检验碳祖的血清学方法是什么

❶ （人）炭疽病怎么预防

炭疽（anthrax）出自古希腊“anthrakos”一词。意思是煤炭。炭疽是炭疽杆菌引起的人畜共患急性传染病。主要因食草动物接触土生芽孢而感染所导致的疾病。人类因接触病畜及其产品或食用病畜的肉类二发生感染。炭疽杆菌从皮肤侵入，引起皮肤炭疽，使皮肤坏死形成焦痂溃疡与周围肿胀和毒血症，也可以引起肺炭疽或肠炭疽，均可并发败血症。炭疽呈全球分布，以温带、卫生条件差的地区多发。目前人类炭疽的发病率明显下降，但炭疽芽孢的毒力强、易获得、易保存、高潜能、可视性低、容易发送，曾被一些国家作为一种生物武器和恐怖行动。
炭疽杆菌是德国兽医Davaine在1849年首先发现的。Peur在1881年发现了减毒的芽孢疫苗能预防炭疽，使炭疽成为第一个能用有效菌苗预防的传染病，Sterne在1939年发现的动物疫苗，直至现在仍在使用。炭疽杆菌为致病菌中最大的革兰氏阳性杆菌，长5-10μm，宽1-3μm，菌体两端平削，呈竹节状长链排列，无鞭毛。在体内形成荚膜，在体外可形成芽孢，芽孢呈卵圆形，位于菌体中部。在血琼脂平板上形成较大而凸起的灰白色不透明菌落，边缘不规则，如毛发状，不溶血，在肉汤培养基中生长时呈絮状沉淀而不混浊。本菌繁殖体对日光、热和常用消毒剂都很敏感，其芽孢的抵抗力很强，在煮沸10min后仍有部分存活，在干热150°C可存活30-60min，在湿热120°C 40min可被杀死。在5%的石炭酸中可存活20-40天。炭疽杆菌的芽孢可在动物、尸体及其污染的环境和泥土中存活多年。
1.传染源：主要是草食动物牛、马、羊、骡、骆驼、猪、犬等受染病畜。食草动物因食入水草中的炭疽杆菌芽孢而感染。人与人的传播很少。
2.传播途径：直接或间接接触病畜和染菌的皮、毛、肉、骨粉或涂抹染菌的脂肪均可引起皮肤炭疽;吸入带炭疽杆菌的气溶胶、尘埃可引起肺炭疽;进食带菌肉类可引起肠炭疽。其中皮肤接触病畜及食用病畜肉是炭疽的主要原困。
3.人群易感性：各年龄人群普遍易感，病后免疫力较持久。
4.流行特征：呈全球性分布，主要在南美洲、东欧、亚洲及非洲地区。我国全年均有发生，多数为散发病例。有职业性，多发于牧民、农民、屠宰与肉类加工和皮毛加工工人以及兽医等。夏季因皮肤暴露多而较易感染。
潜伏期皮肤炭疽一般1-5天。肺炭疽可短至12小时，可长至12个月;肠炭疽24小时。自然感染炭疽以皮肤炭疽为主，生物恐惧相关炭疽以吸人炭疽为主。
皮肤炭疽
最为多见，约占炭疽病例的95%。分为炭疽痈和恶性水肿。
1.炭疽痈：多见于面、颈、肩、手和脚等裸露部位皮肤，初起为丘疹或斑疹，逐渐形成水疱、溃疡，最终形成黑色似煤炭的干痂，以痂下有肉芽组织，周围有非凹陷性水肿，坚实，疼痛不显着，溃疡不化脓为其特性。发病1-2天后出现发热、头痛、局部淋巴结肿大等。
2.恶性水肿：累及部位多为组织疏松的眼睑、颈、大腿等部位，无黑痂形成而呈大块水肿，扩散迅速，可致大片坏死。局部可有麻木感及轻度胀痛，全身中毒症状明显，如治疗不及时，可引起败血症、肺炎及脑膜炎等并发症。在未使用抗生素的情况下，皮肤炭疽病死率为20%-30%。
肺炭疽
只有少数人会得肺炭疽，临床上亦较难诊断。肺炭疽多为原发吸入感染，偶有继发于皮肤炭疽，常形成肺炎。通常起病较急，出现低热、干咳、周身疼痛、乏力等流感样症状。经2-4天后症状加重，出现高热、咳嗽加重、痰呈血性，同时伴胸痛、呼吸困难、发绀和大汗。肺部啰音及喘鸣。Ⅹ线胸片显示肺纵膈增宽，支气管肺炎和胸腔积液。患者常并发败血症、休克、脑膜炎。在出现呼吸困难后1-2天死亡，病死率在8O%-100%。
肠炭疽
临床上较少见。患者出现剧烈腹痛、腹胀、腹泻、呕吐，大便为水样。重者继之高热，血性大便，可出现腹膜刺激征及腹水。并发败血症，因中毒性休克在发病3-4天死亡，病死率为25%-70%。
其他类型
口咽部感染炭疽，出现严重的咽喉疼痛，颈部明显水肿，局部淋巴结肿大。水肿可压迫食管引起吞咽困难，压破气道可出现呼吸困难。
肺炭疽、肠炭疽及严重的皮肽炭疽常引起败血症。除局部症状加重外，患者全身中毒症状加重，并因细菌全身扩散，引起血源性炭疽肺炎、炭疽脑膜炎等严重并发症，病情迅速恶化而死亡。病死率几乎100%。
1.接触史：有与病畜或其皮毛的密切接触史。
2.临床表现：皮肤炭疽的焦痂溃疡，肺炭疽的出血性肺炎，出血性肺炎，肠炭疽的出血性肠炎，败血症的严重全身毒血症与出血倾向等。
3.确诊：需要细菌涂片染色检查，细菌培养以及动物接种等。
鉴别诊断
皮肤炭疽应同痈、蜂窝组织炎、丹毒、恙虫病、野兔热等鉴别;肺炭疽应于大叶性肺炎、肺鼠疫、钩端螺旋体病等鉴别;肠炭疽应同沙门氏菌肠炎、出血坏死性肠炎及其他急性腹膜炎等鉴别;败血症应
同其他细菌引起的败血症鉴别。
辅助检查
1.血常规：白细胞增高，10*109-25*109/L。甚至可高达60*109-80*109/L。中性粒细胞显着增多，血小板可减少。
2.细菌涂片与培养：根据临床表现可分别取分泌物、痰液、大便、血液和脑脊液作直接涂片染色镜检，可见粗大的革兰氏阳性杆菌;培养可有炭疽杆菌生长。
3动物接种：将上述标本接种于家兔、豚鼠与小白鼠皮下，24h后出现局部的典型肿胀、出血等阳性反应。接种动物大多于48h内死亡，从其血液与组织中可查出和培养出炭疽杆菌。
4.血清免疫学检查：有间接血凝试验，补体结合试验、免疫荧光法与ELISA法等检测血中抗荚膜抗体。炭疽患者发病后3天开始产生此抗体，1周后大多呈阳性。恢复期血清抗体较急性期增加4倍以上，即为阳性。EⅡSA、免疫荧光法敏感性和特异性较高，阳性率达80%-I00%。Ascoli沉淀实验主要用于检验动物毛与脏器是否染菌。
炭疽治疗原则是严格隔离，早诊断，早治疗，杀灭机体内细菌。
给予高热量流质或半流质饮食，必要时静脉补液。严重病例可用激素缓解中毒症状，一般用氢化可的松100-300mg/d，短期静脉滴注，但必须同时应用抗生素;对于皮肤炭疽者的局部伤口切忌挤压及切开引流，否则会引起感染扩散和败血症，可用1:5000的高锰酸钾液湿敷，或以1:2000的高锰酸钾液冲洗后，敷以抗菌软膏(如红霉素软膏)，再用消毒纱布包扎。肺炭疽、颈部皮肤炭疽病病人，应注意保持呼吸道通畅;严重者输血治疗。循环衰竭者应在补充血容量的基础上给予休克治疗。
炭疽杆菌对青霉素敏感，临床作为首选用药。一般首选青霉素G，孕妇只能使用青霉素，老年人首选多西环素(强力霉素)。青霉素用量:皮肤炭疽240万-320万U，分3-4次肌肉注射，疗程7-1o天;恶性水肿800万-1000万U，分3或4次静滴，疗程2周以上;其他型炭疽1000万-2000万U，静脉滴注，并可合用氨基糖苷类药物，疗程2-3周。青霉素过敏者，可用氯霉素2g，分3次或4次口服。多西环素0.2-0.3g，分2或3次口服。环丙沙星0.5g，每天2次口服(儿童禁用)。红霉素1.5g，分3次或4次口服。对于恐怖相关炭疽患者，因病情较重、病死率较高，可选用环丙沙星、氨苄西林等联合用药治疗。先静脉给予环丙沙星400mg/12h或多西环素100mg/12h，病情稳定后可口服环丙沙星每次500mg，每日2次，或多西环素每次100mg，每日2次，疗程60天。
5.炭疽皮肤试验：用减毒株的化学提取物皮下注射，症状出现2-3天后，82%的患者出现阳性结果，4周后达99%。
隔离：炭疽病病人应该严格隔离至痊愈，其分泌物、排泄物及其污染的物品与场所，均应按杀灭芽孢的消毒方法进行彻底消毒，不可随意丢弃。患病或病死动物应焚烧或深埋，严禁食用。
检疫与防护：加强对炭疽病的检疫，防止在动物问传播。小量实验操作可用2级生物专柜，若操作量较大则应用3级生物专柜。当怀疑有炭疽杆菌气溶胶广生时，除一般个人防护外，还I讧佩带眼罩和呼吸器。战时，个人应穿防护服、戴防毒面具和防疫口罩;无防护器材时，可用手帕或其他纺织品捂住口鼻，并扎紧袖冂和裤脚，将上衣塞入裤腰，颈部用毛巾围好，戴手套，外穿雨衣。集体防护可构筑工事或利用地形地物等。
疫苗接种：对有关人员接种疫苗。目前采用皮肤划痕法，每次疫苗用量0.1mL；国外多采用保护性抗原肌注。对密切接触者应进行医学观察8天，必要时尽早进行药物治疗。当前的疫苗具有效力不稳定、对吸人性炭疽的保护率低、免疫程序繁琐、存在副作用等缺点。近年来人们在改造传统疫苗的同时又有一些新的发现，如保护性抗原(PA)的抗体，在体内可杀死芽孢;通过黏膜免疫能够诱导机体分泌IgA抗体；抗多聚谷氨酸（γ-D-GA)抗体可以同炭疽杆菌的繁殖体作用，从而杀死繁殖体，寻找到新的免疫原。DNA疫苗、活载体疫苗的出现为新一代安全、免疫程序简单、具更高保护率的疫苗奠定了基础。
炭疽恐惧症的预防：首先，应加强部队对炭疽杆菌等生物武器袭击的防护措施训练，保证部队在战时或重大事件后能够及时采取有效措施，减少伤亡;其次要增强部队的凝聚力，提倡团结协作、互相关心和奉献精神，鼓舞官兵斗志，坚定必胜信心，从而增强对战时各种威胁的心理承受力，减少恐惧症的发生;第三，平时加强对部队的科普宣传，在官兵中普及炭疽杆菌等生物武器的知识及其基本医学防护知识，以减少恐惧心理。
病人因伤口渗液多, 而肠炭疽病人又不能进食, 因此造成蛋白质的大量丢失。在使用抗生素的同时给予患者补充氨基酸、白蛋白。待病情缓解后, 进食高蛋白容易消化之软食以补充丢失的蛋白质, 增加病人的抵抗力。不能进食者可鼻饲高蛋白易消化流质饮食。
1.应做好伤口的处理, 避免其分泌物的污染。局部可用 1 2000高锰酸钾液湿敷并用消毒纱布覆盖,或涂 1%龙胆紫液。更换病人所有的用物包括衣、裤及伤口敷料, 将更换下来的用物焚毁, 以避免扩散。
2.一般护理: 患者大部分来自边远牧区, 语言不通, 卫生条件差, 患者单间病房隔离, 并向患者及家属讲解此病的危害性, 传播途径及隔离、预防措施, 以及排泄物、分泌物的处理, 避免因缺乏卫生知识造成其他部位的感染。
3.心理护理: 因患者来自牧区, 生活习惯上的差异, 保健意识淡漠加上语言不通, 经医护人员讲解, 对该病有一定的认识, 同时对该病也产生了恐惧、失望心理, 甚至拒绝治疗。针对这些心理因素, 医护人员应耐心细致地做好每一次治疗护理工作。
4.密切观察病情变化: 密切观察生命体征的变化, 防止感染性休克的发生, 是治疗炭疽病的关键。
5.房间床、桌、椅 用的福尔马林液煮蒸消毒。隔日 1 次, 连续 3 次, 再用漂白粉液擦洗后作细菌培养确定无炭疽杆菌存在空气时, 方可安置其他人。
畜牧业生产地区为炭疽的多发区。因此，首先做好预防工作是控制和减少炭疽发生的重点。其次应加强宣传，提高人民群众对此病的认识，意识到其危害性，进而自觉预防此病发生。第三、畜牧部加强畜间检疫，并协同做好人畜预防接种，提高人群免疫力。第四、医护人员应提高对此病的诊治水平，做到早诊断、早治疗，从而减少此病的误诊、漏诊，有一定现实意义。
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❷ 肺炭疽的检查

1.实验室检查
（1）周围血象 白细胞计数和中性粒细胞增高，可有类白血病反应。
（2）病原学检查 取患者的病灶性渗出物、痰液、分泌物、血及脑脊液等作涂片或培养，可发现病原菌。可作荚膜染色，特异性荧光抗体染色以进一步鉴定，上述检材可培养或接种于豚鼠等动物的皮下组织分离炭疽杆菌。
（3）血清学 酶联免疫吸附测定传统阿斯可里沉淀试验敏感性和特异性都不高。间接免疫荧光法荧光抗体检测有较高的敏感性、特异性。
2.其他辅助检查
X线表现除显示肺炎外，胸腔积液，典型表现为纵隔增宽。

❸ 炭疽病的检查

1.周围血象
白细胞总数大多增高（10～20）×109/L，少数可高达（60～80）×109/L，分类以中性粒细胞为高。
2.涂片检查
取水疱内容物、病灶渗出物、分泌物、痰液、呕吐物、粪便、血液及脑脊液等作涂片，可发现病原菌，涂片中发现病原菌时可作革兰或荚膜染色，亦可作各种特异性荧光抗体（抗菌体，抗荚膜、抗芽胞、抗噬菌体等）染色检查。
3.培养
检材应分别接种于血琼脂平板、普通琼脂平板、碳酸氢钠平板。血标本应事先增菌培养。如见可疑菌落，则根据生物学特征及动物试验进行鉴定，如青霉素串珠和抑制试验、噬菌体裂解试验等。
4.动物接种
取患者的分泌物、组织液或所获得的纯培养物接种于小白鼠或豚鼠等动物的皮下组织，如注射局部处于24小时出现典型水肿，动物大多于36～48小时内死亡，在动物内脏和血液中有大量具有荚膜的炭疽杆菌存在。
5.鉴定试验
用以区别炭疽杆菌与各种类炭疽杆菌（枯草杆菌、蜡样杆菌、蕈状杆菌、嗜热杆菌等），主要有串珠湿片法、特异性荧光抗体（抗菌体、抗荚膜、抗芽胞、抗噬菌体等）染色法，W噬菌体裂解试验、碳酸氢钠琼脂平板CO2培养法、青霉素抑制试验、动物致病试验、荚膜肿胀试验、动力试验、溶血试验、水杨酸苷发酵试验等。
6.免疫学试验
有间接血凝法，ELISA（酶联免疫吸附实验）法、酶标-SPA法、荧光免疫法等，用以检测血清中的各种抗体，特别是荚膜抗体及血清抗毒性抗体，一般用于回顾性诊断和流行病学调查之用。阿斯可里沉淀试验，对已腐败或干涸的标本，作细菌培养有困难时可采用本试验。如患者、病畜的病灶痂皮、尸体组织及血液、染菌的皮毛及其制品等标本，加水经煮沸或高压提出抗原成分与炭疽沉淀素血清作环状沉淀试验，以间接证明有无炭疽杆菌感染，但本法常出现一些假阳性，对其结果判定应慎重。

❹ 如何防治炭疽

炭疽是一种人畜共患传染病，以急性、发热、败血为特征，牛易发，一年四季均可发生，以夏季多雨季节和洪泛地区最易发生。

病原

本病的病原为炭疽杆菌。菌体粗大，为革兰氏阳性菌，呈长链或短链状排列，菌体两端平齐，呈竹节状。

牛可通过消化道、呼吸道、皮肤外伤、黏膜或昆虫叮咬等多种途径感染，但主要是通过被污染的饲料、饮水，由消化道侵入感染。在发生过炭疽的地区，炭疽杆菌芽孢在土壤中可以生存数月至数年。病牛的分泌物、排泄物和天然孔道流出的血液中含有大量病菌，是危险的传染源，因此本病的尸体应严禁焚烧或深埋，禁止剖检，必要时应严密消毒后进行尸检。

症状

潜伏期1～3天，有的长达14天。根据临床症状和病程可分为以下几种类型。

（1）最急性

病畜突然倒地，像抽风一样昏迷不醒，呼吸困难，从嘴和鼻流出泡沫，有时泡沫带血，可视黏膜蓝紫色，天然孔道流出煤焦油样血液，舌头变成黑紫色，常在1小时左右死亡。最急性型炭疽多见于流行初期。

（2）急性

病牛发热，体温升高到40～42℃，并伴发寒战、食欲减退，最后出现瘤胃臌气，反刍停止，先便秘后腹泻，粪便带血，或伴有腹痛症状。尿暗黄色，有时混有血液。可视黏膜呈蓝紫色，间有小出血点，呼吸极度困难。一般1～2天死亡，死亡率可达80%。

（3）亚急性

病牛症状与急性相似，仅病情缓和些，往往在其颈下、胸前、肩胛、腹下、等处发生肿胀，初期硬固有热痛，逐渐变冷而无痛感。

（4）慢性型

为数甚少，仅表现进行性消瘦，并长达2～3个月。

诊断及治疗

为防止尸体内的炭疽杆菌形成芽孢，污染土壤形成永久性疫源地，在一般情况下对炭疽病牛禁止解剖，故确诊应以细菌学检验和血清学诊断为基础。病牛尸体迅速腐败、膨胀，尸僵不全，天然孔出血，血液不易凝固，呈煤焦油样，皮下及浆膜下有出血性胶样浸润，脾脏明显肿大、松软，呈黑红色。

治疗可用以下方法：

（1）牛每次皮下或静脉注射抗炭疽血清100～250毫升。

（2）每千克体重肌肉注射青霉素100万～300万国际单位，每日注射4次，连用3天可见效。

（3）如能结合用抗炭疽血清效果更好。也可选用其他抗生素或磺胺类药物。

预防措施

（1）炭疽杆菌在适宜的温度下能在体外形成芽孢，在形成芽孢前抵抗力不强，一般的常用消毒药都能在短时间内将其杀死，在腐败环境中很快死亡；形成芽孢后具有很强的抵抗力，在土壤中能存活数十年，在皮毛和水中能存活4～5年，煮沸需15～25分钟才能杀死，但碘溶液、过氧乙酸、高锰酸钾及漂白粉对芽孢的杀伤力较强，所以临床上常用10%漂白粉、0.1%碘溶液、0.5%过氧乙酸作为消毒剂。

（2）炭疽常发地区在春季或秋季要进行预防注射，可用炭疽芽孢Ⅱ号苗，大小牛一律皮下注射1毫升或皮内注射0.2毫升。注射14天产生免疫力，免疫期为一年。

（3）可用无毒炭疽芽孢苗，一岁以上牛皮下注射1毫升，1岁以下小牛0.5毫升，注射后14天产生免疫力，免疫期为一年。

（4）发生炭疽后要立即封锁，禁止家畜外运、外出，禁止畜产品运出，严禁解剖炭疽和可疑炭疽病尸，尸体要深埋，最好焚毁。疫点内的牛先用青霉素预防，7天后再接种炭疽芽孢苗。疫区周围的健康牛也要紧急接种炭疽芽孢苗。

❺ 我怀疑我得了炭疽病

以下是炭疽病毒的各种状况、治疗方法和来源等反应：
炭疽（anthrax）出自古希腊“anthrakos”一词。意思是煤炭。炭疽是炭疽杆菌引起的人畜共患急性传染病。主要因食草动物接触土生芽孢而感染所导致的疾病。人类因接触病畜及其产品或食用病畜的肉类二发生感染。炭疽杆菌从皮肤侵入，引起皮肤炭疽，使皮肤坏死形成焦痂溃疡与周围肿胀和毒血症，也可以引起肺炭疽或肠炭疽，均可并发败血症。炭疽呈全球分布，以温带、卫生条件差的地区多发。目前人类炭疽的发病率明显下降，但炭疽芽孢的毒力强、易获得、易保存、高潜能、可视性低、容易发送，曾被一些国家作为一种生物武器和恐怖行动。
炭疽杆菌是德国兽医Davaine在1849年首先发现的。Peur在1881年发现了减毒的芽孢疫苗能预防炭疽，使炭疽成为第一个能用有效菌苗预防的传染病，Sterne在1939年发现的动物疫苗，直至现在仍在使用。炭疽杆菌为致病菌中最大的革兰氏阳性杆菌，长5-10μm，宽1-3μm，菌体两端平削，呈竹节状长链排列，无鞭毛。在体内形成荚膜，在体外可形成芽孢，芽孢呈卵圆形，位于菌体中部。在血琼脂平板上形成较大而凸起的灰白色不透明菌落，边缘不规则，如毛发状，不溶血，在肉汤培养基中生长时呈絮状沉淀而不混浊。本菌繁殖体对日光、热和常用消毒剂都很敏感，其芽孢的抵抗力很强，在煮沸10min后仍有部分存活，在干热150°C可存活30-60min，在湿热120°C 40min可被杀死。在5%的石炭酸中可存活20-40天。炭疽杆菌的芽孢可在动物、尸体及其污染的环境和泥土中存活多年。
1.传染源：主要是草食动物牛、马、羊、骡、骆驼、猪、犬等受染病畜。食草动物因食入水草中的炭疽杆菌芽孢而感染。人与人的传播很少。
2.传播途径：直接或间接接触病畜和染菌的皮、毛、肉、骨粉或涂抹染菌的脂肪均可引起皮肤炭疽;吸入带炭疽杆菌的气溶胶、尘埃可引起肺炭疽;进食带菌肉类可引起肠炭疽。其中皮肤接触病畜及食用病畜肉是炭疽的主要原困。
3.人群易感性：各年龄人群普遍易感，病后免疫力较持久。
4.流行特征：呈全球性分布，主要在南美洲、东欧、亚洲及非洲地区。我国全年均有发生，多数为散发病例。有职业性，多发于牧民、农民、屠宰与肉类加工和皮毛加工工人以及兽医等。夏季因皮肤暴露多而较易感染。
潜伏期皮肤炭疽一般1-5天。肺炭疽可短至12小时，可长至12个月;肠炭疽24小时。自然感染炭疽以皮肤炭疽为主，生物恐惧相关炭疽以吸人炭疽为主。
皮肤炭疽
最为多见，约占炭疽病例的95%。分为炭疽痈和恶性水肿。
1.炭疽痈：多见于面、颈、肩、手和脚等裸露部位皮肤，初起为丘疹或斑疹，逐渐形成水疱、溃疡，最终形成黑色似煤炭的干痂，以痂下有肉芽组织，周围有非凹陷性水肿，坚实，疼痛不显着，溃疡不化脓为其特性。发病1-2天后出现发热、头痛、局部淋巴结肿大等。
2.恶性水肿：累及部位多为组织疏松的眼睑、颈、大腿等部位，无黑痂形成而呈大块水肿，扩散迅速，可致大片坏死。局部可有麻木感及轻度胀痛，全身中毒症状明显，如治疗不及时，可引起败血症、肺炎及脑膜炎等并发症。在未使用抗生素的情况下，皮肤炭疽病死率为20%-30%。
肺炭疽
只有少数人会得肺炭疽，临床上亦较难诊断。肺炭疽多为原发吸入感染，偶有继发于皮肤炭疽，常形成肺炎。通常起病较急，出现低热、干咳、周身疼痛、乏力等流感样症状。经2-4天后症状加重，出现高热、咳嗽加重、痰呈血性，同时伴胸痛、呼吸困难、发绀和大汗。肺部啰音及喘鸣。Ⅹ线胸片显示肺纵膈增宽，支气管肺炎和胸腔积液。患者常并发败血症、休克、脑膜炎。在出现呼吸困难后1-2天死亡，病死率在8O%-100%。
肠炭疽
临床上较少见。患者出现剧烈腹痛、腹胀、腹泻、呕吐，大便为水样。重者继之高热，血性大便，可出现腹膜刺激征及腹水。并发败血症，因中毒性休克在发病3-4天死亡，病死率为25%-70%。
其他类型
口咽部感染炭疽，出现严重的咽喉疼痛，颈部明显水肿，局部淋巴结肿大。水肿可压迫食管引起吞咽困难，压破气道可出现呼吸困难。
肺炭疽、肠炭疽及严重的皮肽炭疽常引起败血症。除局部症状加重外，患者全身中毒症状加重，并因细菌全身扩散，引起血源性炭疽肺炎、炭疽脑膜炎等严重并发症，病情迅速恶化而死亡。病死率几乎100%。
1.接触史：有与病畜或其皮毛的密切接触史。
2.临床表现：皮肤炭疽的焦痂溃疡，肺炭疽的出血性肺炎，出血性肺炎，肠炭疽的出血性肠炎，败血症的严重全身毒血症与出血倾向等。
3.确诊：需要细菌涂片染色检查，细菌培养以及动物接种等。
鉴别诊断
皮肤炭疽应同痈、蜂窝组织炎、丹毒、恙虫病、野兔热等鉴别;肺炭疽应于大叶性肺炎、肺鼠疫、钩端螺旋体病等鉴别;肠炭疽应同沙门氏菌肠炎、出血坏死性肠炎及其他急性腹膜炎等鉴别;败血症应
同其他细菌引起的败血症鉴别。
辅助检查
1.血常规：白细胞增高，10*109-25*109/L。甚至可高达60*109-80*109/L。中性粒细胞显着增多，血小板可减少。
2.细菌涂片与培养：根据临床表现可分别取分泌物、痰液、大便、血液和脑脊液作直接涂片染色镜检，可见粗大的革兰氏阳性杆菌;培养可有炭疽杆菌生长。
3动物接种：将上述标本接种于家兔、豚鼠与小白鼠皮下，24h后出现局部的典型肿胀、出血等阳性反应。接种动物大多于48h内死亡，从其血液与组织中可查出和培养出炭疽杆菌。
4.血清免疫学检查：有间接血凝试验，补体结合试验、免疫荧光法与ELISA法等检测血中抗荚膜抗体。炭疽患者发病后3天开始产生此抗体，1周后大多呈阳性。恢复期血清抗体较急性期增加4倍以上，即为阳性。EⅡSA、免疫荧光法敏感性和特异性较高，阳性率达80%-I00%。Ascoli沉淀实验主要用于检验动物毛与脏器是否染菌。
炭疽治疗原则是严格隔离，早诊断，早治疗，杀灭机体内细菌。
给予高热量流质或半流质饮食，必要时静脉补液。严重病例可用激素缓解中毒症状，一般用氢化可的松100-300mg/d，短期静脉滴注，但必须同时应用抗生素;对于皮肤炭疽者的局部伤口切忌挤压及切开引流，否则会引起感染扩散和败血症，可用1:5000的高锰酸钾液湿敷，或以1:2000的高锰酸钾液冲洗后，敷以抗菌软膏(如红霉素软膏)，再用消毒纱布包扎。肺炭疽、颈部皮肤炭疽病病人，应注意保持呼吸道通畅;严重者输血治疗。循环衰竭者应在补充血容量的基础上给予休克治疗。
炭疽杆菌对青霉素敏感，临床作为首选用药。一般首选青霉素G，孕妇只能使用青霉素，老年人首选多西环素(强力霉素)。青霉素用量:皮肤炭疽240万-320万U，分3-4次肌肉注射，疗程7-1o天;恶性水肿800万-1000万U，分3或4次静滴，疗程2周以上;其他型炭疽1000万-2000万U，静脉滴注，并可合用氨基糖苷类药物，疗程2-3周。青霉素过敏者，可用氯霉素2g，分3次或4次口服。多西环素0.2-0.3g，分2或3次口服。环丙沙星0.5g，每天2次口服(儿童禁用)。红霉素1.5g，分3次或4次口服。对于恐怖相关炭疽患者，因病情较重、病死率较高，可选用环丙沙星、氨苄西林等联合用药治疗。先静脉给予环丙沙星400mg/12h或多西环素100mg/12h，病情稳定后可口服环丙沙星每次500mg，每日2次，或多西环素每次100mg，每日2次，疗程60天。
5.炭疽皮肤试验：用减毒株的化学提取物皮下注射，症状出现2-3天后，82%的患者出现阳性结果，4周后达99%。
隔离：炭疽病病人应该严格隔离至痊愈，其分泌物、排泄物及其污染的物品与场所，均应按杀灭芽孢的消毒方法进行彻底消毒，不可随意丢弃。患病或病死动物应焚烧或深埋，严禁食用。
检疫与防护：加强对炭疽病的检疫，防止在动物问传播。小量实验操作可用2级生物专柜，若操作量较大则应用3级生物专柜。当怀疑有炭疽杆菌气溶胶广生时，除一般个人防护外，还I讧佩带眼罩和呼吸器。战时，个人应穿防护服、戴防毒面具和防疫口罩;无防护器材时，可用手帕或其他纺织品捂住口鼻，并扎紧袖冂和裤脚，将上衣塞入裤腰，颈部用毛巾围好，戴手套，外穿雨衣。集体防护可构筑工事或利用地形地物等。
疫苗接种：对有关人员接种疫苗。目前采用皮肤划痕法，每次疫苗用量0.1mL；国外多采用保护性抗原肌注。对密切接触者应进行医学观察8天，必要时尽早进行药物治疗。当前的疫苗具有效力不稳定、对吸人性炭疽的保护率低、免疫程序繁琐、存在副作用等缺点。近年来人们在改造传统疫苗的同时又有一些新的发现，如保护性抗原(PA)的抗体，在体内可杀死芽孢;通过黏膜免疫能够诱导机体分泌IgA抗体；抗多聚谷氨酸（γ-D-GA)抗体可以同炭疽杆菌的繁殖体作用，从而杀死繁殖体，寻找到新的免疫原。DNA疫苗、活载体疫苗的出现为新一代安全、免疫程序简单、具更高保护率的疫苗奠定了基础。
炭疽恐惧症的预防：首先，应加强部队对炭疽杆菌等生物武器袭击的防护措施训练，保证部队在战时或重大事件后能够及时采取有效措施，减少伤亡;其次要增强部队的凝聚力，提倡团结协作、互相关心和奉献精神，鼓舞官兵斗志，坚定必胜信心，从而增强对战时各种威胁的心理承受力，减少恐惧症的发生;第三，平时加强对部队的科普宣传，在官兵中普及炭疽杆菌等生物武器的知识及其基本医学防护知识，以减少恐惧心理。
病人因伤口渗液多, 而肠炭疽病人又不能进食, 因此造成蛋白质的大量丢失。在使用抗生素的同时给予患者补充氨基酸、白蛋白。待病情缓解后, 进食高蛋白容易消化之软食以补充丢失的蛋白质, 增加病人的抵抗力。不能进食者可鼻饲高蛋白易消化流质饮食。
1.应做好伤口的处理, 避免其分泌物的污染。局部可用 1 2000高锰酸钾液湿敷并用消毒纱布覆盖,或涂 1%龙胆紫液。更换病人所有的用物包括衣、裤及伤口敷料, 将更换下来的用物焚毁, 以避免扩散。
2.一般护理: 患者大部分来自边远牧区, 语言不通, 卫生条件差, 患者单间病房隔离, 并向患者及家属讲解此病的危害性, 传播途径及隔离、预防措施, 以及排泄物、分泌物的处理, 避免因缺乏卫生知识造成其他部位的感染。
3.心理护理: 因患者来自牧区, 生活习惯上的差异, 保健意识淡漠加上语言不通, 经医护人员讲解, 对该病有一定的认识, 同时对该病也产生了恐惧、失望心理, 甚至拒绝治疗。针对这些心理因素, 医护人员应耐心细致地做好每一次治疗护理工作。
4.密切观察病情变化: 密切观察生命体征的变化, 防止感染性休克的发生, 是治疗炭疽病的关键。
5.房间床、桌、椅 用的福尔马林液煮蒸消毒。隔日 1 次, 连续 3 次, 再用漂白粉液擦洗后作细菌培养确定无炭疽杆菌存在空气时, 方可安置其他人。
畜牧业生产地区为炭疽的多发区。因此，首先做好预防工作是控制和减少炭疽发生的重点。其次应加强宣传，提高人民群众对此病的认识，意识到其危害性，进而自觉预防此病发生。第三、畜牧部加强畜间检疫，并协同做好人畜预防接种，提高人群免疫力。第四、医护人员应提高对此病的诊治水平，做到早诊断、早治疗，从而减少此病的误诊、漏诊，有一定现实意义。
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❻ 叙述炭疽杆菌的微生物学诊断方法

炭疽的微生物学检查
1、标本的采集：分泌物、痰、血液、粪便、呕吐物、脑脊液等，严禁宰杀解剖死畜。
2、标本的处理：液体标本取沉渣分离培养；固体标本用生理盐水浸泡，水浴杀死非芽胞菌；血液、脏器、渗出液增菌或直接分离培养。
3、涂片染色：革兰阳性大杆菌、竹节状排列、有明显荚膜和芽胞—初步报告。荚膜荧光抗体染色或荚膜肿胀试验
4、核酸检测：核酸杂交
5、分离培养：BAP或戊烷脒多粘菌素B等选择性培养基。 2%兔血清肉汤增菌→分离培养
6、鉴定试验：
①串珠试验：接种于含青霉素(0.05～0.5U/ml)的肉汤中，37℃培养6h，形成大而均匀成串的圆球状菌体，与青霉素抑制细菌细胞壁合成有关，类炭疽无此现象。
②青霉素抑制试验：接种于含青霉素5、10、100U/ml琼脂平板，37℃培养24h。后两者不生长，前者生长。
③串珠和青霉素抑制联合试验
7、其他试验
①噬菌体裂解试验：AP631炭疽噬菌体
②NaHCO3毒力试验：接种于含0.5%NaHCO3和10%马血清的平板，10%CO2、37℃、24～48h，有毒株形成荚膜 — 黏液型菌落，无毒株不形成荚膜 — 粗糙型菌落
③毒素动物试验：小鼠、家兔或豚鼠皮下接种
④植物凝集素试验：荧光或酶标记PHA与菌体多糖反应
⑤Ascoli 热沉淀试验：可作追溯性诊断

❼ Ascoli沉淀实验是怎样的

vAscoli试验（炭疽热沉淀反应）：
炭疽杆菌菌体多糖抗原能耐热、耐腐败，对于不适合进行炭疽芽胞杆菌培养的陈旧标本或已腐败的尸体脏器标本，经长时间煮沸，仍可与相应免疫血清(抗体)发生沉淀反应。
常用于皮革检疫。

❽ 植物病毒检测的血清学技术都有哪些

植物病毒的外壳是一种核蛋白，在蛋白的表面带有抗原决定簇，当植物病毒进入动物体内时，即可产生与抗原相应的抗体，这种带有抗体的血清即为抗血清。相应的抗原抗体之间可产生专化性的结合，即抗体只能与其相应的抗原结合并产生一定的反应，此即血清反应。这种反应在植物体外也能进行，根据这种反应可以测定两种病毒间的关系。因而，血清学检测成为植物病毒的重要鉴定技术。常见的血清反应主要有以下几种：

中和反应：使含有植物病毒的汁液与相应抗血清中的抗体充分结合，当抗体过量时，可将所有植物病毒抗原全部吸收掉，此时因植物病毒汁液中已没有病毒粒子存在而失去侵染性。此即为中和反应，不仅可对植物病毒进行定性，还可用于定量测定。

沉淀反应：将一系列稀释度的抗原（病毒）和一系列稀释的抗体（抗血清）分别混合，在两者稀释比例适宜范围内可出现沉淀物，此即为沉淀反应。此类反应如：微量沉淀反应，琼脂双扩散反应，及免疫电泳等，都是在植物病毒检验中最常见的血清学技术。

凝集反应：把病毒的抗体先吸于一种与免疫无关的颗粒表面，然后使其与相应的抗原结合而出现的凝集，即为凝集反应。常用于吸附抗体的颗粒有皂土、乳胶、炭末、血细胞、A蛋白等。

抗体标记：对抗体用荧光素、酶或同位素等进行标记，然后通过对标记物的检测追踪抗原，常用的有酶联免疫吸附、荧光免疫、同位素免疫实验等，这类检测技术灵敏度极高，适于对微量抗原的检测。

现将在植物检疫中常用的几种血清学技术介绍于下。

1.微量沉淀反应

在溶有抗原的溶液内按适当比例加入抗血清时，抗原与抗体互相结合而沉淀。其方法如下：

（1）用蜡笔在培养皿底部各划8条横竖线形成方格。

（2）取两排小试验管，每排7～8个，一排用于抗原，一排用于抗血清，每试管中加0.2ml的缓冲液。

（3）制备1mg/ml纯化病毒原液，在抗原稀释排中加0.2ml原液于第一试管，用1ml的移液管再从中吸0.2ml移至第二管，然后再移0.2ml于第三管，一直移到最后一管，各管的稀释度分别为原液的1/2至1/128。

（4）在小试管中加1.5ml含0.025%防腐剂NaN3的缓冲液，在缓冲液内混入0.1ml未稀释的抗血清，制备出1/16稀释度的抗血清作为原液；在第二排的第一试管中加0.2ml的原液，混合后移0.2ml至第二管，如此一直到最后一管，制备出1/32～1/2048的稀释系列的抗血清。

（5）用微量移液管从抗血清最高稀释度（1/2048）开始，在培养皿的第七横排的每个方格滴加1滴，同样将1/1024稀释度的抗血清加到第六横排，这样将板上所有的方格均滴加各种稀释度的抗血清。

（6）用另一移液管从最稀的抗原液开始，在第七纵排每方格内滴加1滴，按同样方法在第一至第七纵排各方格内滴加各种稀释度的抗原。在所有第八横排和纵排的方格内滴一滴缓冲液做对照。随后在反应液滴上复盖一层液体石蜡油防止蒸发。

（7）将制备好的培养皿在室温湿润环境下孵育2h后，在暗室用双目解剖镜观察，然后在普通冰箱内过夜，第二天继续观察结果，此时沉淀已清晰可见。

以最浓的沉淀为四，以下逐渐减弱的梯度分别记为三、二、一，以三为抗原最大稀释度和产生沉淀的最小血清用量，作为抗原抗体最适比例

微量沉淀技术测定抗原抗体最适反应浓度表

（8）实际测定时，用最适稀释度的抗血清与其相应的抗原和异种抗原进行反应，或用最适稀释度的抗原与其相应的抗血清和异种抗血清进行反应，均可观察它们间的血清学关系。如表0-4-2所示，

微量沉淀技术测定多种抗原间血清学关系表

各供试抗原的稀释度为1.56mg/ml，与1/4至1/1024的不同稀释度的抗血清反应结果表明，第一、二、五、六、七横排的抗原与抗血清的相应抗原是相同的，第三、四两排抗原与抗血清的相应抗原虽然不同，但有一定亲缘关系，第八、十排抗原则与抗血清的相应抗原有远缘关系或无血清学关系，第九排的抗原则完全无关。

2.琼脂双扩散试验

琼脂凝胶的含水量极高，允许分子质量20万u以下的大分子物质自由通过，绝大多数的抗原和抗体分子质量都在20万u以下，在琼脂凝胶中的运动所受阻力甚小，可自由扩散，免疫双扩散就是应用这一原理，在一块琼脂凝胶板上打几个小孔，分别置入抗原及其相应抗体，抗原与抗体分别向凝胶中扩散，形成浓度梯度，在抗原抗体浓度最适比例处，形成肉眼可见的抗原抗体结合物的沉淀带，带的大小形状数量和密度决定于所测试的抗原抗体的特性。本法适于检测植物粗汁液、澄清液和高度纯化的抗原。试验时需设置健康植物汁液及标准抗原作为阴性和阳性对照。本法的特点是可同时检测一种抗原对多种抗体，或一种抗体对多种抗原间的血清学关系，对病毒的鉴别极为方便。缺点是灵敏度较低，抗血清用量大，检测时间长。具体检测技术如下：

（1）称取琼脂加入适当的缓冲液中，用水浴或微波炉加热至琼脂溶解，按0.1%加叠氮化钠。置培养皿或玻璃平板于水平台面，当琼脂冷却至60℃时，倒适当量于板上厚2mm（50mm*9mm的板需9ml，100mm*13mm的板需26ml）。静置至凝固。

（2）将模式图置于板下，用打孔器打孔，挑除孔中琼脂，孔的排列有多种形式，常用的排列，由一个中央孔和周围六个孔组成，孔的直径7mm，周围孔与中央孔的距离为3～4mm。

（3）用缓冲液或生理食盐水在小试管中稀释抗原，在周围孔中加最适稀释度的抗原，在中央孔中加最适稀释度的抗血清。外围孔中加倍比稀释系列的抗原，中央孔加倍比稀释系列的抗血清，产生致密狭窄的沉淀线的组合为最适浓度。

（4）将培养皿在保湿环境下进行孵育，次日在暗背景下观察沉淀线出现情况。在印有排列模式团的纸上，图记沉淀线的形式，沉淀线图形可用照相或染色保留。

（5）结果的判断：根据沉淀线的形状分析抗原与抗体，及抗原互相间的关系。

对长形病毒进行琼脂双扩散检测时，可在琼凝胶介质中加入十二烷基磺酸钠（SDS），此剂为一种阳离子表面活性剂，可将病毒裂解成具有抗原活性的可扩散的片断利于检测。

3.对流免疫电泳

在以琼脂凝胶为介质的情况下，免疫球蛋白带有微弱负电荷不能抵消电渗作用，故在电泳时向负极迁移，而一般抗原蛋白带有较强的负电荷，抵消电渗后仍向正极迁移。依此设计的对流免疫电泳是将琼脂电泳与免疫沉淀相结合的方法，将抗原病毒放在琼脂凝胶靠近阴极一侧，抗体放在靠近阳极一侧，在直流电场中，抗原迁向正极，免疫球蛋白迁向负极，相遇后形成免疫沉淀线。具体技术如下：

（1）凝胶床的制备。取定量琼脂粉用蒸馏水浸泡2～3d，每日换水1～2次，用硼酸缓冲液配成1%～1.2%的琼脂液，加0.1%叠氮化钠。将玻璃放在水平台上用吸管将缓冲液琼脂注到板面，制成2mm厚的凝胶床并打孔。

（2）将制好的凝胶床放在电泳槽内，加缓冲液（用配制琼脂凝胶的缓冲液稀释1倍）离床面2～4cm，在琼脂板阴极一端孔中加入抗原，在靠阳极一端孔中加入特异性抗血清，在琼脂床的两端用两层纱布使琼脂板与电泳槽中的缓冲液相连，进行电泳。

（3）进行电泳时，电压、电流和时间，根据缓冲液离子强度、电泳床大小和抗原性质而有所不同。只要不使病毒抗原变性，尽量保持较高的电压，如电流超过2mA，电泳应在低温下进行。

（4）电泳完毕后，将电泳板放在黑色背景处观察，也可将电泳完毕的琼脂凝胶板先浸在生理食盐水中30min，然后放在苦味酸溶液中20min，可将背景染成黄色，沉淀为白色，便于观察。

免疫电泳与琼脂双扩散相比有三个优点，快速、灵敏并可用于在琼脂中扩散慢的长形病毒。

4.乳胶凝集试验及A蛋白乳胶凝集试验

用特异性抗血清提纯的免疫球蛋白，将其吸附在乳胶粒子上，制备抗体免疫球蛋白致敏乳胶。当与相应的抗原相遇时即可产生凝集反应。这是一种灵敏度高特异性强的血清学技术，但是每次都要特异性抗血清提取抗体γ球蛋白，制备手续繁杂不便应用，如直接用抗血清致敏乳胶则显着影响效果。其后Querfurth（1979）发现A蛋白可吸附免疫球蛋白且不影响与相应抗原结合。这样就可先使A蛋白与乳胶粒子结合，再与抗血清中的免疫球蛋白结合，形成A蛋白-乳胶-免疫球蛋白的复合体。这种乳胶凝集试验可简化致敏免疫球蛋白的过程，而获得同样效果。具体做法如下。

（1）免疫球蛋白致敏乳胶的制备。

将特异抗血清用33%饱和硫酸盐析法提取球蛋白，悬浮于0.05mol/L、pH7.2的Tris-HCl（含0.02%PVP）缓冲液内，取10%空白乳胶稀释15倍后与等量适宜浓度的球蛋白液混合，置室温2h后移入冰箱内过夜。经低速离心（7000r/min，20min）取沉淀悬浮于缓冲液内，经反复离心洗涤2次后将最后沉淀物悬浮于缓冲液内即可得抗体球蛋白的致敏乳胶。

（2）A蛋白乳胶致敏抗体的制备。

将市售A蛋白溶于0.1mol/L、pH8.2的甘氨酸缓冲液内，制成A蛋白溶液，与等量稀释15倍的空白乳胶液混合，置室温3h，移入冰箱过夜。低速离心（7000r/min20min）后将沉淀悬浮于甘氨酸缓冲液，反复离心洗涤2次，沉淀悬浮于甘氨酸缓冲液制备A蛋白乳胶溶液，与等量适宜稀释度的抗血清混合，置室温下3h后移入冰箱过夜。再反复离心洗涤2次，最后将沉淀悬浮于与抗血清等等量的甘氨酸缓冲液内，即可得A蛋白乳胶致敏抗体。

（3）检测法。

用0.05mol/L、pH7.2的Tris-HCl缓冲液（含0.02%PVP，0.02%NaN3）按等倍比稀释抗原，制成20、40、80、160、320、640、1280的系列浓度，在一洁净玻璃板上，用笔画好方格，每格加2滴不同稀释度的抗原，然后再加1滴乳胶致敏抗体（或A蛋白乳胶致敏抗体）用微量血液振荡器以120r/min振荡混合后，用肉眼或10～25倍解剖镜观察结果。同时设空白乳胶液和健汁液对照。

阳性反应表现有明显的絮状或颗粒状凝集物，背景清明透亮，阴性反应则仍为均匀的牛乳状液。也可用浊度计检测其凝集度。

此法受健康植株蛋白的干扰较小，适于直接采自病株的澄清液，不但适合球状病毒，对杆菌状病毒，棒状病毒，线状病毒也适用，并有较高的灵敏度。但对效价低的抗血清或含有乳状胶体的植物不适用。

5.酶联免疫吸附试验

酶联免疫吸附试验是一种固相吸附和免疫酶技术相结合的方法，将抗原或抗体包被在固相支持物上，使免疫反应在固体表面进行，并借助标记在抗体上的酶与底物所产生的颜色，检测相应的抗原。此法灵敏度高，特异性强，快速简便极适宜植物检疫应用。常用的检测方法有以下几种：

（1）直接法。

将待测样品抗原（病毒）加入聚乙烯多孔板内，保温后洗涤，使附着于壁上的抗原与加入的酶标抗体γ球蛋白反应，洗涤后保留与抗原结合的酶标γ球蛋白，加入酶的底物，用分光光度计进行检测。

（2）间接法。

先用抗兔球蛋白山羊抗体与酶结合制备酶标记抗体，将待检抗原包被于固相载体，经过孵育洗涤，加入特异性兔抗血清，孵育洗涤后加羊抗兔酶标记抗体，孵育洗涤后加入底物，观察结果。

（3）双抗体夹心法。

先将特异抗体免疫球蛋白包被于固相载体，保温洗涤后，加待测抗原，使与吸附于载体上的抗体反应，保温洗涤后再加入特异抗体的酶标记物，最后加底物观察反应结果。

（4）A蛋白酶联法。

将A蛋白用pH9.6的甘氨酸缓冲液稀释后包被微板，加入特异性抗血清，使其与已固定在微板上的A蛋白结合，再加入待测抗原使其与特异性抗体反应，再加入特异性抗体，使其与抗原反应，再加酶标记A蛋白，最后加酶的底物测其光密度值。

（5）异种动物双抗体夹心法。

先将第一抗体（兔血清抗体）包被微量反应板，加待测抗原后，加适宜浓度的第二抗体（鼠腹水抗体），再加入市售羊抗鼠酶标记物，最后加底物观察反应，一般8h即可得出结果。此法保持了双抗体夹心法快速准确灵敏度高的特点，对球状病毒、杆状病毒、线状病毒、棒状病毒均可应用。抗体不必纯化可直接使用（但未纯化的抗血清需先选择其最适工作浓度），使用市售酶标记物，可省去制备酶标记抗体的复杂手续，还可克服间接法非特异性反应干扰大的弱点。

（6）生物素抗生物素酶联法。

生物素具有很强的亲和力，是抗原抗体反应的1万倍，两者一旦结合就难以离解，且不受酸碱变性剂蛋白溶解酶及有机溶剂的影响，具有高度稳定性，生物素一经活化可与蛋白质呈偶联结合，即一个大分子可结合多个生物素分子，生物素又可大量结合在酶标记物上，使酶标记物成为多价，而抗生物素本身又是一个多价分子，每一亚基均可结合一个生物素分子，因此，这种方法可产生多级放大，使灵敏度提高10倍以上，并降低非特异性反应，把酶联免疫吸附技术又提高一步。具体方法如下：

先将第一特异抗体（兔抗体或鼠腹水抗体）包被在固相载体，加待检抗原，加第二特异性抗体（鼠腹水抗体或兔抗体），再加入相应生物素化（羊抗鼠或羊抗兔）免疫球蛋白，再加抗生物素酶结合物，最后加入底物观察O.D.值。

（7）膜上斑点酶联法。

先用软铅笔在一张适宜大小的硝酸纤维素膜上划好边长1cm的方格网，把纤维素膜浸入TBS缓冲液漂洗30min，然后将膜放在两张滤纸之间，在室温下风干，用移液器将抗原抽提液滴在各方格中央，室温下风干，用TBS-T缓冲液（含0.5%Tween的TBS液）洗膜5min，取出后放在滤纸上至膜表面水滴消失，然后浸入封闭液（含1%牛血清蛋白，和2%聚乙烯吡咯烷酮的TBS-T液），在37℃下保温1h，取出晾干后，浸在用封闭液稀释的第一抗体溶液，在37℃下保温1h，用TBS-T液洗膜10次，每5min换液一次。将膜浸入稀释度1/200的酶联球蛋白，室温保温1h，用上法洗膜后，用碱性磷酸酯酶缓冲液冲洗两次，每次10min，将膜浸入酶底物溶液内，室温下避光5～15min，显色完全后弃去底物液，用终止液（10mmol/LTris-HCl，pH7.5，5mmol/LEDTA）洗膜30min，置膜于滤纸内彻底风干后观察结果。

此法可克服塑料板的不足，只用目测就可对结果定性，不需要复杂的仪器，所需抗原抗体量均很少，灵敏度比常规酶联法高10倍以上，适合大量抗原的检测。

6.免疫电镜

电镜检测可快速确定病毒粒子的形状，是鉴定病毒不可缺少的技术，但有的样品浓度很低，用普通的电镜技术不易观察，如将病毒粒子包被后，抗体可把病毒粒子捕捉成聚集物便于观察。同时还可从病毒粒子与抗体的结合情况，观察两者间的血清学关系。通常使用的有以下几种方法：

（1）叶片浸沾血清技术。

把一滴稀释的抗血清，滴在有膜的铜网上，将叶片的新鲜切口浸入血清滴中1～2s，置于室温下5～10min，使血清与相应的病毒聚集并装饰起来，再进行负染检镜。

（2）Derrick氏法。

把火棉胶膜铜网在24℃下，置于按1∶10比例稀释于Tris缓冲液的抗血清内，然后将铜网用缓冲液冲洗后使用。把病毒的粗提液稀释于含HCl的Tris缓冲液内，将已用血清包被的铜网浮于0.1ml的病毒稀释液内1h（24℃），先用Tris-HCl液再用水冲洗，然后干燥喷镀。

（3）聚集法。

把抗血清用磷酸缓冲液稀释到1/100的浓度，取10μl滴于载玻片，将切成2mm见方的病叶在血清滴中压碎，在湿室中保湿15min，用镊子持有膜铜网蘸取液滴，用20倍磷酸缓冲液冲洗后，再用蒸馏水洗，最后用5滴醋酸氧铀染色观察。

（4）修饰法。

取2mm见方的病叶在载玻片上的10μl蒸馏水中压碎，持有膜铜网沾此液滴，将病毒粒子吸附于铜网上，然后将铜网用20滴的磷酸缓冲液冲洗，吸去水分后加1滴稀释成1/100的抗血清，在湿室中保湿15min后，将铜网用20滴磷酸缓冲液和30滴蒸馏水冲洗，最后用醋酸氧铀染色检镜。

（5）诱捕修饰法。

先将铜网用稀释1/10或1/100的特异性抗血清包被，再把病毒样品滴于铜网，保湿15min，用缓冲液及蒸馏水冲洗吸干，再加1滴稀释成1/100的特异性抗血清，孵育15min后，用缓冲液和蒸馏水冲洗，吸干染色检镜。

（6）羊抗兔血清诱捕修饰法。

在诱捕修饰法未染色以前，再加1滴稀释1/20的羊抗兔血清，孵育15min，洗涤后染色镜检。此法因病毒粒子外壳包被有两层血清，明显加粗，在2000倍的低倍电镜下即可清晰地看到病毒粒子。

（7）A蛋白诱捕修饰法。

在福尔马膜的铜网上滴1滴50mg/ml的A蛋白液，孵育后洗去多余的A蛋白，再包被稀释100倍的特异性抗血清，滴加抗原，再滴加特异性抗血清，最后染色镜检。此法比一般诱捕修饰法灵敏度高，能捕捉更多病毒粒子。

❾ 临床上常用的血清学检查方法有哪几种

主要有沉淀试验、凝集试验、补体结合试验、中和试验及与标记抗体有关的试验。

（1）凝集试验

包括玻板凝集法、全血平板凝集法、试管凝集法和琼脂扩散法。

①全血平板凝集反应

此法常用于传染性鼻炎、鸡白痢、鸡伤寒、鸡慢性呼吸道病等禽病的检疫和监测。

②琼脂扩散反应

当适当比例的抗原抗体在含有电解质的琼脂网状基质中自由扩散相遇时，形成肉眼可见的白色沉淀线。此法常用于鸡传染性法氏囊病、鸡马立克氏病、禽流感、禽脑脊髓炎、禽腺病毒感染等病的诊断，还常用于抗体监测和血清学流行病学调查。

（2）血凝与血凝抑制试验

试验原理：某些病毒能够与人或动物的红细胞发生凝集，称为血凝反应（HA）。这种凝集反应可被加入的特异性血清所抑制，称为红细胞凝集抑制试验，即血凝抑制反应（HI）。

此方法常用于鸡新城疫、禽流感、鸡产蛋下降综合征等病毒的诊断和血清学监测。