方鲎变形细胞溶解物的冷冻干燥品 内含能被微量细菌内毒素激活的凝胶酶原和凝固蛋白源 在适宜的条件下（温度、pH值及无干扰物质）细菌内毒素能激活鲎试剂中的凝固酶原 使鲎试剂产生凝集反应形成凝胶 凝胶法鲎试剂是根据凝集反应所形成凝胶的坚实程度来限量检测细菌内毒素
B. 细菌内毒素国家药典是怎么检测的
10版国家药典
检测内毒素可以用凝胶法
凝胶法是通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理来检测或半定量内毒素的方法。
鲎试剂灵敏度复核试验
在本检查法规定的条件下，使鲎试剂产生凝集的内毒素的最低浓度即为鲎试剂的标示灵敏度，用EU/ml表示。当使用新批号的鲎试剂或试验条件发生了任何可能影响检验结果的改变时，应进行鲎试剂灵敏度复核试验。
以上摘自2010版中国药典《细菌内毒素检查法》
C. 细菌内毒素中什么是定量法
目前,国内外广泛应用且检测技术比较成熟的细菌内毒素定量检查法主要有以下四种。
1. 1凝胶法是目前最常用的细菌内毒素检查法。即在10mm×75mm的小试管内,加入待检样品和鲎试剂各0. 1ml混合, 37℃、60 min保温反应后, 180°倒转,根据凝胶形成的情况(凝胶是否坚实)作为判定指标的一种半定量法。此法操作简单,经济而且不需要专用仪器。凝胶法既可限量检测内毒素,也可在0. 03 EU•ml-1以上进行半定量测定。
1. 2显色基质法(合成基质法、显色合成基质法, Chromoge-nic Technique)系根据细菌内毒素与LAL(或TAL)试剂中的C系反应所激活的凝固酶,使用人工合成的鲎三肽(即与PNA相连的显色基质如BOC-LEU-GLY-ARG-PNA等)作为显色基质,水解鲎三肽中的精氨酸肽链,通过测量反应液中释放出游离的对硝基苯胺(PNA)的吸光值而进行定量的一种检测方法。该法需要专用仪器。目前主要用于微量血浆、血清、全血、骨髓液及尿、乳汁等的临床检验以及家禽、实验动物、人工脏器的安全性评估等方面。根据测定原理的不同分为终点显色法和动态显色法。
1.2.1终点显色法(EndopointColorimetric Assay)系根据在一定时间内游离出的PNA的量与细菌内毒素浓度成正比例关系进行测定的一种分析方法。PNA(黄色)的吸光度值可使用单波长405 nm或双波长(测定波长405 nm、参照波长492 nm)测量,或利用游离的PNA与红色偶氮试剂发生反应所形成的红色偶氮蓝复合物在545nm单波长或双波长(测定波长545 nm、参照波长630 nm)进行检测。一般可在0. 006~15 EU/ml范围内进行定量。
1.2.2动态显色法(Kinetic Colorimetric Assay)系根据游离的PNA的吸光度变化率(mAbs/min)与细菌内毒素浓度成正比例关系(比色反应速度法Pate Assay)或到达事先设定的反应吸光度变化值所需要的时间Ta的对数值与细菌内毒素浓度的对数值成反比例关系(比色反应时间法OD-Time As-say)进行测定的一种分析方法。一般可在0. 006~50 EU/ml范围内进行定量。
1. 3酶联免疫测定法(ELISA法)基于抗原抗体的酶联免疫测定法,目前在国外应用十分普遍。主要由外加热原质刺激巨嗜细胞后产生的内热原物质(如TNF, TL-1等),而进行的定量测定方法。体外人全血热原检测方法是近年来国内外正在兴起的一种研究热原检测的新方法,具有检测范围广,灵敏度高,不同个体血液的结果差异小等优点[2, 3]。国内一些学者,已采用酶联免疫测定法对体外人全血热原检测方法的可行性进行研究和优化,取得了可喜的进展[4]。1. 4浊度法(Turbidim etrc Technique)系微量的内毒素与TAL(LAL)试剂中的C因子发生反应,由内毒素引发激活的凝固酶,切断凝固蛋白特定位置的精氨酸肽键,形成凝固蛋白从而产生凝胶过程中的浊度变化,采用适当的光学仪器测量的一种分析方法。此法操作比较简单、经济、灵敏度高,检测范围广。通常在0. 006~300 EU/ml的范围内进行定量,但需要专用仪器。根据测定原理的不同又可分为终点浊度法和动态浊度法。
1.4.1终点浊度法(EndopintTurbidimetric Technique)即根据到达规定点上反应液的最终浊度值(吸光度或透过光亮值)与细菌内毒素浓度成正比例或反比例的关系而进行测量的一种检测方法。由于未形成标准化,目前国内外都很少使用,也未见有专门仪器使用。
1.4.2动态浊度法(Kinetic Turbidimetric Technique)即根据测定到达事先设定反应液的浊度变化(吸光度变化)值所需要的时间(Ta比浊反应法)或浊度变化(透过光量比)值所需要的时间(Tg:比浊时间分析法)的对数值与细菌内毒素浓度的对数值成反比例关系或浊度的(吸光度值)每分钟变化(吸光度变化mAbs/min)与细菌内毒素浓度成正比例关系(比浊反应速度法)而进行测量的一种分析方法。通常,浊度法一般是指动态浊度法,而且在日、美、欧等国有专用仪器,并通过美国FDA认可,其中作为动态比浊仪一般要求为:恒温槽(37±1℃)、光源、检测器及内置数据分析等。其中检测波长从80~660 nm,主要根据仪器的不同而各异,检测时间为60~90 min之间。由于国内对细菌内毒素定量检查法的研究起步较晚,专门用于定量的高灵敏度TAL(最低检测限是0. 006EU/ml)还未研制开发出来,还受细菌内毒素检查用水(内毒素的含量小于0. 005 EU/ml)、内毒素标准品质量不高等因素的制约,对仪器定量法研究较多且检测技术较为成熟的就是动态浊度法。本法收载于2000年版《中国药典》二部附录中,在2005年版《中国药典》二部附录中,将浊度法和显色基质法修订为光度测定法,作为测定内毒素含量的方法。
D. 求助：注射用水的细菌内毒素检查方法
《中国药典》规定注射用水细菌内毒素限值为：0.25EU/ml
因注射用水无干扰成分存在，可以不用稀释直接检测，最简便的方法是采用灵敏度0.25EU/ml的鲎试剂（TAL））直接检查。
即 取8支灵敏度为0.25EU/ml的TAL，每支加0.1ml细菌内毒素检查用水（BET水）复溶，再分别制样品管2支（直接加入1ml注射用水）；阴性对照管2支；阳性对照管2支；PPC管2支，按药典规定操作。
加果采用 灵敏度0.125EU/ml的鲎试剂 ，就要用BET水稀释一倍后再进行实验。
E. 内毒素检测原理是什么
内毒素测定方法有：
凝胶法
动态浊度法
终点浊度法
动态显色法
终点显色法
凝胶法系通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理来定性检测或半定量内毒素的方法。凝胶法鲎试剂常见规格为0.1ml/支或0.5ml/支或者更大装量，使用时应加除热原水（细菌内毒素检查用水）复溶后使用。凝胶法是通过观察有无凝胶形成作为反应的终点。此法操作比较简单，经济，不需要专用测定设备，可以进行定性或半定量测定。
动态浊度法、终点浊度法、动态显色法、终点显色法，这四种方法都是定量检测内毒素的。
根据检测原理，终点浊度法和动态浊度法都属于浊度法。浊度法系利用检测鲎试剂与内毒素反应过程中的浊度变化而测定内毒素含量的方法。终点浊度法未见商品化产品。动态浊度法（又称动态比浊法）是检测反应混合物的浊度上升某一预先设定的吸光度所需要的反应时间，或是检测浊度增加速度的方法。
终点显色法和动态显色法都是属于显色基质法。显色基质法系利用鲎试剂与内毒素反应过程中产生的凝固酶使特定底物显色释放出的呈色团的多少而测定内毒素含量的方法，根据产物颜色判断内毒素浓度，又称为比色法。厦门鲎试剂厂于2005年推出以鲎四肽为显色底物的鲎试剂盒，抗干扰能力强,
灵敏度高达0.005eu/ml,
质量达到国际领先水平。目前已有500多家单位使用该试剂盒，并有部分单位发表相应文献。国内有少量国外产品，但价格远高于国产试剂，到货周期长。
如果您仅需要检测样品的内毒素限量，可以选择凝胶法鲎试剂，通过确定内毒素限值及最大有效稀释倍数，做样品的干扰试验从而确定使用的鲎试剂的灵敏度。
如果您需要定量测定样品中内毒素含量则应选择显色基质鲎试剂盒或动态浊度法鲎试剂。
动态浊度法与动态显色法需要带温育系统的动态光度测定仪器及配套软件，例如，微板鲎试仪elx808及软件talgent
或gen5。动态浊度法与动态显色法简单方便、一步即成，线性范围宽。
终点显色法需要配套酶标仪或可见分光光度计进行检测。配套带有温育系统的酶标仪，如微板鲎试仪elx808，可减少试剂用量。