荧光寿命分析仪应急处理方法

A. 荧光分析仪保养及使用

荧光光谱法具有灵敏度高、选择性强、用样量少、方法简便、工作曲线线形范围宽等优点，可以广泛应用于生命科学、医学、药学和药理学、有机和无机化学等领域。

荧光分光光度计的发展经历了手控式荧光分光光度计，自动记录式荧光分光光度计，计算机控制式荧光分光光度计。

光分光光度计三个阶段;荧光分光光度计还可分为单光束式荧光分光光度计和双光束式荧光分光光度计两大系列。其他的还有低温激光Sh p ol’skill荧光分光光度计，配有寿命和相分辩测定的荧光分光光度计等

荧光分光光度计操作步骤

1.开机：接通电源，打开主机开关，点燃（打开）光源后，根据说明书要求启动计算机。

2.检测前准备：参照仪器说明书，在20天内至少进行一次激发校准和发射校准，检测前仪器应预热。

3.工作条件的选择：环境温度应在20℃±5℃;相对湿度不大于70%;电源稳定，无磁场、电场干扰。根据样品的特性及荧光强度，选择合适的仪器工作条件（如狭缝、PM增益、响应时间等）。

（1）荧光激发光谱测定

设置仪器参数，扫描发射波长，找到maxλem，以此为发射波长，记录发射强度作为激发波长的函数，便得到激发光谱。

（2）荧光发射光谱测定

设置仪器参数，扫描激发波长，找到maxλex，以此为激发波长，记录发射强度与发射波长间的函数关系，便得到荧光发射光谱。

（3）差谱测定

设置仪器参数，选择合适的工作方式，测定背景溶液的发射光谱并储存起来，在一定的工作方式下，扫描样品溶液的发射波长，得到当时的光度值和储存的背景值之间的差示值，即差谱。

（4）峰面积积分

选择适当的工作方式，对样品溶液进行积分操作，即得到峰面积积分。

（5）荧光强度

选择合适的测量参数，设置λex、λem，采用定点读数或扫描方式，即可测得所选波长处的荧光强度。

（6）定量测定

配制一系列已知浓度的标准溶液，在一定的测定条件下，设置λex、λem，按照由稀至浓的次序，测定标准溶液的荧光强度，绘制荧光强度—浓度的工作曲线，不改变仪器参数测定未知溶液的荧光强度，由工作曲线即可求出未知溶液的浓度。

B. 怎样正确使用原子荧光分光光度计及注意事项

正确使用原子荧光分光光度计：
1、首先开启电脑

2、开启氩气，泵电源，主机电源，然后打开电脑桌面上的原子荧光光度计的应用程序，选择所要做的元素，点击“确定”。
3、点击“文件”，进行“气路自检”，“断续流动和自动进样器自检”，“空心阴极灯和电路自检”。
4、点击“文件”-------“连接数据库”也可以“生成新数据库”----扩展名不变将*键改掉即可。
5、点击“运行”-------“点火”。
6、点击“运行”-------“样品测试”，半小时后可点击“停止“，此时仪器稳定，这个过程是预热的过程。
7、点击“条件设置”依次设置
a、“测量条件”均为默认值，只有空白判别值可根据自身条件设置，一般采用默认值为好。
b、“仪器条件”中负高压设成280，当做汞时，将B道灯电流设成15，其余均为默认值。。
c、“自动进样参数”和“断续流动程序”均为默认值，无需重设置。
d、“A.B道标准样品参数”只需将溶液浓度输入即可。
8、点击“空白测量”中的“标准空白”，当两个相邻的数值之差小于所设定的空白判别值时就会自动停止。
9、点击“标准测量”--------“测量标准曲线”--------输入文件名------确定
10、当上面的步骤完成后就开始测样品。先进行样品空白的测量，点击“空白测量”------“样品空白”。
11、点击“参数”的设定，然后确定。点击“样品测量”，--------输入文件名------确定-----开始做样。
12、点击“文件”------“打印样品分析报告”，出现对话框，输入信息，选择要打印的范围，点击打印。
13、连接数据库，点击“用户索引”可以调出以前所做的数据。
14、做样完成之后，把进样管，进硼氢化钾的管子和载流槽补充的管子同时至于装有纯水的杯子中，然后点击“清洗”--------“样品测试”，一般出现4个数据就可把3根管子都拿出来，然后排空积液。
15、取下进样针，把泵的压块松开，再用干布把原子荧光分光光度计上的液体檫干。

原子荧光分光光度计的使用注意事项
1、在开启仪器前，一定要注意开启载气。
2、检查原子化器下部去水装置中水封是否合适。
3、试验时注意在气液分离器中不要有积液，以防溶液进入原子化器。
4、在测试结束后，一定要运行仪器用水清洗管道。关闭载气，并打开压块，放松泵管。
5、更换元素灯，一定要在主机电源关闭的情况下，不能带电插拔。
6、元素灯得预热必须是在进行测量时点灯的情况下才能达到预热稳定的作用，只打开主机，元素灯虽然也亮，氮起不到预热稳定的作用。

C. 荧光灯带应急的原理

就是应急荧光灯，荧光灯里面带蓄电池和逆变装置。通过双控开关控制（相当于单刀双置开关），一根零线，一根开灯线、一根充电线（有的接专用应急电源线）。
这里说说无专用应急电源的接线情况，就是充电回路和开关灯回路都接市电情况下的灯控和工作。
市电正常时，双控开关朝下按：开灯回路接通、充电回路断开，灯亮；双控开关朝上按，开灯回路断开，充电回路接通，灯灭。
市电停电时（充电和开关回路都接市电），无论开关朝上还是朝下按，灯都量（蓄电池和逆变装置工作）。

D. 高效液相色谱荧光检测仪出问题怎么办

转载：《分析测试网络网》
检测器故障和解决方法

1.检测器性质概述
检测器是液相色谱系统的“眼睛”，测量离开柱的样品的浓度或质量。光电检测器测量柱流出物的光吸收、荧光和折光率的变化。电化学和电导检测器溶液的变化。特殊的样品用特殊的检测器。不合适的检测器测得的结果也不可靠。
2.常出现的UV检测器故障
故障类型 故障率（%）
噪音 26
漂移 12
灵敏度 9
灯寿命 24
气泡 7 在检测生物样品时可能为主要故障
池污染 6
其他 8
无故障 11
3.具体故障与解决
a.灯故障主要是灯失灵或能量衰减以及灯引起基线噪音。
除EC外，检测器中灯是重要部件。灯失灵，明显地引起检测器信号总下降。多数检测器有观察孔或指示器，由此可看见灯工作的情形。但是不可以直接观察紫外灯，因为紫外线会损伤眼睛。
基线噪音这是灯失灵更普遍的故障。氘灯打开后有30分钟的最大噪音，所以每次使用前至少预热30分钟。
换灯时要注意不能在灯上留下指痕。因为未擦去的指痕在开灯后会引起灯表面永久性的损害。请用软布或专用擦镜纸握住灯，在开灯之前用棉签蘸取甲醇擦去。新装上后至少要点燃1小时以上，才能开始定量分析。
b.池故障与解决
气泡是最常见故障。瞬间而过的气泡会在色谱图上出现长噪音尖峰。若感觉到有气泡，当将等调整670nm左右，戴上防护眼镜便可以看到池内有一个圆环，并不是清晰地绿色图像。流动相脱气不足会产生气泡，池污染会使得故障加重。用充分脱气的流动相可以带走气泡，或用强溶剂通过系统。在正相和反向系统转换的时候一定要过渡。
检测器阻塞有下列现象：系统压力升高，松开检测器进口的接头压力降至正常水平。检测器部分易发生的地方为进口管道或热交换器、池本身和出口管道。用一般的净化的溶剂去掉阻塞可能不奏效但可以试试。若是厂家标明耐高压，可用泵打溶剂反冲，常可以去掉堵塞。压力不要超过6MPa.正常的池不可用此法，一般情况请咨询厂家的维护工程师较好。
c.池阻塞和污染，如确定是池堵塞，可用注射器回抽溶剂或用泵反冲（耐高压），一般能疏通。通常此故障较少发生，而污染是经常发生的。池污染一般是色谱图的噪音增大，灵敏度降低甚至不出峰，也提高了气泡的故障率。清洗池前向拆去柱和排空管道，准备好防护用品，如眼睛、围裙、橡胶手套等。池进出口都接上细管径的聚乙烯管。进口管上接10ml的注射器，出口管没入异丙醇中。清洗程序如下：回抽10ml异丙醇通过池去掉流动相残留。 回抽10ml蒸馏水 回抽10ml6mol/L硝酸，通过池去掉沉积物，此步应小心，要备有防止酸溢出的应急措施 回抽20ml蒸馏水 至少用100mlHPLC级别的水正向通过池。
d.池渗漏可能发生在接头、池窗的密封垫上，也可能发生在样品池或参比池的一侧，或者是石英窗破裂。除了接头松动，池渗漏也可能是管道阻塞、流速较高、池后的阻力大，使池的横截面承受过高的压力，严重地引起池破裂。也可能组装不当、垫圈不密封造成的渗漏等。没有多大把握最好请厂家来维护。
e.测量和参比池配合不当，正常情况下UV检测器用空气做参比，电路设计也无流动相本地。用有紫外吸收的流动相通过UV检测器，或是用示差折光检测器都要在参比池内注满流动相。如参比池中流动相不与测量池中的流动相一样，本底输出信号不为零，进样时有可能出伪峰或倒峰。从湿参比池换成空气参比池时，要清洗干净后用干燥的氮气吹干，不能留下溶剂残留，否则就出“气泡样”的故障。
f.波长方面的问题主要是次级发射效应、选择波长不正确、波长的装置差、波长校正问题、低波长测量问题和单色器等问题。
次级发射效应在可见光范围内，使用氘灯做光源可提高灵敏度，但是带来了次级发射效应。单色器能发射比设定值高一级的发射光，正好是设定值的一半。如设定值在405nm，次级发射光正好是202.5nm，三级发射光低于干扰波长之下，由于大气中的氧所吸收。次级发射光正好在紫外光范围内，即是检测器在两种波长下检测，违反了比尔定律，结果是非线性的。我们可以用钨灯在紫外范围内无次级发射，但是灵敏度下降。用氘灯在高于360nm测定，应考虑有次级发射的可能。在荧光检测器中，也有这个问题存在。
选择波长不正确可影响实验结果的精确性，如有可能应选择在干扰组分的吸收光谱平稳的范围或组分的最高吸收处。在所选波长太靠近流动相的吸收范围，梯度洗脱时会增加基线漂移。

波长的装置差，可变波长UV检测器所采用的机械转动光栅选择波长。旋转和光栅间的传动装置由齿轮和杆组成，用久了会机械磨损，所选的波长并不真正是您选择的波长。
波长校正问题我们可以用铬酸钾在275nm校正吸收波长等方法来处理。
低波长测量问题是我们在采用低波长时，样品和流动相的变化比在高波长下更灵敏。我们要选择应选择低波长吸收较小的溶剂，通常是乙腈好于甲醇。
单色器问题主要是光栅和镜子蒙上一层污染物，一般这种情况请厂家维护较好。
g.时间常数是相应时间的设定，起着过滤噪音的作用。有些有固定的时间常数，有些需要自己设定。如果太小可能增加短噪音，时间常数太大可能出宽峰、峰拖尾和短峰。可用自己的经验估算时间常数，即选最窄的有关峰宽的10%作为时间常数。
h.泵噪音主要引起检测器折射率的变化与流动相的组成、压力以及温度由引起的噪音。一般情况要加阻尼器，特别是RI检测器对波动十分敏感。。
I.温度的影响，主要是环境温度变化常引起基线漂移，一般情况请使用柱温箱等设施或环境温度波动的控制。
j.混合问题，主要是流动相不完全混合可出现周期性的基线变化，在示差折光检测器非常严重，如果改用手动混合相对较好。特别是比例悬殊太大时最明显。
k.线性问题，主要因为检测器或方法上的问题，非线性响应是可能的。如仔细稀释样品、选择波长，良好的方法可以延长线性范围。检查线性要在一定的浓度范围内，用不同浓度的标准品证实线性的相关性；用几乎澄清的溶剂做流动相可扩展线性范围，用强紫外吸收的流动相检测器线性范围几乎不到零，建议用无吸收的流动相或在流动相无吸收的波长下检测。
l.信号线故障主要是记录器和数据系统连接检测器的信号线引起的。要注意正负是否接对或线路松动、接触不良。另外就是有良好的接地装置。
m.内部自检没有通过，我们可以通过其提示信息参阅手册来解决，最好咨询厂家维护工程师。

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E. 荧光寿命拟合怎么扣除系统响应的影响

什么是荧光寿命？什么是荧光的淬灭
荧光寿命是由电子在与基态自旋多重度相同的稳定激发态的寿命决定的。
有很多机理可以改变这个寿命－－－系统间穿跃(intersystem
crossing),
淬灭(quench)，热驰豫(thermal
relaxation),
等。

F. X荧光分析仪的工作原理及特点

荧光，顾名思义就是在光的照射下发出的光。
从原子物理学的知识我们知道，对每一种化学元素的原子来说，都有其特定的能级结构，其核外电子都以各自特有的能量在各自的固定轨道上运行，内层电子在足够能量的X射线照射下脱离原子核的束缚，成为自由电子，我们说原子被激发了，处于激发态，这时，其他的外层电子便会填补这一空位，也就是所谓跃迁，同时以发出X射线的形式放出能量。由于每一种元素的原子能级结构都是特定的，它被激发后跃迁时放出的X射线的能量也是特定的，称之为特征X射线。通过测定特征X射线的能量，便可以确定相应元素的存在，而特征X射线的强弱（或者说X射线光子的多少）则代表该元素的含量。
量子力学知识告诉我们，X 射线具有波粒二象性，既可以看作粒子，也可以看作电磁波。看作粒子时的能量和看作电磁波时的波长有着一一对应关系。这就是着名的普朗克公式：E=hc/λ。显然，无论是测定能量，还是波长，都可以实现对相应元素的分析，其效果是完全一样的 原装进口电制冷探测器，可以快速分析从11Na到92U之间的全部元素，精度高、测量时间短，它可以广泛用于有色矿山、钢铁、水泥、耐火材料、不锈钢、合金等领域
特点：
1. 同时分析元素周期表中由钠（Na）到铀（U）之间的全部元素；
2．可检测固体﹑液体﹑粉末，不需要复杂的制样过程；
3．分析测量动态范围宽，
SiO2 ≤0.04% AL2O3 ≤0.04%
Fe2O3 ≤0.04% CaO ≤0.04%
MgO ≤0.04% SO3 ≤0.04%
K2O ≤0.04% Na2O ≤0.04%
TiO2 ≤0.01% Cl- ≤0.001%
|KH| ≤0.01 |SM| ≤0.1 |AM| ≤0.1
4．采用原装进口国际最先进的探测器，它具有高分辨率、高计数率的特点，使测量时间短，1分钟内可以得到满意的结果；
5．采用原装进口信号处理线路，处理速度快，精度高，稳定可靠；
6．X光管采用高压激发，激发与测试条件采用计算机软件数码控制与显示；
7．探测器无需液氮保护，可以方便地应用到各个地方各个领域；
8．先进的真空自动控制及数字真空检测显示，自动化程度高；
9．具有样品自旋功能，降低样品表面不光洁及条纹的影响，可以应用于各类金属分析行业；
10．仪器装备有彩色液晶显示屏，可以实时监示仪器运行过程中的各个参数；
11．先进的仪器漂移自动修正，确保仪器长期稳定；
12．精确度高，稳定性好，故障率低；
13．采用多层屏蔽保护，辐射安全性可靠；
14． WINDOWS XP中文应用软件，独特先进的分析方法，完备强大的功能，操作简单， 使用方便,分析结果存入标准ACCESS数据库，便于与配料系统联网。 1．多功能置样装置
A．样品种类：固体﹑液体﹑粉末﹑镀层。
B．样品托盘：可自动旋转的测量装置。
C．样品室的环境：可选择空气﹑真空﹑氦气。由软件自动控制，无需人工操作。
2. 激发系统
激发系统采用独特的倒置直角光学结构设计。以50KV的低功率X射线发生器作为激发源，从X射线管产生的初级X射线通过滤光片后直接激发样品，通过选择激发条件更能获得最佳的分析结果。由高电压发生器，X射线发生器及数码控制显示系统等电子线路部分构成。
A.高电压发生器：电压与电流采用软件自动数码控制及显示。
X射线稳定度：0.2%/8小时。
电压范围：0V至50kV连续可调。
电流范围：0mA至1mA连续可调。
B. X射线发生器：采用韧致辐射型﹑低功率﹑自然冷却﹑高寿命的X光管，并根据实际应用需要选择靶材。对轻元素Na、Mg、Al、Si、S等具有高激发效率。
3．X射线探测系统
国际领先的X射线探测系统,电制冷高分辨率高计数率探测器：薄窗对Fe 5.9keV的X射线计数率为 1000CPS时的分辨率为140eV。对轻元素Na、Mg、Al、Si、S等具有高灵敏度与分辨率。
4. 高级原装能谱仪电子学系统
原装进口的放大器等信号处理器：适应高分辨率﹑高计数率，具有国际先进水平；自动调整放大倍数，2048道地址；
5．微机分析系统
A．高级名牌商用机；
B．19寸高分辨率彩色液晶显示器；
C. HP激光打印机。
6．软件
A．操作：WINDOS XP操作系统软件，，使用方便。
B．功能：能谱显示，分析元素设置，能量刻度，X光管高压、电流自动控制，样品盘自动旋转控制，自动真空控制，与其它计算机通讯，标准数据库结果存放；
C．分析方法：线性拟合，二次曲线，强度校正，含量校正，基本参数方法。
D．仪器的漂移自动修正：保证仪器的分析结果长期稳定。
7. 电源
220V 50HZ 交流电
8. 仪器的安全性：本仪器的放射性安全指标完全符合国家标准,在仪器外壳5cm处的剂量小于5μSv/h。
9. 本仪器对水泥生料含量的重复测量精度
S(Al)<0.04 S(Ca)<0.06
S(Si)<0.05 S(Fe)<0.03 钢铁行业：生铁、炉渣、矿石、烧结矿、球团矿、铁精粉、铁矿石等。
水泥行业：生料、熟料、水泥、原材料等。
耐火材料:主要包括高硅质的粘土类、高铝质的矾土类、高镁质的镁砂类、高铬质类、各类刚玉等耐火材料。
有色行业：铝厂各类样品、铅锌矿、铜矿、锡矿、银矿、钼矿等。
电气电子产品行业：针对ROHS六种有害物质检测，主要包括：白家电，如电冰箱、洗衣机、微波炉、空调、吸尘器、热水器等；黑家电，如音频、视频产品、DVD、CD、电视接收机、IT产品、数码产品、通信产品等；电动工具，电动电子玩具、医疗电气设备等。
食品行业：食品中重金属浓度分析。
考古学：古物年代鉴定。
艺术品修复：颜料中金属成分分析。