细胞应激研究方法

A. 李朝军的个人经历

1984年进入南京大学生物系动物专业学习，1988年于南京大学生物系攻读硕士学位，1991年南京大学生物系攻读博士研究生，1994年毕业获博士学位。1994年到2008年南京师范大学生命科学学院任特聘教授。2008年聘为南京大学医学院教授，博士生导师。曾任南京师范大学江苏省分子医学生物技术重点实验室主任，生命科学学院分子细胞生物学研究所所长。1996年到1998年于香港科技大学做博士后。1999年6月到2000年5月在美国耶鲁大学医学院做博士后。2001、2002及2004年到美国匹兹堡大学医学院做短期访问。
先后主持参加国家自然科学基金6项（目前主持国家自然科学基金1项），参加国家自然科学基金重点课题一项，主持科技部“十五”攻关重大项目开放课题一项，主持江苏省自然科学基金2项，教育部青年基金一项。已在国内外发表论文100余篇，34篇论文为SCI收录。主要研究兴趣如下：
1.细胞分裂调控研究：采用FRET方法研究蛋白质在活细胞内的空间和时间的相互作用，采用CALI方法在活细胞内实时淬灭蛋白质的活性研究其功能，使细胞成为一个“微试管”。目前研究细胞胞质分裂的启动和完成的时空调控。
2. 细胞应激的信号传递研究：研究细胞在低氧、血清饥饿、高糖等应激状态下MAPK-Egr-1-GGPPS信号通路的作用。我们发现，早期应激反应转录因子Egr-1可以通过激活GGPPS表达，影响Ras的异戊二烯化修饰，对胰岛素抵抗的形成起调控作用。
3.HGF促进细胞离散的分子机制研究：我们发现肝细胞生长因子HGF可以通过激活经典的Wnt信号途径，激活MMP7的表达，MMP7通过降解E-cadherin促进了细胞的离散。

B. chop-pcr是什么意思

CHOP(C/EBP-homologous protein)是转录因子C/EBP(CCAAT enhancer binding
protein,CCAAT增强子结合蛋白)的同源蛋白，可以显性负抑制(dominant negative)的方式抑制转录因子C/EBP
和LAP。一些细胞应激(cell stress)如饥饿，可以诱导CHOP表达，CHOP又可以抑制细胞周期从G1到S期的转换。近期研究发现，内质网应激(ER

stress)时，CHOP的表达水平上调，并且CHOP可介导程序性的细胞死亡即细胞凋亡。CHOP可以介导内质网应激过程中的GADD34的激活和Ero1-Lα的表达。GADD34随后可以使eIF2α的Ser51去磷酸化，并刺激蛋白合成。Ero1-Lα则可以促进内质网中的氧化应激。CHOP在凋亡中的作用和其促进蛋白合成和诱导内质网内的氧化应激，导致内质网应激密切相关。
CHOP- PCR可测定CHOP基因

C. 什么是细胞的应激性

细胞的应激性是指对外界环境刺激所做出的反应。

D. 应激的细胞反应

1、热休克蛋白(HSP)
是指细胞在应激原特别是环境高温诱导下新合成或合成增加的一组蛋白。其基本功能为帮助新生蛋白质的正确折叠、移位、维持和受损蛋白质的修复、移除、降解，被称为“分子伴娘”。
2、热休克反应(HSR)
生物机体在热应激（或其他应激）十所表现的以基因表达变化为特征的防御适应反应称为热休克反应

E. 新研究是怎样揭示癌细胞产生抗药性的机制的

澳大利亚团队发表在新一期的美国《科学》杂志上的研究上说，在开展的新研究的时候发现，脱氧核糖核酸在复制过程中一旦暴露在靶向抗癌药物前，癌细胞及其相关基因在复制过程中就会大大提高细胞变异的几率，进而就会使癌细胞产生抗药性。对于如何揭示新研究中癌细胞如何产生抗药性的机制的，对此我的看法就是先提出设想，然后进行实验，后来得出规律，并与其他的方法一起结合抑制癌细胞的抗药机制。

三、根据应激诱导突变机制深入实验

在得出这一机制之后，团队进行进一步研究发现，在复制过程中的失误率只是暂时的，癌细胞发展出抗药性后就会回到正常的高质量的脱氧核糖核酸复制过程，以确保自身生存。也就是说虽然增加的基因突变率提高了癌细胞产生耐药性的可能性，但也破坏了细胞其他部分并且对于癌细胞自身产生有害影响。根据这项研究，团队提出联合用药，而实验证明联合用药能大幅减少体内癌细胞生长。

F. 应激反应的常见类型

当个体经认知评价而察觉到应激原的威胁后，就会引起心理与生理的变化。具体的分类有以下两种：

1、应激引起的心理反应

积极的心理反应是指适度的皮层唤醒水平和情绪唤起；注意力集中；积极的思维和动机的调整。这种反应有利于机体对传入信息的正确认知评价、应对策略的抉择和应对能力的发挥。

2、应激引起的生理反应

Cannon从动物在紧急事例面前表现出的“搏斗或逃跑”（FightorFlight）反应中发现，这种机制涉及同化（副交感，胆碱能）功能的抑制和异化（交感、肾上腺能）功能的激活。

应激反应的表现：

1、持久性应激反应这是由于应激源长期存在或长时间处于困难环境中而诱发的反应。

2、临床主要表现为妄想，内容有被害妄想、被监视、牵连观念，对人不信任等。妄想内容与精神创伤有密切关系，具有现实性和容易暴露的特点。

3、部分病人则以易伤感、沮丧、好哭泣等情感障碍为主。

以上内容参考：网络—应激反应

G. 应激的行为反应都有哪些

1、蓝斑(LC)-去甲肾上原素能神经元/交感-肾上腺髓质系统

蓝斑为中枢位点，上行主要与大脑边缘系统有密切的往返联系，中枢效应与应激时的兴奋、警觉、紧张、焦虑的情绪反应有关；下行主要至脊髓侧角，行使调节交感-肾上腺髓质系统，外周效应表现为血浆肾上腺素、去甲肾上腺素浓度的迅速升高。

2、下丘脑-垂体-肾上腺皮质激素系统(HPA)

室旁核为中枢位点，上行主要与杏仁复合体、海马结构等有广泛联系，中枢效应与CRH(可能是应激最核心的神经内分泌效应)和ACTH密切相关；下行主要通过促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)和肾上腺皮质(通过ACTH)进行密切往返联系。

3、应激可引起广泛的神经内分泌变动

简单的说，可以把应激理解为压力或刺激。当人受到应激作用时，人就会产生一种相应的反应，并在新的情况下逐渐地适应。ADH增加、促性腺激素释放激素(GnRH)↓、胰高血糖素升高、胰岛素降低、T3降低、T4降低等。

(7)细胞应激研究方法扩展阅读：

应激的细胞反应有：

1、热休克蛋白(HSP)

是指细胞在应激原特别是环境高温诱导下新合成或合成增加的一组蛋白。其基本功能为帮助新生蛋白质的正确折叠、移位、维持和受损蛋白质的修复、移除、降解，被称为“分子伴娘”。

2、热休克反应(HSR)

生物机体在热应激（或其他应激）所表现的以基因表达变化为特征的防御适应反应称为热休克反应。热应激可由环境温度过高(如烧伤、烫伤)或体内的温度增高(如发热)所致,热应激可以激活多条细胞内的信号转导通路,促进应激基因的快速表达,以合成多种特异性和非特异性的对细胞具有保护作用的应激蛋白。

参考资料来源：网络—应激

H. 在细胞应激中，为什么常用lps进行应激

这道题的答案肯定是浆细胞。因为浆细胞要合成大量抗体，因此蛋白质合成和加工过程最活跃，最容易产生内质网应激。 不过，我有些怀疑真实的生命活动中，是否真是如此。

I. 氧化应激指标的常用检测方法

氧化应激的定量评价方法大致分做三类：

1）测定由活性氧修饰的化合物；

2）测定活性氧消除系统酶和抗氧化物质的量；

3）测定含有转录因子的氧化应激指示物。

进一步尚有：

1）生物体内氧化应激的程度足以产生应答；

2）活体内难以蓄积；

3）在活体内不是被代谢，而是稳定存在，等等。理解这些要点对于临床普及推广都很有用。

但在临床上，氧化应激的定量仍旧存在问题。因氧化应激与各种各样疾病均密切相关，故缺乏特异性，其量化指标难以用于特别指定的疾病。所以目前认为，当用于“全身评价”，或者在已经明确疾病原因为氧化应激后的“严重程度及予后”的评价。

(9)细胞应激研究方法扩展阅读

抗氧化是预防衰老的重要步骤，因为自由基或氧化剂会将细胞和组织分解，影响代谢功能，并会引起不同的健康问题。如果能够消除过多的氧化自由基，对于许多自由基引起的及老化相关疾病都能够预防。例如常见的糖尿病、白内障、心血管病、老年痴呆等疾病都被认为与自由基相关。

抗氧化剂能在自然饮食中找到，是被称为三大抗氧化物质的维生素E、维生素C、和β-胡萝卜素。他们可以利用自身结构的特性来稳定自由基多余的电子，防止对细胞造成老化。豆类富含大量的膳食纤维和抗氧化剂，其中红豆和黑豆抗氧化剂最多。苹果中含有多种基本维生素和强抗氧化剂。