A. 流式细胞仪的原理是什么
最近一直在了解流式细胞术和流式分选的知识，看到这个问题想回答一下：
流式细胞仪是以流式细胞术为基础，快速精确的对单个细胞的理化性质进行定量分析和分选。分析流程为：制备单细胞悬液，用特异性荧光染料标记的抗体进行染色，经染色后的待测细胞在一定气体压力下被压入流动室，在鞘液的包裹下细胞呈单行排列，依次通过检测区域，在激光束的照射下细胞会产生散射光和激发荧光。这两种信号会同时被光电倍增管( PMT) 接收。接收后可转换为电信号，通过模/数转换器，将连续的电信号转换为可被计算机识别的数字信号，进行分析。
如上所述，流式细胞仪是由液流系统、光路系统以及检测分析系统三部分组成，部分仪器还具有分选功能，能对粒子进行充电和偏转从而实现细胞分选。
液流系统：通过产生压力使含有目的细胞的样本快速进入仪器，在封闭的样品管中利用样品和鞘液之间的压力差是样本聚集到光学分析系统；
光路系统：由不同的激光器发射出的激光照射到细胞表面产生光信号，而后经过不同的光路系统被接收。在流式照射室的分析点，激光照射到细胞表面发生散射和折射，并发射出散射光包括前向散射光（FSC）和侧向散射光（SSC）,同时细胞表面的荧光素被激发发射出荧光。前向散射光和侧向散射光检测器收集散射光转变为电信号；荧光则被聚光器收集，不同颜色的荧光被双色反光镜转向不同的光电倍增检测器，将荧光信号也转变成电信号。FSC和SSC是流式分析中两个非常基本的参数。FSC的值能代表细胞的大小，细胞的体积越大则FSC就越大。SSC则代表细胞的颗粒度，细胞内细胞器和颗粒度越大则SSC越大。
检测分析系统：荧光信号的强度代表了所测细胞膜表面抗原强度或细胞内物质的浓度，光信号转换为可被计算机识别的电信号。计算机把所测量的各种信号进行处理分析。
流式细胞分选是在流式细胞术的基础上进行的。在流动室的喷口上方配有一个超高频的压电晶体，产生的振动使喷出的液流形成均匀的液滴，待测细胞就分散在这些液滴之中。将这些液滴充以正负不同的电荷（对标有荧光素的细胞液滴带以负电荷；未标记荧光素的细胞液滴带以正电荷；而不含有细胞的液滴则不被带电荷），当液滴流经偏转板时，在高压电场的作用下偏转，落入各自的收集容器中，不带电荷的液滴落入废液容器，从而实现细胞的分离。
第一次回答希望能帮到你，如有理解不当的地方，欢迎指正！
B. 外泌体是什么
外泌体美容是近段时间所兴起的一种美容技术，主要是通过外泌体来修复晒伤以及预防和治疗皮肤衰老等方面的问题。
外泌体美容之所以能够风靡全球的美容市场，主要还是有着非常明显的效果，外泌体不仅能够美白嫩肤，实现抗衰修复的功能，甚至就连肌肤再生的效果也超过了很多其他同类型的产品，比如说像干细胞等等。
外泌体其实就指的是包含了许多复杂的RNA和蛋白质的小膜泡。用通俗一点的话来说就是细胞分泌的物质，外泌体其实早在20世纪80年代就已经被发现了，但是在经过了将近40多年的研究，才真正被广泛应用，现阶段还是属于一种发展阶段，但是因为有着非常显着的成效，所以也是被不断的开发应用着。外泌体的价值自从被研究出来就非常的受重视，在医学方面，不仅受肿瘤学临床医学，甚至还有体外检测等等领域的资深专家拿来进行应用。
而且美国有专门的研究人员进行的实验证明外泌体对于祛斑，美白是有着明显作用的。也就是人们现在常说的水光针通过打开皮肤通道将这些营养物质送到表皮层以下，增加吸收的效果。
C. 为什么运动可以促进外泌体的释放有类似Ca+的这种机制详细解答的文献吗
长期运动后产生的外泌体，确实能够保护受损的心肌细胞。
那么到底是外泌体中的哪种成分在起作用呢？研究人员对外泌体进行了NGS测序，发现游泳训练组和不运动组的小鼠外泌体miRNA有很大差别，游泳训练显着上调了一簇多个miRNA。他们将其分别在心肌细胞缺氧复氧模型中进行功能测试和筛选。
发现多个miRNA，尤其是一种叫miR-342-5p的miRNA能够明显抑制细胞凋亡，降低乳酸脱氢酶的释放，并提高细胞的存活率。检测学员志愿者的外泌体后，也发现赛艇训练组外泌体的miR-342-5p含量较对照组也有明显升高。
那么，这个miR-342-5p到底是怎么产生的呢？研究人员检测了运动前后多种组织miR-342-5p的表达水平，发现运动后血管组织miR-342-5p增加最明显。之前有研究发现，运动会增强血管与血流之间的剪切力，诱导血管内皮细胞产生细胞因子，对人体有益[8]。他们在体外培养条件下对动脉血管内皮细胞通过改变血流剪切力，发现血流加速所致的剪切力增加就能促进这些细胞上调miR-342-5p。
血流变化可以改变剪切力
那么miR-342-5p是通过什么方式保护心脏的呢？研究人员对miR-342-5p起作用的机制进行了深入研究，证实了外泌体miR-342-5p可被心肌细胞摄取；发现其能抑制Caspase 9 和 Jnk2蛋白的水平，并维持Akt蛋白的磷酸化[9,10]。这些作用最终会抑制细胞凋亡，促进心肌细胞生存，从而发挥降低心肌梗死的作用。
运动保护心脏的作用机制
这项研究揭示了长期运动保护心脏的一个新机制，首次发现了运动通过血管内皮细胞释放的循环外泌体miRNA在其中的作用，对缺血性心脏病的预防和治疗具有潜在的临床应用价值。
而对于大多数现在心脏还健康的人，不用奇点糕多说了吧？既然心很容易受伤，那就多爱护它，多运动，让它更强大吧~
有氧运动的第一作用，就是增强心肺功能。
D. 什么是外泌体
外泌体是指包含了复杂 RNA 和蛋白质的小膜泡 (30-150nm)，现今，其特指直径在40-100nm的盘状囊泡。1983年，外泌体首次于绵羊网织红细胞中被发现， 1987年Johnstone将其命名为“exosome”。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。其主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中 。
细胞外被（cell coat）又称糖萼（glycocalyx），曾用来指细胞质膜外表面覆盖的一层粘多糖物质，实际上，细胞外被中的糖与质膜中的蛋白分子或脂类分子是共价结合的，形成糖蛋白和糖脂，所以，细胞外被应是细胞质膜的正常结构组分，它不仅对膜蛋白起保护作用，而且在细胞识别中起重要作用。
人体的内分泌腺有甲状腺、肾上腺、垂体、胰岛等。内分泌腺无排泄管，腺细胞排列缺乏极性，多聚集成团块状或索状。内分泌腺分泌的分泌物称激素。其分泌物直接进入细胞周围的血管和淋巴，由血液和淋巴输送到各组织或器官中。内分泌腺与内分泌组织共同组成内分泌系统，通过体液调节方式，对机体的各方面功能起着重要的调节作用。
外分泌腺有唾液腺、汗腺、皮脂腺、肝脏、胰腺等（胰腺分为内分泌部和外分泌部，胰的大部分属于外分泌部，但是胰岛属于内分泌部）。外分泌腺有排泄管，称腺导管，其分泌物通过腺导管输送到相应的组织或器官发挥其调节作用（一般为排泄作用）.
E. 外泌体还可以这样研究吗
外泌体的提取主要包括以下几种方式。
一是超速离心法，这是目前外泌体提取最常用的方法 。此种方法得到的外泌体量多，但是纯度不足，电镜鉴定时发现外泌体聚集成块， 由于微泡和外泌体没有非常统一的鉴定标准，也有一些研究认为此种 方法得到的是微泡不是外泌体 。
二是过滤离心， 这种操作简单、省时，不影响外泌体的生物活性 ，但同样存在纯度不足的问题。
三是密度梯度离心法， 用此种方法分离到 的外泌体纯度 高，但是前期准备工作繁杂，耗时，量少。
四是免疫磁珠法，这种方法可以保证外泌体形态 的完整，特异性高、操作简单、不需要昂贵的仪器设备，但是非中性pH 和非 生理性盐浓度会影响外泌体生物活性， 不便进行下一步的实验 。
五是PS亲和法，该方法将PS（磷脂酰丝氨酸）与磁珠结合，利用亲和原理捕获外泌体囊泡外的PS。该方法与免疫磁珠法相似，获得的外泌体形态完整，纯度最高。由于不使用变性剂，不影响外泌体的生物活性，外泌体可用于细胞共培养和体内注射。2016.9 nature杂志发表了该方法最新数据，表明PS法可提取相当高纯度的外泌体。
六是色谱法，这种方法分离到的外泌体在 电镜下大小均 一， 但是需要特殊的设备 ， 应用不广泛 。
F. 使用蔗糖密度梯度离心时，不同浓度的蔗糖为什么会分层
如果把不同浓度的蔗糖静置时加入，很显然它们会混合在一起形成单一浓度。
然而，如果在离心的条件下加入，情况会有所不同。当离心力与蔗糖分子扩散力相平衡时，管中由液面至底部就会形成连续的密度梯度。
G. 细胞外泌体是什么
外泌体是指包含了复杂 RNA 和蛋白质的小膜泡 (30-150nm)，现今，其特指直径在40-100nm的盘状囊泡。1983年，外泌体首次于绵羊网织红细胞中被发现，1987年Johnstone将其命名为“exosome”。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。其主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中 。所有培养的细胞类型均可分泌外泌体，且外泌体天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。 有关他们分泌和摄取及其组成、“运载物”和相应功能的精确分子机制刚刚开始研究。 外泌体被视为特异性分泌的膜泡，参与细胞间通讯，对外泌体的研究兴趣日益增长，无论是研究其功能还是了解如何将其用于微创诊断的开发。当外泌体在1980年首次被发现后，其被认为是细胞排泄废物的一种方式，如今随着大量对其生物来源、其物质构成及运输、细胞间信号的传导以及在体液中的分布的研究发现外泌体具有多种多样的功能。外泌体的功能取决于其所来源的细胞类型，其可参与到机体免疫应答、抗原提呈、细胞迁移、细胞分化、肿瘤侵袭等方方面面。有研究表明肿瘤来源的外泌体参与到肿瘤细胞与基底细胞的遗传信息的交换，从而导致大量新生血管的生成，促进了肿瘤的生长与侵袭。