灵芝成分的提取分离方法研究

㈠ 灵芝提取物的相互区别

灵芝提取物（也称灵芝精粉）是适时采收成熟的新鲜子实体，烘干后采用热水浸提（或酒精提取）、真空浓缩、喷雾干燥等工艺，得到的灵芝浸膏粉，是灵芝粉高倍浓缩而成的灵芝精华。
灵芝精粉由于采用的原料和提取工艺的不同，质量有很大差异。从原料上讲，用带孢子粉的椴木赤芝子实体为原料提取出来的精粉质量最好，采收过孢子粉的椴木赤灵芝质量次之，袋料赤灵芝提取的灵芝精粉质量较差；从提取工艺上讲，用酒精提取的成本要比水提的高，质量也更好。生产1公斤好的灵芝精粉大约需要25公斤灵芝干品，即每1克灵芝精粉的药用价值相当于25克原木灵芝。因此，灵芝精粉是灵芝原料中的高科技产品之一，具有更高的药用价值，以此为原料开发出来的产品大都属于高档产品。但是，有些厂家为了能让自己的产品具有价格优势，他们采取一些非常低级的方法，在提取灵芝精粉的时候，先在原料中掺入糊精或淀粉，这样也就是把糊精或淀粉当做灵芝精粉来买。灵芝精粉采购商切不可为了贪图小利，而忘记了产品质量，本着为消费者负责的态度，别忘了“便宜没好货，好货不便宜”的道理。
灵芝提取物和灵芝精粉是两种概念:(个人不同意上述观点,用精粉来作提取物的概念)
灵芝提取物是选取灵芝,经固态发酵,提取其中有效成分而成
灵芝精粉是干燥后粉碎而成,
而者有质的区别.就是其中的营养成分,提取物所含与精粉也有很大的量的区别,提取物一吨灵芝的发酵提取
提取物的得率在4-6%之间,精粉不存在损耗问题.
一、灵芝提取物
灵芝提取物由灵芝工艺发酵提取，主要成分灵芝三萜类化合物和灵芝多糖。
二、灵芝多糖
灵芝多糖是灵芝中除三萜类外研究最深入最广泛的一类化合物。20世纪70年代对灵芝多糖的研究主要集中在多糖和多糖复合物组分的分离、制备和药理作用方面，到80年代和90年代则主要集中在灵芝多糖及多糖复合物的结构及其与功能的关系方面。
国内外已从灵芝中分离到200多个多糖体，灵芝多糖中除含葡萄糖外，大多数还含有阿拉伯糖、木糖、半乳糖、岩藻糖、甘露糖等其他单糖。在国内已测定的18个灵芝多糖均一体中，有5个肽多糖，4个葡聚糖，其余为杂多糖。据国外文献报道：从灵芝、紫芝、铁杉灵芝及其他他几种灵芝属真菌中分离到的100多种灵芝多糖中，有4种具有强烈抗肿瘤活性的多糖都是肽多糖。据研究，灵芝多糖结构中含有较多的糖苷键，可能是使其具有强烈药理活性的原因。
灵芝多糖类化合物是灵芝所含重要生理活性成分，深受医药科技工作者的重视，灵芝多糖可抑制肿瘤细胞的无限、快速分裂能力，目前，灵芝多糖已被用作治疗肿瘤的药物之一。现已证明：灵芝多糖还具有提高机体免疫力，提高机体耐缺氧能力，降血糖作用、降血脂作用、抗放射和抗衰老作用。
三、灵芝三萜类化合物
最早从灵芝子实体中分离到的三萜类化合物是Kubota等，1982年分离出灵芝酸A和灵芝酸B之后，三萜类化合物的研究日益受到重视。1988年以前已分离得到105种三萜类化合物，到20世纪90年代，研究人员又陆续从子实体或孢子中分离得到了一些新的三萜化合物。从赤芝中分离出灵芝内酯（Ganolactone）和灵芝酸DM[3，7-二酮基-8,24(E)-二烯-羊毛26-酸]。
四、灵芝多糖用途
近些年，随着对灵芝的开发和研究的深入，对灵芝多糖特殊的药用价值有了新的认识。灵芝有效成分的分析及药理作用研究也已引起了国际上的关注，尤其在日本、美国、韩国等国家。
灵芝多糖是从灵芝中提取的有效成分，其功效显着，保健价值极高，可做为灵芝多糖胶囊、片剂、冲剂等各类保健品、功能性食品、饮料的原料。

㈡ 灵芝及灵芝孢子含哪些化学成分

灵芝的化学成分复杂，目前已知含有多糖（肽）类、三萜类、核苷类、生物碱、氨基酸及微量元素等。

（1）灵芝多糖

有水溶性多糖、酸性多糖和碱性多糖。灵芝多糖以杂多糖为主，主要含有D-葡萄糖、D木糖、D-甘露糖、D-半乳糖、D-岩藻糖、L-阿拉伯糖、L-鼠李糖等单糖组成。

（2）三萜类化合物

是从灵芝中分离得到的另一类具有生物活性的主要有效成分，目前已从灵芝中分离得到100余种三萜类化合物，多数为高度氧化的羊毛甾烷衍生物。主要有：灵芝酸（gandenic acid） A、B、C、D、E、G、I、L、a、DM、ma、mb、me、md、mg，赤芝酸（ lucinic acid） A、B、C、D、E、F、O，灵芝-22-烯酸，灵芝草酸，丹芝酸，灵芝孢子酸，赤芝孢子内脂A、B，灵芝醇，丹芝醇A，环氧灵芝醇A、B、C等。

（3）核苷类

组成RNA、DNA必不可少的重要物质。灵芝中含有尿嘧啶、腺嘌呤、腺苷、尿苷等成分。

（4）生物碱类

从灵芝子实体或孢子粉中分离得到胆碱、甜菜碱、γ-三甲胺基丁酸、灵芝碱甲和灵芝碱乙等。

（5）氨基酸类

灵芝子实体中含有18种氨基酸，其中人体必需氨基酸的相对含量高于50%。

（6）微量元素

灵芝子实体中含有锰、铬、铜、铁、钙、钾、镁、锌、硒、锗等多种微量元素。有些微量元素（如锗和硒）对灵芝多糖的抗肿瘤作用有协同作用。

灵芝孢子的化学成分可分为以下几类：蛋白质和氨基酸类、糖肽类、维生素类、胡萝卜素、甾醇类、三萜类、生物碱类、脂肪酸类、内酯和无机离子等。灵芝孢子蛋白质含量达18%，其中异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、胱氨酸、苯丙氨酸等机体必需氨基酸的含量非常丰富。灵芝孢子中富含多糖和寡糖。从灵芝孢子粉的酸性提取物中分离到了一些三萜类化合物，他们是赤芝孢子酸A、B、C和E。灵芝孢子中的脂肪酸类有二十四烷酸（C）、硬脂酸（C）、棕榈酸（C）、二十二烷酸（C）等。内酯类属五环三萜内酯，有赤芝孢子内酯A和B。生物碱类有胆碱、甜菜碱和硫组氨酸甲基内胺盐。灵芝孢子中的无机元素有钙、磷、铁、镁、钠、锗、硒等，其中有机锗与人体健康和疾病的防治有密切的关系。

㈢ 我有朋友送的灵芝，不知道灵芝有什么功效

灵芝的应用范围非常广泛。就中医辩证看，由于本品入五脏肾补益全身五脏之气，所以无论心、肺、肝、脾、肾脏虚弱，均可服之。灵芝所治病种涉及呼吸、循环、消化、神经、内分泌及运动等各个系统；涵盖内、外、妇、儿、五官各科疾病。其根本原因，就在于灵芝扶正固本，增强免疫功能，提高机体抵抗力的巨大作用。它不同于一般药物对某种疾病而起治疗作用，亦不同于一般营养保健食品只对某一方面营养素的不足进行补充和强化，而是在整体上双向调节人体机能平衡，调动机体内部活力，调节人体新陈代谢机能，提高自身免疫能力，促使全部的内脏或器官机能正常化。其明显表现在如下方面 一、 抗肿瘤作用 自身免疫功能的低下或失调，是肿瘤之所以会发生并扩展的重要原因。灵芝是最佳的免疫功能调节和激活剂，它可显着提高机体的免疫功能，增强患者自身的抗癌能力。 灵芝可以通过促进白细胞介素-2的生成，通过促进单核巨噬细胞的吞噬功能、通过提升人体的造血能力尤其是白细胞的指标水平，以及通过其中某些有效成分对癌细胞的抑制作用，成为抗肿瘤、防癌以及癌症辅助治疗的优选药物。 灵芝对人体几乎没有任何毒副作用。这种无毒性的免疫活化剂的优点，恰恰是许多肿瘤化疗药物和其它免疫促进剂都不具有的。 二、 保肝解毒作用 灵芝对多种理化及生物因素引起的肝损伤有保护作用。无论在肝脏损害发生前还是发生后，服用灵芝都可保护肝脏，减轻肝损伤。灵芝能促进肝脏对药物、毒物的代谢，对于中毒性肝炎有确切的疗效。尤其是慢性肝炎，灵芝可明显消除头晕、乏力、恶心、肝区不适等症状，并可有效地改善肝功能，使各项指标趋于正常。 所以，灵芝可用于治疗慢性中毒、各类慢性肝炎、肝硬化、肝功能障碍。 三、 对心血管系统的作用 动物实验和临床试验均表明，灵芝可有效地扩张冠状动脉，增加冠脉血流量，改善心肌微循环，增强心肌氧和能量的供给，因此，对心肌缺血具有保护作用，可广泛用于冠心病、心绞痛等的治疗和预防。 对高血脂病患者，灵芝可明显降低血胆固醇、脂蛋白和甘油三脂，并能预防动脉粥样硬化斑块的形成。对于粥样硬化斑块已经形成者，则有降低动脉壁胆固醇含量、软化血管、防止进一步损伤的作用。并可改善局部微循环，阻止血绣聚集。这些功效对于多种类型的中风有良好的防治作用。 四、 抗衰老作用 灵芝所含的多糖、多肽等有着明显的延缓衰老功效。此功效主要基于以下机理 1、促进和调整免疫功能。对于成年人和老年人而言，这种促进和调整可明显延缓衰老。对于处于生长发育阶段的少年儿童而言，则可促进其免疫功能的完善，增强抗病能力，确保其健康成长。 2、调节代谢平衡，促进核酸和蛋白质的合成。研究表明，灵芝能促时血清、肝脏和骨髓的核酸及蛋白质的生物合成，因此可以有效地抗病防衰老。观察表明，服用灵芝以抗衰老，不仅对老年人有益，对务年龄阶段的人士都适用，因为生长发育的过程，也就是走向衰老的过程。 3、抗自由基作用。生物体所产生的内原性防卫自由基损伤的抗氧化剂或抗氧化剂化酶类物质（如超氧化物歧化酶，sod）的降低，是人体衰老的一个原因。灵芝多糖有显着的拟sod活性，可显着清除机体产生的自由基，从而阻止自由基对机体的损伤，防止了脂体的过氧化，保护了细胞，延缓了细胞衰老。 4、灵芝多糖能显箸促进细胞核内dna合成能力，并可增加细胞的分裂代数，从而延缓了机体的衰老。 五、 抗神经衰弱作用 汉方中，灵芝就已用于神经衰弱症与失眠，故它对中枢起到良好的作用。提取物能激发运动性抑制，使运动性降低，使协调运动失调、呈现用量依赖性镇病效果，对环已巴比妥睡眠作用能缩短睡眠时间，能延长中枢兴奋药咖啡因致痉挛及死亡的时间，这些结果表明，灵芝对中枢呈抑制性作用。 祖国医药所载灵芝能安神"、"增智慧"、"不忘"。据报道，灵芝制剂对神经衰弱失眠有显着疗效，总有效率高达87.14%～100%。一般用药后10～15天即出现明显疗效，表明为睡眠改善，食欲、体重增加，心悸、头痛、头晕减轻或消失，精神振奋，记忆力增强。属气血两虚者疗效更好。所以，灵芝对于中枢神经系统有较强的调节作用，具有镇静安神的功效，对于神通衰弱和失眠患者是必备佳品，国家药典中，灵芝就是有效的安眠宁神之药。 六、 治疗高血压 灵芝可使麻醉兔的血压降低，收缩压和舒张压分别为15%和25%，亦可使神经活动受到抑制，抑制率分别为20%和40%。据某医院报告，使用灵芝液治疗18例高血压患者，总有效率达88.9%。灵芝的降压作用与产感神经传出阻滞有关。另一报道，用灵芝制剂治疗高积压30例，总有效率为88.3%。同时，灵芝能延长和稳定其它降压药物的效果。 七、 治疗糖尿病 灵芝降血糖的成分为ganoderanb及降血糖之原理是由于促进组织对糖的利用。服用灵芝后可取代胰岛素抑制脂肪酸的释出，可改善血糖、尿糖等症状。血糖由173降至116，胆固醇由233降至179，β-蛋白由580降至465。灵芝中的水溶性多糖，可减轻非胰岛素依赖型糖尿病的发病程度。日本numata kenji生产的灵芝保健食品，已广泛使用治疗糖尿病患者。 八、 对慢性支气管炎、支气管哮喘作用 灵芝有显着的镇咳祛痰及平喘作用，对于缓解此种疾病的咳痰、喘的症状及防止喘息发作有显着效果。其免疫促进作用，又可有效防止反复的感冒，从而减少此病的复发。本品对中医分型属于虚寒型及痰湿型者疗效较好，肺热型和肺燥型则效果较差。其总有效率在80%左右。 九、 抗过敏作用 当机体受某种抗原侵袭导致免疫功能亢进，产生各种变态反应或免疫性病理损害时，灵芝能抑制亢进的免疫水平，保持机体自身的稳定。实验证明灵芝可阻断过敏反应介质的释放，防止过敏反应的发生，因此，对于目前治疗较困难的变态反应性或自身免疫性疾病。如过敏性哮喘、红斑狼疮、肾炎、过敏性鼻炎、多种顽固性皮肤病等都可起到较好的效果，并可部分对抗某些疾病患者因长期使用激素而出现的毒副作用。 十、 美容作用 1. 改善微循环 人们的皮肤随着年龄的增长而变得粗糙，产生皱纹（具体到每个人可能因体质、工作环境、护理方式不同而有所差异），但机体生理机能的衰弱造成皮肤新陈代谢发生变化是面容衰老的主要因素之一。 微循环（microcirculation）这个名词是1954年在美国召开的第一届国际微循环会议上正式提出的。指微（细）动脉和微（细）静脉之间微血管的血液循环。是循环系统中最基层的结构，基本功能是向全身各脏器、组织、细胞运送氧气和营养物质，带走代谢产物，及时调节组织间液、淋巴液和血管内液之间的平衡。灵芝腺苷及腺苷衍生物抑制血绣肌醇——磷酸（ip）的磷酸化，导致磷脂酰肌醇4-磷酸（pip）和磷脂酰肌醇4,5-二磷酸（pip2）生成的减少，抑制了血绣机动蛋白的聚合，从而降低了血液粘度。腺苷及腺苷衍生物还能提高血红蛋白2,3-二磷酸甘油的含量，提高血液供氧能力。能促进毛细血管瓣的开放，导致微循环灌流量增加，改善人体血液循环，防止血栓病，如血液不畅、机体无力等疾病。从而对改善和保护组织及脏器功能十分有利，机体的健康通过皮肤表现为肤色变白、透红、滑润有光泽。 2．清除皮肤色素 随着增龄，出现白发和秃发，或者二者兼有。皮肤出现皱纹，面部及手背部出现褐色斑点，称为老年斑或寿斑。皱纹的出现是因为胶原质及弹力蛋白（皮肤里提供弹力的蛋白质）的损耗减少。灵芝中含有抑制黑色素的成分及含有多种对皮肤有益的微量元素。通过减少人体自由基，加速细胞的再生，改善微循环，增强皮肤的厚度，并增加胶原质（胶原质是将细胞聚合在一起的黏胶”）。达到丰润皮肤、消除细纹与皱纹的效果。对部分老年人群服用跟踪调查表明老年人服用后老年斑减少，面色红润富有弹性有光泽。通过研究还发现，灵芝中的有效成分可以将系结细胞与皮肤上的结合剂”加以松绑，使坏死细胞的上层部分脱落得更平坦、更快速，消除皮肤垃圾，使底层的细胞显得较平滑，从而达到改善皮肤的光泽和纹理的效果。 3. 提高身体机能 保持年轻态 中医传统理论认为，人体生理机能正常时，面部的色泽表示人体精神气血津液的充盈与脏腑功能的正常。虽然由于各人体质、所处环境不同而略有差别，但精气内含则容光焕发。外在美容是一种手段，内在的养生，保持生理机能的年轻，则是养颜的基础。通过养生而养颜，不仅能延缓机体机能的衰老，而且从形体到容颜上，都可以保持青春的光彩。通过大量的临床实践，外在的色泽变化不仅与相应的脏腑病变有关，而且反应了一定的病邪的性质。如青色常反映肝的病变，赤色常反映心的病变，黄色常反映脾胃病变，白色常反映肺的病变，黑色常反映肾的病变。另外，各种皮肤疾病也是内在各种脏腑功能失调的一种表现，临床上通过调理内在脏腑的功能，可达到治疗皮肤病的目的。从这些意义上讲，治病与美容，养生与养颜是密不可分的。只有内在的脏腑功能正常，人体才能真正达到容光焕发，青春永驻。 灵芝可以扶正固本，扶正祛邪。正”就是体质，就是抗病力，邪”就是疾病。灵芝可以调理机体内部脏腑的功能，理通经脉，维持人体内环境平衡，养血补气，而达到去斑、抗皱、美容的目的，目前，较流行的方法是将灵芝剪成黄豆粒大小，用水煮煎，加热蒸发浓缩，直接涂于皮肤色素处，可达到明显的去斑效果。灵芝与蜂蜜、甘油、单甘脂混合外搽皮肤，能滋养皮肤，使皮肤滑爽。以灵芝为主要成分的养发产品具有加速头发生长、去头皮屑的作用。 十一、灵芝还能预防爱滋病 根据日本富山医药大学的masao hattori 博士的研究报告，从灵芝中分离出的某些组分可以抑制爱滋病病毒hiv的生长。报告摘要如下从灵芝子实体甲醇提取液中分离出一种新的高度氧化的三萜物质及十二种已知化合物。化合物的结构已经由分光光度法包括2d-核磁共振测定。ganoderiol f，ganodermanontriol，ganoderic acid b，ganoderiol b，ganoderic acid c1，3b-5a-dihydroxy-6b-methoxyergosta-7，22-diene，ganoderic acid h，ganoderiol a 具有抗爱滋病病毒的作用。 十二、太阳黑子、手机辐射和灵芝 太阳黑子活动强烈 时，大量射线穿越太空到达地球，专家建议夏天应尽量避免太阳直晒。在减少外出和防止太阳直射的同时，服用灵芝和灵芝孢子粉也是防辐射的好办法。科学实验证明，灵芝含有多种生理活性物质，能够调节和提高人体的免疫力，提高人体的白细胞数量，从而有效地消除辐射对人体造成的桅。手机渐渐普及起来，关于手机的辐射问题人们也担心了许多年，同样人们看电视的时间多了，在电脑前工作的时间长了，人体都会受到一定的辐射，建议长期服用灵芝和灵芝孢子粉，以提高人体内在的抗辐射能力。 除此之外，在其它方面，灵芝还有众多卓越的功效，如可刺激骨髓造血，升高白血球，可用于各种原因（如放射线药物、血液性）引起的白细胞减少症；通过提高机体的免疫能力，抵抗顽固性病毒如艾滋病的侵袭；还可帮助机体，提高对各种不良环境（如高原缺氧等）的耐受性；以及可抑制子宫平滑肌过度收缩，治疗功能性子宫出血；此外对视网膜色素变性，脑发育不全症，进行性肌营养不良和萎缩性肌强直症，灵芝都具有很显着的临床疗效。再者，进一步研究揭示，灵芝还有好的镇痛作用，对头痛，腰痛、神经痛、癌症疼痛等都有良好

㈣ 树舌灵芝的成分

包括多糖、甾体化合物、三萜、脂类、氨基酸、多肽、蛋白质类、生物碱类、酚类、内酯、香豆素类和甙类以及微量元素等。
国内外首次采用树舌灵芝MP-01提取物进行抗SARS病毒研究的课题——“树舌灵芝生物学特性及其活性物质的研究”顺利通过鉴定，该课题由我校宋爱荣研究员主持，研究发明了具有自主知识产权的抗病毒活性新产品及其制备方法。12月22日，受山东省科学技术厅委托，省教育厅邀请有关专家组成鉴定委员会，在我校完成了对该项目的验收鉴定。宋希云副校长参加了鉴定会。
鉴定委员会由中国科学院院士、中国科学院微生物研究所魏江春研究员等九名专家、教授组成。专家们参观了实验室及中试现场，对研究项目进行了中试验收。专家认为，该项目购买了二级纯水制备、应用真菌液体发酵、提取、纯化、干燥及胶囊包装设备，并建设了1440平方米的中试车间。项目工艺设计合理，技术路线可行，中试技术资料齐备完整，测试数据准确可靠。
鉴定委员听取了项目研究的技术工作报告、中试技术报告，审查了数据资料，进行了专家质询等工作，最终形成了对该项目的鉴定意见。专家组鉴定认为，该项目在国内外首次采用树舌灵芝MP-01提取物进行抗SARS病毒研究研究，发明了具有自主知识产权的抗病毒活性新产品及其制备方法；研究获得了树舌灵芝菌株MP-01，并对该菌株进行了菌种鉴定，将其确立为树舌有柄灵芝；研究采用树舌灵芝MP-01进行了液体发酵、中试液体发酵及发酵全液活性物质提取，确立了最佳发酵培养基配方、液体发酵中试技术参数，解决了天然树舌资源匮乏问题；建立了树舌灵芝发酵液活性物质的提取工艺，确定了树舌灵芝发酵液和粗多糖中多糖及淀粉的分离和测定方法。
此外，该项目还研究了树舌灵芝MP-01多糖中的单糖组分分析和分子量分布，提出树舌灵芝多糖是以β-葡聚糖为主链的杂多糖；项目所进行的树舌灵芝多糖的红外光谱测试和核磁测试，为研究多糖的结构提供了实验依据；项目申请了抗SARS病毒活性物质制备方法的国家发明专利，研究了树舌灵芝MP-01提取物抗流感乙病毒、抗烟草花叶病毒、病毒免疫调节和急性毒性实验，发现了树舌灵芝提取物在抗病毒方面的药理活性，为开发新药和临床研究奠定了基础。

㈤ 灵芝都含有哪些成分

灵芝除了含有钙、铁、钾、镁、钠、锌、铜、锰等十几种元素和对人体有益的十七种氨基酸等营养成份外，还含有机锗、高分子多糖、腺嘌呤核苷、灵芝酸、生物碱等十余种有效成份。
灵芝中的有机锗能使血液循环畅通，增加红血球携带氧的能力，延缓衰老，并能与体内污染物、重金属相结合形成锗化合物排出体外。锗还有调整人体不正常电位的功能，在癌细胞电位剧烈上升时，锗元素会夺取癌细胞的电子，使它电位下降，抑制病症的恶化。灵芝中锗的含量是人参的4-6倍，枸杞的100倍。
高分子多糖是灵芝中提高人体免疫功能、扶正固本的主要成份。它能提高肌体免疫力和肌体耐缺氧能力，消除自由基，抑制肿癌，抗放射，提高肝脏、骨髓、血液合成DNA、RNA和蛋白质的能力，从而延长寿命。灵芝中的腺嘌呤核苷，是一种较强的血小板凝聚抑制剂，具有保障血液畅通，增加冠状动脉血流量和心肌收缩力，降低心肌耗氧量的功能，从而可保障脑部血液的供应量。食用灵芝还能把氧带入细胞中，使人体增加含氧量。
灵芝中的灵芝酸，具有抑制细胞组织胺的释放，增进消化器官机能，降低血中胆固醇、三甘油脂、β脂蛋白的功能，从而能抑制血小板凝结，帮助血液流通，消除血栓，促进血液循环，调整血管压力，增加新陈代谢，使身体达到平衡健康的状况。
灵芝中的生物碱是具有重要生理活性的物质。它具有改善冠状动脉血流量、降低心肌耗氧量、增强心肌及机体对缺氧的耐受性和降胆固醇的作用，对心脑血管疾病、高血压、高血脂症、肝炎和肌无力症有一定的治疗作用。

㈥ 如何进行灵芝菌种的组织分离

灵芝菌种的组织分离法：是利用灵芝的子实体在适宜的条件下能生长出菌丝的特性，来分离获得纯菌种的方法。操作简便，取材方便，在野外采种或室内分离纯菌种时都可采用此法。组织分离是一种无性繁殖，菌丝的细胞是双核细胞，双核菌丝中的两个核还未进行核配，即双亲染色体并没有发生重组，所分离获得的菌种是该灵芝的营养世代，容易产生变异。在适宜的营养和培养条件下，选择典型的菌落进行培养，菌株则可保持其原菌种的优良品质，否则，其性状往往会发生变异。

（1）分离材料的选择与消毒

在野外采集野生灵芝时，应根据采集的目的要求选择优良的个体进行分离。分离人工栽培的品种时，则应从优良品系中选择优良的单株作材料。

灵芝组织分离时先应将分离材料用清水冲洗干净，去掉泥沙或污物，用纱布擦干水分，即可移到无菌室进行分离前的消毒处理。通常，灵芝子实体可在0.1%的升汞液中浸泡1～2分钟，或用75%的酒精表面擦拭消毒。

（2）分离方法

将要分离的子实体放入无菌室内，用无菌水冲洗数次，进行表面消毒，随即用消毒过的解剖刀从菇柄中部纵切一刀，撕开，挑取菌盖和菇柄交界处的一小块组织，移接到PDA斜面培养基上，加上棉塞，于25℃下培养，即可得到该菌的菌种。

㈦ 提取率的计算

首先要按照药典的方法测量银杏叶药材中指标成分或者总黄酮的含量，再按照提取方法提取黄酮，假如说1g银杏叶提出的黄酮为1mg，而药典方法为1g出2mg黄酮，那么提取率就为1/2=50%。

第一种方式是计算提取物单位体积中的有效成分或标志物含量，首先要设定有效成分或标志物的检测方法，提取之后对有效成分或标志物进行含量检测，计算出单位体积的毫克数，即为提取率。

第二种方法是计算提取物单位体积中固体物质的含量，可以对提取物抽样，干燥后称重，计算体积与固体物的重量比，即为提取率。

(7)灵芝成分的提取分离方法研究扩展阅读：

提取率就是所提取出来的物质所占理想状态下全部提取的比率。如，从水中提取二氧化碳，若是二氧化碳在水中的质量分数是2%，当完全分离二氧化碳就是提取率是100%，若是只提取1%，那提取率就是1% / 2% = 50% 检测植物提取物成分方法：药材比例法，本法系指成品若干ml或g相当于原药材若干重量的表示方法 。

大多数制剂都可以用这种方法表示，此法适用于药材成分不明确的制剂，只能作为含量表示的一种过渡方法 ，所以这类制剂必须有固定成熟。

㈧ 研究性学习研究某些植物的药用价值

灵芝，又名瑞草，芝草，是我国传统的药食两用的珍贵保健药。祖国医学对灵芝的药效研究源远流长，自古以来被认为有起死回生的功效，是名贵药材中的极品，远在周朝《列子》一书中就有“朽壤之上，有南芝者”。东汉时期的《神农本草经》中载有：“益心气”、“安精魂”、“补肝益气”、“坚筋骨”、“好颜色”等功能。明代李时珍的，《本草纲目》对灵芝做如下描述：“苦、平、无毒。主治心中结，益心气。补中、增智慧、不忘。久食轻身不老。灵芝是担子菌纲，多孔菌科，灵芝属真菌。一般供药用的主要是赤芝（Ganoderma lucim）和紫芝（Ganoderma japonim）。研究表明，灵芝的组成成分复杂，具有多种有效成分和广泛的生物学作用，能治疗多种疾病。本文就灵芝的有效成分和生物活性特别是灵芝多糖的生物活性及提取方法作一综述。1.1灵芝的有效成分和生物活性 研究证明,灵芝含有多糖、氨基酸、蛋白质、多肽、甾类、有机酸、挥发油、油脂、生物碱、长链烷烃以及我种酶和无机离子。经研究不同品种灵芝，同一品种的不同生长阶段，野生与人工培养灵芝，所含的化学成分不同。1.1.1灵芝多糖 灵芝多糖（GLP）是灵芝的主要活性成分，其种类很多，主要有葡聚糖、杂聚糖、半乳糖、甘露糖、甘露岩藻半乳聚糖、阿拉伯糖、阿拉伯木质葡聚糖等。灵芝中多糖的含量因灵芝品种、提取方法与多糖的纯度等不同而有较大差异。灵芝多糖目前已分离到的有200多种，其中大部分为B-型的葡聚糖，少数为A-型的葡聚糖，多糖链由三股单糖链构成，是一种螺旋状立体构形物，其立体构形和DNA、RNA相似，螺旋层之间主要以氢键固定定位，分子量从数百到数十万，除一小部分小分子多糖外，大多不溶于高浓度的酒精中，在热水中溶解，大多存在于灵芝细胞壁内壁。液体培养的发酵液和固体培养基中有灵芝菌丝分泌的胞外多糖。胞内多糖胞外多糖都是有效多糖。灵芝多糖大多为异多糖，即除含有葡萄糖外，大多还含有少量阿拉伯糖、木糖、岩藻糖、鼠李糖、半乳糖、甘露糖等其它单糖。单糖间糖苷键连接有（1à3），（1à4），（1à6）数种。多数有分枝，部分多糖含有肽链，多糖分枝密度高或含有采访链的其药理活性一般也比较高。灵芝多糖结构中含有较多的糖苷键可能是使其具有强烈药理活性的原因。灵芝多糖是灵芝中最有效的成分之一，因此，也特别受到医学科技工作者的重视，研究报导也最多，现知灵芝多糖有广泛的药理活性，能提高机体免疫力，能提高机体耐缺氧能力，消除自由基，抑制肿瘤，抗放射，提高肝脏、骨髓、血液合成DNA、RNA、蛋白质能力，延长寿命等。灵芝的多种药理活性大多和灵芝多糖有关。1.1.2灵芝酸 灵芝酸（Ganodenic acid）是灵芝的另一主要活性成分。灵芝酸是一种三萜类物质，基本构造为数个异戊烯首尾相连构成，大部分为30个碳原子、部分为27个碳原子。灵芝酸有四环三萜和五环三萜二类。各种灵芝中已分离到的灵芝酸已达100多种。灵芝酸是灵芝的苦味成分的主要来源，可以作为鉴定灵芝品种的依据之一。灵芝酸在不同种的娄芝中或同一品种培养基培养的及不同生长阶段的子实体中，其含量是不同的，所以其苦味程度也有所不同，一般味苦的娄芝其灵芝酸含量往往较高。日本对灵芝商品及灵芝制成品的灵芝酸含量十分重视，认为灵芝酸含量高，灵芝产品质量就好。灵芝酸有强烈的药理活性，有止痛、镇静、抑制组织胺释放、解毒、保肝、毒杀肿瘤细胞等功能，是灵芝的主要有效成分之一。灵芝酸能抑制大鼠巨细胞释入组织胺，抑制血管紧张肽转化酶的活性，降低血压，灵芝酸还能抑制大鼠肝细胞从24，25-二氢羊毛甾醇合成胆固醇，可以用来防治动脉粥样硬化和心脏病。Jorgel等从赤芝提取的几种灵芝酸具有细胞毒性，能杀伤体外培养的肝癌细胞。1.1.3各种元素 灵芝中含有多种元素。不同品种灵芝中元素的种类和含量略有差异，人工培养的灵芝与野生灵活子中的元素种类和含量也不一致。等离子体发射光谱分析(IPC)结果表明：灵芝浸膏中含有25种元素，其中Ca,Mg,P,Fe,Zn,Cu,Ni,Co,Cr,Mo,Li,B,V,Sn,Ge,Sr,Ti,Se等19种为人体必需或有益的常量或微量元素，原子吸收光谱分析（AAS）结果表明：灵芝浸膏粉中含有丰富的钙（2330ppm）、镁（2440ppm）、磷（45000ppm）、及铁（390ppm）、锰（156ppm）、锌（55.3ppm）、锗（25.0ppm）等，这些元素为人体正常生长发育所必需或在人体内起重要的保健作用。已知，Fe,Ca,Zn,Mn等有养血益肝、补肾之功效；Zn,Cu,Mn,Li等微量元素与活血化淤、益气安神等功效有关；微量元素Ti对预防心血管系统疾病起重要作用；此外，Ge,Se,Mn,Cu,Mo,Cr,Ni,等微量元素与人本抗衰老、抗癌等密切相关。在灵芝的菌丝体和发酵液中，磷的含量相当丰富，磷具有镇静安神的作用，灵芝对神经衰弱和顽固失眠的疗效与磷的作用有着密切关系。文献报道，担子菌纲多孔菌中有机锗的含量高达800—2000mg/kg，它有抑制多种肿瘤的生长，调节免疫功能等作用，因此有人认为灵芝中的有机锗有某种生理活性。但文献报道灵芝中的有机锗含量差异很大，不同产地的野生灵芝，人工培养与野生灵芝的有机锗含量均不相同。野生灵芝中有机锗的含量一般都很低，有的甚至不能检出。有一日本作者报道，不同地区和生长阶段的灵芝，有机锗含量为13—78ug/kg，而水提物中未检出。这证明，灵芝水提物的生物学作用与锗无关。中国医学科学院药物牵研究所有人将有机锗加入深层发酵培养菌丝体的培养液中，可使菌丝体中有机锗的含量显着增高。由此可见，对于人工培养的灵芝，无论是子实体还是菌丝体，都可以根据人们的需要认为的在培养基中加入某种成分，而使灵芝中该成分的含量显着提高。1.1.4生物碱 灵芝腺苷是一种活性很强的物质，是灵芝的主要有效成分之一。灵芝含有腺嘌呤和腺嘌呤核苷，尿嘧啶和尿嘧啶核苷。灵芝有多种腺苷衍生物，都有较强的药理活性，能降低血液黏度，抑制体内血小板聚集，能提高血液供氧能力和加速血液微循环，提高血液对心、脑的供氧能力。Akira Shimizu 等报道，腺嘌呤核苷是赤芝水提取物抑制血小板凝集的有效成分。动物实验表明，尿嘧啶和尿嘧啶核苷对实验性肌强直症小鼠血清醛缩酶有降低作用。紫芝中含有五种生物碱，一种为Y-三甲胺基丁酸，在窒息性缺氧模型中，有提高存活时间的作用，并能使离体豚鼠心脏冠状动脉流量增加。1.1.5其它 灵芝中含有少量蛋白质、多肽、氨基酸。赤芝孢子内脂A有降胆固醇的作用。赤芝孢子酸A有降转氨酶作用。灵芝、紫兰、薄树芝中的薄醇醚，灵芝孢子中的孢醚，可使部分切除肝脏的小鼠的肝脏再生能力增强。灵芝纤维能降胆固醇，预防动脉粥样硬化、便秘、糖尿病、高血压、脑血栓等。余竟光等从薄盖灵芝深层发酵菌丝体中分离到4种呋喃衍生物。药理实验表明其中5-羟甲基呋喃甲醛有抑制血小板聚集的作用。曾惜春等从当归分离得5-羟甲基呋喃甲醛，认为可能是扩张冠状动脉、提高小鼠心肌摄取铷的有效物质。此外，灵芝还含有多种长链脂肪酸、长链烷烃、甾类及多种酶类等，这些成分是否参与某处生理活性尚不清楚。1.2灵芝多糖的生物活性 1.2.1调节免疫 灵芝对免疫系统的影响是双向的：对抗病的特异性和非特异性免疫能力，灵芝有促进作用，而对致病的过敏反应，则有抑制作用。从两个不同角度加强了机体保持稳态、抵抗疾病的能力。此种双向作用的详细机制尚待阐明。但已可认为，调整免疫功能，抑制过敏反应也是扶正培本作用的重要内容。灵芝对支气管哮喘等与过敏有关的疾病有效，提示它可能有抑制过敏反应的作用。雷林生等控讨了GLP 对免疫抑制剂和抗肿瘤药引起的免疫作用的拮抗作用。结果表明，GLP 的拮抗作用的强度取决于这些药物的免疫抑致作用的程度，只有这些药物轻度抑致免疫反应时，GLP 才具有完全拮抗作用。1.2.1.1灵芝多糖对T细胞的影响灵芝多糖在体外直接活化脾淋巴细胞，但活化水平较低，远不如ConA或PHA的作用强，使活性E-玫瑰花结形成率增高。灵芝多糖体外协助ConA诱导的脾淋巴细胞转化，促进活化T细胞的增殖，其程度远远高于单用ConA和灵芝多糖T细胞增殖的和。但超过一定剂量时，这种促进作用消失，甚至显示出抑制作用。灵芝多糖对不同品系小鼠脾细胞的活化与增殖作用相似，对C3H、C57BL/6J、LACA、swiss等品系的小鼠脾细胞，均有显着的协同ConA诱导其转化的作用。体内给药，同样能明显促进ConA对小鼠脾淋巴细胞的活化增殖。灵芝多糖在体外能显着促进ConA诱导Th细胞产生淋巴因子IL-2和Y-IFN，但单独刺激小鼠脾细胞，只有微弱的活化作用。灵芝多糖超过一定浓度时，可Th细胞产生IL-2。其浓度比引直脾细胞拉殖抑制的浓度更低。灵芝多糖对荷S180肿瘤的小鼠IL-2活性亦有促进作用。赤芝和树舌多糖在体外能明显对抗氢化可的松和环磷酰胺对ConA诱导脾淋巴细胞转化增殖的抑制。体内给药能荷S180肿瘤小鼠的IL-2和-IFN活性降低。灵芝多糖对正常成年鼠和免疫功能衰退的老龄鼠显示出相同的活性。从赤芝提取的三种灵芝多糖能显着促进正常ConA诱导正常成年鼠和免疫功能衰退的老龄鼠的脾淋巴细胞增殖，使老龄鼠的脾淋巴细胞增殖接近正常成年鼠，显示出抗衰老的作用。平盖灵芝（树舌）多糖能显着增强甲基化的细菌a-淀粉酶和不完全的福氏佐剂（M-BaA-IF）引起的迟发性过敏反映,这一作用是由于此药能激活非特异性的具有扩大细胞免疫效应的T细胞所致,灵芝多糖成分BN3 C与 ConA 合用,可显着提高小鼠脾脏T细胞增殖,并部分对抗环磷酰胺对脾细胞增殖的抑制作用。灵芝多糖（GLP）是从灵芝菌培养物的菌丝体中提取的多糖。向小鼠腹腔连续注射大剂量的GLP（4/mg只，2mg/只）5天，对T细胞增殖、细胞表型的表达、T细胞诱生IL-2及B细胞产生溶血素抗体均有抑制作用：当适量的GLP（0.1mg/只，0.05mg/只）连续向小鼠腹腔注射5天，可明显增强上述免疫指标。表明GLP是一种生物反应调节剂，适量可增强机体的细胞及体液免疫功能，为临床应用GLP治疗免疫功能紊乱提供了理论依据。1.2.1.2灵芝多糖对B细胞的影响 赤芝多糖对抗SRBC空斑形成细胞的产生有促进作用，但对正常成年鼠作用不明显，而对免疫功能衰退的老龄鼠则有明显的促进作用。体外单独用赤芝多糖，对B细胞有轻度活化作用，高斌等报道，杩舌多糖能提高荷瘤鼠的NK细胞活性，并认为与抗肿瘤作用有关。1.2.1.3灵芝促进巨噬细胞的吞噬功能腹腔注射灵芝提取物，能促进腹膜渗出细胞、巨噬细胞和多型核白细胞的积聚。灵芝与氯喹合用，可以改善氯喹所引起的免疫抑制现象，显着增强腹腔巨噬细胞系统的吞噬功能。灵芝腹腔注射给药可使巨噬细胞的吞噬能力和巨噬细胞溶酶体酶的活性明显增强，并呈剂量反应关系。高斌等报道，树舌多糖有体外诱导小鼠腹腔巨噬细胞分泌IL-1样物质，较对照组增加约2倍。灵芝液及灵芝多糖连续给药，能提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红血球的活力。天噬百分率和吞噬指数均有提高。1.2.2抑制肿瘤 从不同品种或同一品种灵芝中提取的多糖，其抗肿瘤活性因提取方法、多糖的种灯和纯度等不同而有很大差异，其有效剂量（相当于生药）也有很大差异。口服多糖的有效剂量要比腹腔注射大得多，同等剂量时，口服一般不显示任何活性，因此各作者均采用腹腔注射给药。不同灵芝的不同多糖，其抑瘤率差异很大，与生药的有效剂量相差几十至几百倍。日本学者从灵芝中提取的多糖对S-180肉瘤有抗肿瘤作用，能抑抑制瘤细胞增殖。关洪昌等发现，灵芝多糖D6对小鼠艾氏腹水癌也有一定抑制作用。1.2.3对核酸、蛋白质合成的影响 核酸，蛋白质是生命的物质基础，体内一切重要的生命过程都与核酸，蛋白质发生联系，有的灵芝多糖能促进核酸、蛋白质的生物合成。这对机体细胞物质代谢和能量代谢的调节可能产生积极的影响，从而增强机体抗病能力，促进病人康复。这可能是灵芝扶正固本作用的机制之一。灵芝多糖D6、银耳多糖及糖及银耳孢子多糖均能促进H-亮氨酸掺入小鼠血清蛋白更新率，进一步研究证实，灵芝多糖D6、银耳多糖还能促进H-亮氨酸掺入小鼠肝脏蛋白质，这些都反映肝脏合成蛋白质的能力增强。由于引此二多糖均能促进H-尿嘧啶核苷掺入小鼠肝脏RNA，但不能促进H-胸腺嘧啶核苷掺入小鼠肝脏DNA，似表明它们能促进转录过程，加速RNA合成，但对DNA合成无影响。灵芝多糖D6还分别能促进H-Leu和H-TdR掺入小鼠骨髓蛋白质、RNA和DNA，但对H-TdR掺入艾氏腹水癌细胞DNA无影响。灵芝多糖可引起体外培养的小鼠脾细胞核DNA、RNA含量的显着增加，细胞内超微核结构改变，细胞质和细胞核的平均截面积增加，核质比下降，促进细胞的增殖。灵芝多糖可明显促进混合淋巴细胞培养中脾细胞对[H]TdR的摄取，增加脾细胞中DNA多聚酶a的活性。表明灵芝多糖可通过诱导DNA多聚酶的产生，促进免疫细胞中DNA的合成和细胞增殖，加速免疫应答过程和同种异型坑原刺激的淋巴细胞转化。灵芝多糖也可以完全拮抗环胞素A、丝裂霉素C、氟尿嘧啶和阿糖胞对小鼠混合淋巴细胞反映（MLR）的轻度抑制作用，部分拮抗氢化可的松对MLR的严重抑制作用。灵芝的一种小分子多糖，促进H-尿嘧啶核苷掺入肝RNA，其增加率为20.5%，促进H-胸腺核苷，H-尿嘧啶核苷掺入骨髓RNA和DNA，其增加率分别为48.7%和43.3%。所以这些多糖对肝病恢复，骨髓造血均有促进作用。1.2.4其它 从赤芝提取的葡萄糖、杂多糖、肽聚糖等具有降血糖作用。赤芝葡聚糖能刺激分泌胰岛素，并促进葡萄糖在外周组织的利用，对正常鼠和高血糖均有明显的陈旧降血糖作用。抗放射与促进骨髓造血机能：灵芝液具有抗放射作用，可明显降低Coγ射线照射小鼠的死亡率，并使平均存活时间显着延长。灵芝多糖D6促进蛋白质合成、改善造血机能、诱导细胞色素p-450等作用均有利于增强机体的防御功能，提高机体保持稳态的能力。灵芝多糖能增强小鼠耐缺氧存活的能力。灵芝制剂能降低机体及心肌的耗氧量，增加缺氧状态下豚鼠的冠状动脉血流量、增加心肌ATP，改善心肌缺血缺氧状态；对由于缺氧引起的家兔缺血型心电图改变有显着的对抗作用。提高小鼠耐缺氧的能力、延长缺氧小鼠平均存活时间。我的毕业论文，呵呵！

㈨ 灵芝三萜的药理研究

随着现代科学对灵芝研究的深入，至目前为止，总共分离到350余种化学成分，其中不少化学成分在抗肿瘤、保肝、降血糖、降血脂、增强单核吞噬细胞系与NK细胞功能、增强体液免疫功能、抗放射、镇痛、镇静、抗衰老等方面显示出了较强的活性。其中三萜类化合物就达170余种，其中灵芝三萜的在抗肿瘤药理的研究成为此项研究的重中之重。 南京中科研究院数位科学家与法国科学院Amu Therwath院士所领导的法国医学科学院分子实验室的战略结盟，潜心于灵芝三萜探秘。 经过几年研究并通过大量的实验证明：并非所有的灵芝三萜都具有抗癌效果，而赤灵芝孢子内的四环三萜、五环三萜则可以直接或间接毒杀肿瘤细胞。Amu Therwath院士以羊毛甾烷型（lanostane type）四环三萜为例，说明其结构特点是：A/B、B/C、C/D环均为反式；C10位、C13位有β-CH3；C17位为β-侧链；C14位有α-CH3；C20位为R构型。羊毛甾烷型四环三萜的灵芝提取物在研究中显示出对肝恶性肿瘤细胞的抑制作用，然而对正常肝细胞并无抑制效果，其机理为快速降低细胞生长调控蛋白PKC和p38MAP激酶的活力以及延缓JNK的激活。它们多属于羊毛甾烷高度氧化的衍生物，共有C30、C27、C24三种骨架，如lucidenic acid A就属于C27骨架的羊毛甾烷型。Amu Therwath院士将这一类对恶性肿瘤有极强抑制作用与毒杀功能的赤灵芝孢子四环三萜、五环三萜称为“聚能萜”。他表示，“聚能萜”正是灵芝抗肿瘤的奥秘所在。而开发灵芝类抗肿瘤产品最终落脚点和效果衡量标准就是该产品中“聚能萜”