转基因检测技术方法

A. 转基因检测方法有哪些

目前世界上常用的转基因检测方法主要有两种 一是检测有无来自其他生物成分即以外源结构基因表达出的蛋白质为目的蛋白质检测方法 另一种是检测非转基因植物所不拥有的启动子 终止子 标记基因的DNA检测方法 由于蛋白质检测方法对含量低及深加工的转基因产品无法检测 故DNA检测方法应用范围相对要广

B. 转基因的植株要怎样检测

在植物遗传转化中，外源基因导入植物细胞的频率是相当低的。在数量庞大的受体细胞群体中，通常只有为数不多的一小部分细胞获得了外源DNA，而目的整合到基因组并实现表达的转化细胞则更少。

因此，必须采用一定的检测方法，才能筛选和鉴定出含有目的基因的重组体。目前已发展出一系列的转基因植物的筛选和鉴定方法。在这些鉴定和筛选方法，根据检测的基因功能来划分，可分为调控基因（包括启动子终止子等）检测、选择标记基因检测和目的基因直接检测。

根据检测的不同阶段区分，有整合水平检测和表达水平的检测，基因整合检测方法主要有Southern杂交、PCR、PCR-Southern杂交、原位杂交和DNA分子标记技术法，表达水平的检测包括转录水平检测和翻译水平检测，转录水平的检测法有Northern杂交和反转录PCR（reverse：transcribed：PCR，RT-PCR）检测，翻译水平的检测有酶联免疫吸附法（enzyme：linked：immuno：sorbent：assay，ELISA）和Western杂交等，其中最简便和使用广泛的表达水平的检测是报告基因检测法。由于这些方法的具体操作已在其他章节（课程）介绍过，这里只侧重介绍基于选择标记基因和报告基因的筛选和鉴定方法。

C. 转基因的检测方法比较

目前常用的转基因检测方法有试纸条法、普通聚合酶链式反应（PCR）、实时荧光定量PCR、恒温荧光PCR、数字PCR
试纸条：简单、快速，但对于深加工食品不适用
普通聚合酶链式反应（PCR）：准确度较高，灵敏度高，价格低，缺点是专业性要求高，电泳的染料对人体有害，只能检测一个指标
实时荧光定量PCR：灵敏度高、准确度高、高通量、可实时监控，可定量判断、自动化程度高，缺点是仪器价格高昂、操作复杂、配套产品少、维护费用高
恒温荧光PCR：灵敏度高、特异性强、快速还可实时监控，仪器性价比高，利于推广
数字PCR：准确度高、重现性好、可绝对定量、检测通量高、灵敏度好，但仪器价格昂贵

D. 常用的转基因检测方法有哪些

常用的转基因方法包括农杆菌转化法、基因枪转化法和显微注射法3种。

E. 转基因作物检测方法有哪些

转基因作物检测大体分为两种：一是检测是否含有外源蛋白,即外源基因表达产物,主要采用酶联免疫吸附法和试纸条法；二是检测是否含有外源基因(DNA),主要有Southern杂交技术、基因芯片法和PCR检测法.

F. 转基因农产品的检测方法有哪些具体点，谢谢

从发展来看转基因食品的检测技术根据检测的直接对象可分为三类：(1)利用导入外源基因所表达的特殊性状直接鉴定；(2)针对导入外源基因表达的蛋白质的鉴定方法；(3)以导入外源基因的特定DNA序列为检测对象的检测技术。其中目前用的比较多的是PCR技术、ELISA技术(酶联免疫法)和生物芯片技术三种。

G. 怎样检测转基因食品

目前对转基因食品的检测按原理主要分为针对外源蛋白质和针对外源DNA两种鉴定技术。
外源蛋白质的测定
即从蛋白质水平对转基因食品进行检测，实际应用中主要采用的是免疫学检测法，即Western杂交、酶联免疫吸附法(ELISA)和试纸条法。免疫学检测法可以检测具有抗原性的蛋白质类表达产物的存在，它是通过抗原抗体特异反应来实现的。
Western杂交 Western杂交是将蛋白质电泳、印迹、免疫测定融为一体的特异蛋白质检测方法，具有很高的灵敏性，可以从植物细胞总蛋白中检测出50ng的特异蛋白。Western杂交检测的关键是抗体的制备。
酶联免疫吸附法 ELISA建立了固-液抗原抗体反应体系，并采用酶标记，抗体与抗原的结合通过酶反应来检测。由于酶的放大作用，使测定的灵敏度极高，可检测出1pg的目标物，同时酶反应还具有很强的特异性。它的检测原理和过程基本与Western杂交检测相似。
试纸条法 此法是在最近15年发展起来的，之前主要用于医学领域。与ELISA相似，这种测定方法是将特异的抗体交联到试纸条上和有颜色的物质上，当纸上抗体和特异抗原结合后，再和带有颜色的特异抗体进行反应，就形成了带有颜色的三明治结构，并且固定在试纸条上，如果没有抗原，则没有颜色。因此整个操作相对简单一些。目前市场上也出现了一些此类测试的试纸盒。
外源蛋白质检测法快速，具有一定的灵敏度，也能进行半定量，尤其是试纸条法，不需要特殊的仪器设备，适用于现场检验或初筛。但外源蛋白质检测法有三方面的局限性：(1)由于抗原抗体反应的专一性，每种转基因产品都要开发和建立专门的检测试剂和方法，而转基因产品种类繁多，要建立所有转基因产品的蛋白质检测法工作量很大;(2)对于加工过的转基因食品，其蛋白质很容易被破坏，从而影响检测结果的准确行;(3)有些插入基因还具有表达部位特异性，这些金银的表达并不像DNA那样存在转基因作物的任何部位，甚至有的转基因产品的插入基因根本不表达或表达量很低。这些都会影响检测结果。
外源DNA的检测
目前对于外源基因的检测主要是通过对转入的外源基因进行PCR扩增，然后进行紫外或荧光检测。PCR技术全称“聚合酶链反应技术”，是一种在体外由引物引导的DNA聚合酶催化的聚合反应，能在短时间内准确地将目的序列大量复制。在转基因食品检测方面，主要是用于从DNA即基因水平来鉴定被测食品。由于它的快速、灵敏、费用低、检测仅需微量的DNA并且可以同时检测多个样品，正成为这一领域日趋成熟的方法之一。
定性PCR 转基因食品重组DNA的基本机构包括启动子、目的基因、终止子和标记基因。由于目的基因种类繁多，所以先用转基因食品最常用的转录启动子CaMV35S、转录终止子NOS及抗生素抗体基因NPTII三个序列来设计引物进行PCR反应，对结果阳性者可再检测目的基因。
定量PCR PCR反应具有高度特异性和敏感性，但对实验技术的要求很高，其结果易受许多因素的干扰而产生误差，一般PCR只用作转基因食品的定性筛选检测。针对所存在的问题，研究人员在实验设计中引入内部参照反应，以消除检测时的干扰，并与已知含量的序列GMO标准样的PCR结果进行比较，从而可以半定量地检测待测样品的GMO含量。
近年来定量竞争PCR和实时荧光定量PCR都已用于转基因食品的定量检测。竞争性定量的基本原理是用人工设计的竞争模板以不同稀释度与标本共同扩增，以竞争模板的稀释度和结果做标准曲线，判断标本中待测核酸的量。
实时荧光PCR技术是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时检测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量的方法。这种检测方法采用独特全封闭反应，只须在加样时打开一次盖子，减少了污染，具有高度的灵敏性。
PCR-ELISA 这是一种将PCR的高效性与ELISA高特异性结合在一起的检测方法，它利用地高辛或生物素等标记引物，将PCR扩增产物与固相板上特异的探针结合，再加入抗地高辛或生物素的酶标抗体-辣根过氧化物酶结合物，最后使底物显色，在酶标仪上读取数值。利用PCR-ELISA法对转基因大豆检测，灵敏度比欧盟推荐的PCR方法高5-10倍。它快速方便，避免了有毒物质EB的使用，适合大批量自动检测。

H. 如何检测转基因生物的表达效果

检测方法：通过核酸扩增将物质的遗传物质进行扩增，通过特定引物对所需要的DNA或RNA进行合成，如能成功合成，则代表所要得到的DNA或者RNA是存在的。转基因检测既是对转入的特定基因进行检测，通过引物将特定的启动子和终止子合成，并在之后检测中表现出来，所使用的方法通常是凝胶PCR、RTPCR、LAMP、NASBA等等。

转基因原理
转基因技术的原理是将人工分离和修饰过的优质基因，导入到生物体基因组中，从而达到改造生物的目的。由于导入基因的表达，引起生物体的性状，可遗传的修饰改变，这一技术称之为人工转基因技术（Transgene technology）。
人工转基因技术就是把一个生物体的基因转移到另一个生物体DNA中的生物技术。具有不确定性。常用的方法和工具包括显微注射、基因枪、电破法、脂质体等。转基因最初用于研究基因的功能，即把外源基因导入受体生物体基因组内（一般为模式生物，如拟南芥或斑马鱼等），观察生物体表现出的性状，达到揭示基因功能的目的。

I. 转基因的具体步骤，从目的基因的获得到最后的鉴定，谢谢

1:目的基因的获取。有三种方法（1）从基因文库中获取（2）利用PCR技术扩增目的基因（3）人工合成
2：基因表达载体的构建。这个载体一般是质粒。
3：将目的基因导入受体细胞。这个导入植物细胞一般用农杆菌转化法，也可用基因枪法或花粉管通道法。
导入动物细胞一般用显微注射法。
导入微生物细胞一般用感受态细胞吸收DNA分子的方法。
4：目的基因的检测与鉴定。这个分为4步：（1）用DNA分子杂交技术检测目的基因是否进入受体细胞（2）用分子杂交技术检测目的基因是否转录出RNA（3）用抗原抗体杂交技术检测目的基因是否翻译出蛋白质（4）进行生物个体水平的鉴定（这步不是一定的，也可不进行）。进行生物个体水平的鉴定举个例子就是比如让虫子去啃食导入抗虫基因的植株，看是否抗虫。