请简述革兰氏染色的方法和步骤

‘壹’ 革兰氏染色的步骤和原理

革兰氏染色的步骤和原理如下:

步骤:

1、首先在载玻片上滴一小滴蒸馏水，用滚如灼烧过的接种针挑取少量细菌，置载玻片的水滴中与水混合并涂抹开，注意涂抹要均匀平坦，涂抹后直径约为1 cm的薄层。

2、固定。将载玻片在火焰上方固定。

3、染色。加路哥式碘液大概一滴，作用1 min后用水冲洗，注意流水不要直接往薄层上冲，用过滤纸吸干。

4、脱色。用95%乙醇脱色，一般脱色时间大概为30 s。

5、观察。

干燥后，用油镜镜检观察，并做好记录。

原理：染色后细菌与环境形成鲜明对比，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，而用以分类鉴大宏启定。

‘贰’ 简述革兰氏染色的步骤和结果

涂片固定，草酸铵结晶紫染1分钟，蒸馏水冲洗，加碘液覆盖涂面染约1分钟，水洗，用吸水纸吸去水分，加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，20秒后水洗，吸去水分，蕃红染色液（稀）染1分钟后，蒸馏水冲洗。干燥，镜检。

染色结果：革兰氏阳性菌呈蓝紫色，革兰氏阴性菌呈红色。

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临床意义

其重要的临床意义在于：

1、鉴别细菌；

2、选择药物；

3、与致病性有关：革兰氏阳性菌能产生外毒素，革兰氏阴性菌能产生内毒素；而内毒素主要是指革兰氏阴性菌胞壁成分中的脂多糖，两者的致病作用不同。

可能误差

在实验中经常会出现假阳性和假阴性的结果，假阳性主要是由于脱色不完全，可能是由于涂片过厚，或者是结晶紫染色过度，导致脱色不完全。

假阴性可能是因为细胞固定过度，造成细胞壁通透性的改变，而出现假阴性结果；另外，细胞培养时间太长，可能已经有部分细胞发生死亡或者自溶，也导致细胞壁通透性的改变而出现假阴性结果。

‘叁’ 简述革兰氏染色的操作步骤

革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：

1）涂片固定。

2）草酸铵结晶紫染1分钟。

3）蒸馏水冲洗。

4）加碘液覆盖涂面染约1分钟。

5）水洗，用吸水纸吸去水分。

6）加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，20秒后水洗，吸去水分。

7）蕃红染色液（稀）染1分钟后，蒸馏水冲洗。干燥，镜检。

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革兰氏染色法的意义就在于鉴别细菌，把众多的细菌分为两大类，革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。

在治疗上，大多数革兰氏阳性菌都对青霉素敏感（结核杆菌对青霉素不敏感）：大多数化脓性球菌都属于革兰氏阳性菌，它们能产生外毒素使人致病，可以选择青霉素族，头孢曲松钠等。

革兰氏阴性菌，大多数肠道菌多属于革兰氏阴性菌，它们产生内毒素，靠内毒素使人致病。而革兰氏阴性菌则对青霉素不敏感，可以选择氟喹诺酮类药物如诺氟沙星，左氧氟沙星等，也可以选择大环内酯类比如克拉霉素、罗红霉素等。所以首先区分病原菌是革兰氏阳性菌还是阴性菌，在选择抗生素方面意义重大。

‘肆’ “革兰氏染色”的操作步骤是什么

革兰氏染色法具体操作步骤：

1. 涂片固定。

2. 草酸铵结晶紫染1分钟。

3. 纯化水冲洗。

4. 加碘液覆盖涂面染1分钟。

5. 水洗，用吸水纸吸去水分。

6. 加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，30秒后水洗，吸去水分。

7. 番红染色液（稀）染10秒钟后，纯化水冲洗。干燥，镜检。