计算菌落数用什么接种方法

① 菌落计数方法

平板菌落计数法，是种统计物品含菌数的有效方法。方法如下：将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液涂布到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞；统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。
但是，由于待测样品往往不宜完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可能来自样品中的2～3或更多个细胞。因此平板菌落计数的结果往往偏低。为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位（cfu ：colony-forming
units），而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。

② 如何选择细菌接种方法

细菌的接种方法有很多种，如划线法、涂布法、倾注法、斜面接种法、液体培养基接种法、螺旋接种法等，其方法和应用各有不同，下面进行解释以帮助实验人员选择操作。

划线法：此法主要用于菌种分纯，获得单菌落

由接种环沾取少许待分离的材料，在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来，如果划线适宜的话，微生物能一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落。

优点：可以观察菌落特征，对混合菌进行分离。

缺点：不能用于菌落计数。

涂布法：此法主要用于菌落总数计数

先将培养基熔化后趁热倒入无菌平板中，然后用无菌吸管吸取0.1ml 菌液接种在已凝固的琼脂平板上。再用无菌L 型玻璃棒将菌液在平板上涂抹均匀，将涂抹好的平板平放于桌上20~30min，使菌液渗透入培养基内，然后将平板倒转，保温培养，至长出菌落后即可计数。

优点：可以计数，可以观察菌落特征。

缺点：接种前需梯度稀释，吸收量较少，较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延。

倾倒法：此法主要用于菌落总数的计数

吸取1ml 菌液加入平板中，倒入已融化并冷却至45~50℃的细菌培养基，轻轻转动平板，使菌液与培养基混合均匀，冷疑后倒置，适温培养。至长出菌落后即可计数。

优点：可以计数，较方便。

缺点：接种前需梯度稀释，不能观察菌落特征，不适用于严格好氧菌和热敏感菌。

斜面接种法：此法主要用于保存菌种，或观察细菌的某些生化特性和动力

用接种环或接种针伸入菌种管内，挑取用来移种的菌落。伸入斜面培养管内，先从斜面底部到顶端拖一条接种线，再自下而上蜿蜒划线，或直接自下而上地蜿蜒划线。接种完成之后，用火焰灭菌培养管口，并塞上棉塞，置于37℃培养。

液体培养基接种法：此法主要用于菌液比浊实验

用灭菌接种环挑取菌落或标本，在试管内壁与液面交界处轻轻研磨，使细菌均匀得散落在液体培养基中。

螺旋接种法：此法主要用于菌落总数计数

Spiral plater 可以在无任何全部或中间稀释的情况下快速细菌接种。对数减少的样品容量以阿基米德螺旋线的形式被自动分注在旋转式培养基表面。培养基上每一点的容量可以被知晓和校准。菌液的浓度可以通过培养皿上一定区域的菌落数量除以同区域样品分注量来计算。

优点：螺旋接种法菌液无需稀释（其他接种方法均需经过梯度稀释才能计菌落数），自动化接种，效率高，可节省3/4 的耗材和时间

缺点：产品成本高，适用于样品量比较大的实验

③ 统计活菌数量的方法都有哪些

统计菌落数目的方法有直接计数法和间接计数法两种。
1. 直接计数法
直接计数法是将稀释的样品滴在计数板上，盖上盖玻片，然后在显微镜下计数4〜5个中格的细菌数，并求出每个小格所含细菌的平均数，再按公式求出每 毫升样品中所含的细菌数。计算公式 为:每毫升原液所含细菌数=每小格平 均细菌数X400X1 000X稀释倍数。这种方法的优点是所需设备比较简单，能迅速得到结果，而且在计数的同时还可以观察到所研究的微生物的形态特征； 缺点是不能区分死菌与活菌。
2. 间接计数法
在应用稀释涂布平板法计数时，首先要将待测样品配制成均匀的系列稀释液，尽量使微生物细胞分散开，再把稀释液接种到平板上，进行培养观察。但值得注意的是，统计的菌落数往往比活菌 的实际数目低，而且统计的结果一般用 菌落数而不用活菌数来表示。计算公式为:每克样品中的菌落数= (C+V)X M，其中，C表示某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V表示涂布平板时所 用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数。

④ 微生物接种方法有哪几种

接种常见方法有：平板划线接种法、斜面接种法、倾注培养法、穿刺接种法、液体接种法。

一、平板划线分离法

平板划线分离法:是指把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环在平板培养基表面，通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养后生长繁殖成单菌落，通常把这种单菌落当作待分离微生物的纯种。

二、斜面接种法

该法主要用于单个菌落的纯培养、保存菌种或观察细菌的某些特性。

三、穿刺接种法

穿刺培养，是指将带有欲培养微生物的接种针深插至半固体培养基（琼脂含量0.2%〜1.0%）中接种，并进行微生物固体深层培养的一种方法，主要用于厌氧或兼性厌氧微生物的培养。

四、液体接种法

液体培养，是指将微生物直接接种于液体培养基中，并不断振荡或搅拌，使微生物均匀地在液体培养基中生长繁殖的一种培养方法。液体培养适用于好氧微生物和植物组织培养，以迅速得到大量繁殖体为目的。

五、涂布接种法

微生物学实验中的一种操作方法。由于将含菌材料现加到还较烫的培养基中再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡，而且采用稀释倒平台法也会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其生长，因此在微生物学研究中更常用的纯种分离方法是涂布平板法。

(4)计算菌落数用什么接种方法扩展阅读：

接种注意事项

1、每次接种时间最长不得连续超过2小时。

2、操作时，接种工具尖端和种块不能接触到管口和外部其它物体。工具尖端碰到外面物体要重换工具，种块碰到外面物体则作废。

3、一般用种量：每支试管母种可扩繁一级种100支左右；扩接原种6～8瓶。

⑤ 统计菌落数目的方法有哪些

统计菌落数目的方法有直接计数法 和间接计数法两种。
1. 直接计数法
直接计数法是将稀释的样品滴在计 数板上，盖上盖玻片，然后在显微镜下计 数4〜5个中格的细菌数，并求出每个小 格所含细菌的平均数，再按公式求出每 毫升样品中所含的细菌数。计算公式 为:每毫升原液所含细菌数=每小格平 均细菌数X400X1 000X稀释倍数。这 种方法的优点是所需设备比较简单，能 迅速得到结果，而且在计数的同时还可 以观察到所研究的微生物的形态特征； 缺点是不能区分死菌与活菌。
2. 间接计数法
在应用稀释涂布平板法计数时，首 先要将待测样品配制成均匀的系列稀释 液，尽量使微生物细胞分散开，再把稀释 液接种到平板上，进行培养观察。但值 得注意的是，统计的菌落数往往比活菌 的实际数目低，而且统计的结果一般用 菌落数而不用活菌数来表示。计算公式 为:每克样品中的菌落数= (C+V)X M，其中，C表示某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V表示涂布平板时所 用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释 倍数。

⑥ 菌落计数的问题

菌落计数采用稀释涂布平板法，到肉眼可见数计数，但两个或多个细菌连在一起在平板上只能看见一个菌落

⑦ 若想统计样品中菌的数目采用什么接种方法

培养基中的菌落数。选择菌落数在30-300的平板进行计数。公式每克样品中的菌株数=（C/V）*M，其中C代表某一稀释下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积，M代表稀释倍数。

⑧ 微生物检验霉菌供试液用10ml，如何计算菌落数

首先要对供试液进行梯度。一般采用10倍梯度稀释的方法。对样品进行连续稀释至合适的梯度。然后将稀释后的样本接种在适宜的平板上（如果没记错霉菌用的是马铃薯培养基计数），每个梯度在每个平板上滴种3个10ul的点（如果你知道样品中可能的霉菌数量，你可以在此浓度上下各推算一个梯度进行滴种），在需氧条件下培养（霉菌是需氧菌），一般的细菌培养10小时就可以开始计数（太早有的菌落不易辨识，太晚菌落连成一片形成菌台不能进行计数），霉菌一般的时间要稍长一些，一般18h左右，这个时间也不一定，建议在12h后就密切关注菌落长势。计数时，一般选择菌落数＞100的稀释浓度（为了方便后面计算，假设选取稀释度a）进行计数（如果样本本身数量不足100当然只能计最低稀释度那个平板了），统计后求出一个平均值b。通过公式总菌数（CFU/g(ml)）=b×100×10^a（CFU(colony-forming
unit)就不多解释了。）解释一下为什么要乘以100，因为我们每个点只滴种了10ul，而我们要求出1ml=1000ul的含量，所以乘以100.

⑨ 统计菌落数目的方法，为什么不能直接计数法

这个。。。。细菌群落是个庞大的数目了额。而且密集程度高(就是说显微镜也分辨不出准确细菌个数)。所以直接计数是非常困难的。一般用平板菌落计数法(将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液涂布到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞;统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。)。
现在比较倾向用菌落形成单位((CFU)是指在琼脂平板上经过一定温度和时间培养后形成的每一个菌落，是计算细菌或霉菌数目的单位。)表示。因为它比“菌落数”更准确反映问题的实质。