❶ 生物:蛋白质,糖类,脂肪,核酸各用什么试剂检查有什么颜色反应
蛋白质用双缩尿试剂会发生紫色反应
糖类用斐林试剂反应会生成砖红色的沉淀
脂肪用苏丹三苏丹四溶液,苏丹三+脂肪变成橘黄色,苏丹四+脂肪变成红色
核酸提取采用磁珠法。
望采纳,谢谢
❷ 核酸和蛋白质序列分析的内容和方法有哪些
核酸和蛋白质序列分析的内容和方法有哪些
蛋白质结构分析方法:X射线晶体衍射分析和核磁共振
x 射线衍射法的分辨率可达到原子的水平,使它可以测定亚基的空间结构、各亚基间的相对拓扑布局,还可清楚的描述配体存在与否对蛋白质的影响。多维核磁共振波谱技术已成为确定蛋白质和核酸等生物分子溶液三维结构的唯一有效手段。NM R技术最大的优点不在于它的分辨率,而在于它能对溶液中和非晶态的蛋白质进行测量。
蛋白质的序列结构测定:
1.到目前为止,最经典的蛋白质的氨基酸序列分析方法是,sarI等人基于Edman降解原理研制的液相蛋白质序列仪,及后来发展的固相和气相的蛋白质序列分析仪。
2.质谱:早期的质谱电离的方式主要是电子轰击电离(EI),它要求样品的挥发性好,一般与
气相色谱联用。但使用G C/M S分析,肽的长度受到限制,只能分析小的肽段。近年来,
在离子化的技术及仪器方面取得了突破性进展,使得质谱所能测定的分子量的范围大大超
出了10k u。因此,软离子化技术、基质辅助的激光解吸/离子化(MALDI)和电喷雾离子化(E SI)显得尤为有前途。通过串联质谱技术(MS/MS)和源后衰减基质辅助的激光解吸/离子化(PSD—MAIDI—MS),人们就可以从质谱分析中获得肽及蛋白质的结构信息。
❸ 如何检测dna,rna及蛋白质
1.rna在细胞核处由dna转录形成,不是双螺旋,是单链
2.腺嘌呤
尿嘧啶
鸟嘌呤
胞嘧啶
dna中没有尿嘧啶有胸腺嘧啶,rna的组成是核糖核酸,区别是其中的五碳糖是不脱氧的
3.rna有mrna,作用是传递密码子,trna,作用是运载氨基酸,rrna,作用是参与形成核糖体
4.dna在dna解旋酶的作用下开始解旋,然后游离的核糖核苷酸与dna的模板链根据碱基互补配对原则合成mrna,该rna从细胞核中释放,到细胞质中
,与核糖体和trna合成蛋白质
5这个我没有研究过
❹ 核酸含量的测定方法及原理都有哪些
核酸定量常用方法及原理如下:
1、光吸收法:核酸中碱基共轭结构在近紫外光波长260nm处有最大吸收,吸收强度与核酸浓度成正比,因此可以用于核酸定量。
2、定P法:核酸中P含量约为9.5%,因此可以通过测定样品中的有机P量来进行核酸定量。
核酸是由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物,为生命的最基本物质之一。
核酸广泛存在于所有动植物细胞、微生物体内,生物体内的核酸常与蛋白质结合形成核蛋白。不同的核酸,其化学组成、核苷酸排列顺序等不同。根据化学组成不同,核酸可分为核糖核酸(简称RNA)和脱氧核糖核酸(简称DNA)。
❺ 常用的蛋白质含量测定方法有哪些
①凯氏定氮法
原理:蛋白质平均含氮量为16%。当样品与浓硫酸共热,蛋白氮转化为铵盐,在强碱性条件下将氨蒸出,用加有指示剂的硼酸吸收,最后用标准酸滴定硼酸,通过标准酸的用量即可求出蛋白质中的含氮量和蛋白质含量。
②双缩脲法
原理:尿素在180℃下脱氨生成双缩脲,在碱性溶液中双缩脲可与Cu2+形成稳定的紫红色络合物。蛋白质中的肽键实际上就是酰胺键,故多肽、蛋白质等都有双缩脲(biuret)反应,产生蓝色或紫色复合物。比色定蛋白质含量。
缺点:灵敏度低,样品必须可溶,在大量糖类共存和含有脯氨酸的肽中显色不好。其 精确度 较差 (数mg),且会受样品中 硫酸铵 及 Tris 的干扰,但 准确度 较高,不受蛋白质的种类影响。
③Folin酚法(Lowry)
Folin酚法是biuret 法的延伸,所用试剂由试剂甲和乙两部分组成。试剂甲相当于双缩脲试剂(碱性铜试剂),试剂乙中含有磷钼酸和磷钨酸。
在碱性条件下,蛋白质中的巯基和酚基等可将Cu2+还原成Cu+, Cu+能定量地与Folin-酚试剂反应生成蓝色物质,600nm比色测定蛋白质含量。
灵敏度较高(约 0.1 mg),但较麻烦,也会受 硫酸铵 及 硫醇化合物 的干扰。 步骤中各项试剂的混合,要特别注意均匀澈底,否则会有大误差。
④紫外法
280nm光吸收法:利用Tyr在280nm在吸收进行测定。
280nm-260nm的吸收差法:若样品液中有少量核酸共存按下式计算:
蛋白质浓度(mg/ml)=1.24E280-0.74E260 (280 260为角标)
⑤色素结合法(Bradford 法)
直接测定法:利用蛋白质与色素分子(Coomassie Brilliant Blue G-250)结合物的光吸收用分光光度法进行测定。
考马斯亮兰(CBG)染色法测定蛋白质含量。CBG 有点像指示剂,会在不同的酸碱度下变色;在酸性下是茶色,在中性下为蓝色。当 CBG接到蛋白质上去的时候,因为蛋白质会提供 CBG一个较为中性的环境,因此会变成蓝色。当样本中的蛋白质越多,吸到蛋白质上的CBG也多,蓝色也会增强。因此,蓝色的呈色强度,是与样本中的蛋白质量成正比。
间接测定法:蛋白质与某些酸性或碱性色素分子结合形成不溶性的盐沉淀。用分光光度计测定未结合的色素,以每克样品结合色素的量来表示蛋白质含量的多少。
⑥BCA法
BCA(Bicinchoninc acid procere,4,4’-二羧-2,2’-二喹啉)法与Lowry法相似,主要差别在碱性溶液中,蛋白质使Cu2+转变Cu+后,进一步以BCA 取代Folin试剂与Cu+结合产生深紫色,在波长562 nm有强的吸收。
它的优点在于碱性溶液中BCA 比Folin试剂稳定,因此BCA与碱性铜离子溶液结合的呈色反应只需一步骤即完成。灵敏度Lowry法相似。
本方法对于阴离子、非离子性及二性离子的清洁剂和尿素较具容忍度,较不受干扰,但会受还原糖 及EDTA的干扰。
⑦胶体金测定法
胶体金(colloidal gold)是氯金酸(chloroauric acid)的水溶胶,呈洋红色,具有高电子密度,并能与多种生物大分子结合。
胶体金是一种带负电荷的疏水胶体遇蛋白质转变为蓝色,颜色的改变与蛋白质有定量关系,可用于蛋白质的定量测定。
⑧其他方法
有些蛋白质含有特殊的 非蛋白质基团,如 过氧化物酶含有 亚铁血红素基团,可测 403 nm 波长的吸光来定量之。 含特殊金属的酶 (如镉),则可追踪该金属。
❻ 检测核酸、蛋白质分子量的方法
一般来说是电泳法,核酸用的是琼脂糖凝胶电泳,蛋白质用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,通常在样品的旁边,会跑一个由多种已知大小的样品组成的marker,这样在你的条带跑出来之后,就可以看出其大小了,核酸最多可以精确到50bp之内。蛋白的话大概1kd左右。
当然你做实验的时候一般都是知道你的样品大小的,所以一般做比较看是不是出现在正确的位置就好。
希望能够帮到你~望采纳~谢谢~有不明白的欢迎追问~
❼ 核酸含量的测定方法及原理都有哪些
核酸检测的主要原理其实是反转录和聚合酶链式扩增反应。也叫做RT-PCR。目前对新型冠状病毒进行的核酸检测也主要采用此种方式。简单来说就是采取患者鼻咽拭子、痰和其他下呼吸道分泌物、血液、粪便,检测人员通过。核酸提取试剂盒提取患者标本里边儿的核酸,然后把提取到的核酸放进检测试剂中进行复制扩增。然后再根据检测结果进行判断如果是阴性代表没有感染,如果是阳性代表有感染。目前对新型冠状病毒核酸检测会存在假阴性的可能,所以可以选择多次测量。如果连续两次核酸检测为阴性,同时没有临床症状可以排除感染,并且对已经感染了新型冠状病毒肺炎的患者,如果连续两次检测核酸为阴性,注意间隔时间必须大于一天,同时临床症状缓解,影像学好转也可以解除隔离。
❽ 核酸检测是怎样检测的
众所周知,新型冠状病毒肺炎(COVID-19)是一种烈性呼吸道传染病,其病原体为新型冠状病毒。若想证实已出现的感染症状是由本病毒所引起,最准确的方法是从患者体内分离出活病毒,并进行病毒培养。
然而,此方法并不适合大面积应用,在此次疑似病例的确诊工作中,也并不适用。这是因为病毒培养所需时间较长,需要的场所条件也很高(P3级实验室),时效性远远跟不上临床需要。
而核酸检测作为病原学的检测手段之一,效率很高,一般情况下几个小时就可以知道结果。因此,在此次疫情中,临床上取得病原学证据的主要方式并不是病毒培养,而是核酸检测。
核酸是遗传信息载体,是对DNA(脱氧核糖核酸)和RNA(核糖核酸)的统称。病毒则主要由遗传物质和蛋白质组成。而新型冠状病毒正是一种RNA病毒,其遗传物质是单链RNA。核酸检测的原理,正是检测在被测者的咽拭子等样本中,是否存在病毒的RNA。如果存在,说明被病毒感染。那么,我们是否已经获悉了病毒的RNA呢?
△RNA与DNA(图片来源网络)
在武汉疫情初期,中国疾病预防控制中心应用宏基因组学技术,在短时间内完成该病毒的鉴定,并获取了全基因组序列。在病毒全基因组序列公布后,实时荧光逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)试剂被快速研发。
随后,核酸检测试剂盒被应用于临床,并为确诊新冠肺炎提供病原学证据。那么,应用试剂盒进行核酸检测,究竟是怎样的一个过程呢?
首先,检测人员需要在试剂的帮助下,将样本中的核酸提取出来。再把已经分离出来的核酸加到核酸扩增试剂中,然后将其放到核酸扩增仪内,一般两个小时内就会有结果。
事实上,在操作步骤中,扩增是很重要的一环。扩增的意义在于能让微量的遗传信息成指数增加。只要样本中有核酸基因片段,就能用PCR法加以放大,从而更清晰地与病毒全基因组序列实现比对。
实时荧光逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法已在临床实验室应用多年,检测体系成熟,具有特异性强、灵敏度高、检测周期短和可定量检测的优点,而且还能对病毒感染程度和治疗效果进行动态监测。
中日友好医院呼吸与危重症医学科主任医师陈欣在记者采访中介绍道:核酸检测十分敏感,只要在被检者的分泌物样本中找到一部分病毒的核酸,就可以通过RT-PCR扩增的方式,整合成序列。
"虽然不确定核酸是否来自于活病毒,但对于有呼吸道感染症状的患者或疑似患者来说,如果其咽拭子有这种核酸,一般认为来源于活病毒的一部分,间接证实其体内存在着病毒的繁殖和感染。" 陈欣告诉记者。
核酸检测容易出现"假阴性"
虽然核酸检测有灵敏度高、检测周期短等优点,但也存在着一定的弊端。不同于从人体内直接分离出活病毒的方式,核酸检测采用的是一种间接的方式,有可能造成假阴性。
因为试剂盒存在最低检测限的问题,所以只有当采到的样本中,病毒的含量达到一定程度时才能检测出来。少数情况下,可能康复者并未康复,但由于样本中病毒载量低,故康复者核酸检测的结果呈阴性,也就是我们常说的"假阴性"。
因此,在《新型冠状病毒肺炎诊疗标准(试行第七版)》中,出院标准之一为连续两次痰、鼻咽拭子等呼吸道标本核酸检测阴性(釆样时间至少间隔24小时)。
而之所以选取呼吸道标本进行核酸检测,是因为新冠肺炎属于呼吸道传染病,故而优先考虑从呼吸道的分泌物中取得标本。呼吸道又分为上呼吸道和下呼吸道,前者主要包括鼻、咽、喉;后者主要包括气管、主支气管及肺内各级支气管。
相应地,现在对疑似患者检测病毒核酸,标本的采集一般有两大类,上呼吸道标本和下呼吸道标本。
上呼吸道标本主要包括口咽拭子、鼻咽拭子(NPS)、鼻咽吸取物(NPA);下呼吸道标本主要包括痰液、气管吸取物、支气管肺泡灌洗液(BALF)等。
❾ 核酸检测的方式有几种
核酸定量常用方法如下:
1、光吸收法:核酸中碱基共轭结构在近紫外光波长260纳米处有最大吸收,吸收强度与核酸浓度成正比,因此可以用于核酸定量。
2、定P法:核酸中P含量约为0.095,因此可以通过测定样品中的有机P量来进行核酸定量。核酸简介:核酸是由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物,为生命的最基本物质之一。核酸广泛存在于所有动植物细胞、微生物体内,生物体内的核酸常与蛋白质结合形成核蛋白。不同的核酸,其化学组成、核苷酸排列顺序等不同。根据化学组成不同,核酸可分为核糖核酸和脱氧核糖核酸。DNA是储存、复制和传递遗传信息的主要物质基础。RNA在蛋白质合成过程中起着重要作用,其中转运核糖核酸,简称tRNA,起着携带和转移活化氨基酸的作用;信使核糖核酸,简称mRNA,是合成蛋白质的模板;核糖体的核糖核酸,简称rRNA,是细胞合成蛋白质的主要场所。