抗體常用的篩選方法是

① 單克隆抗體中兩次篩選分別是什麼方法

第二次篩選出能產生特異性抗體的雜交瘤細胞，用連續注射抗原，下面具體介紹一下：

1、在實際免疫過程中，由於採用連續注射抗原的方法，且一種抗原決定簇刺激機體形成相對應的一種效應B淋巴細胞，因此，從小鼠脾臟中取出的效應B淋巴細胞的特異性是不同的，經HAT培養液篩選的雜交瘤細胞特異性也存在差異，所以必須從雜交瘤細胞群中篩選出能產生針對某一預定抗原快定簇的特異性雜交瘤細胞；

2、通常採用有限稀釋克隆細胞的方法，將雜交瘤細胞多倍稀釋，接種在多孔的細胞培養板上，使每一孔含一個或幾個雜交瘤細胞（理論上30%的孔中細胞數為0時，才能保證有些孔中是單個細胞），再由這些單細胞克隆生長，最終選出分泌預定特異抗體的雜交細胞株進行擴大培養。

拓展資料：

單克隆抗體是由單一B細胞克隆產生的高度均一、僅針對某一特定抗原表位的抗體，稱為單克隆抗體。通常採用雜交瘤技術來制備，雜交瘤（hybridoma）抗體技術是在細胞融合技術的基礎上，將具有分泌特異性抗體能力的致敏B細胞和具有無限繁殖能力的骨髓瘤細胞融合為B細胞雜交瘤。

參考資料：單克隆抗體網路：網頁鏈接

② 血站是用什麼方法檢測HIV抗體的

HIV-抗體檢測方法
常見檢測方法
目前作為診斷手段使用的檢測主要包括抗HIV病毒抗體檢測、病毒培養、核酸檢測和抗原檢測。其中對病毒抗體的檢測是最常規使用的方法，這不但是由於這類檢測特異性、敏感性較高，方法相對簡便、成熟，更重要的原因是HIV抗體在病毒感染後除早期短暫的」窗口期」外的整個生命期間長期穩定地存在並可被檢測到。在一些特殊情況下，當抗體檢測無法滿足HIV感染診斷的需要時，病毒分離及測定、核酸檢測、抗原檢測可作為輔助手段使用，這包括對非典型血清學反應樣品的診斷、HIV感染的窗口期診斷、新生兒早期診斷和對特殊樣品的診斷。 一、 酶聯免疫吸附試驗（ELISA）
目前應用的ELISA法有8種之多。它們的特異性和敏感性超過99%。
二、 顆粒凝集法（PA）
PA為快速、簡便的一種篩選方法。如屬陽性，應經WB證實。PA不需任何特殊儀器，其結果用肉眼可判別。全過程僅需5分鍾。缺點有假陽性，且價格昂貴。
三、快速試劑
(一)人類免疫缺陷病毒(HIV)1+2型抗體診斷試劑(膠體硒法)
雅培人類免疫缺陷病毒抗體診斷試劑(膠體硒法)是用於體外，肉眼觀察，定性的免疫分析，檢測血清或血漿中的HIV-1和HIV-2抗體，用於幫助受感染個體的HIV-1和HIV-2抗體。本品僅用於無償獻血員現場初篩及臨床緊急情況的使用，本品檢測陽性者，需進行進一步篩查確認。
(二)InstantCHEKTM-HIVl+2金標快速診斷試劑
InstantCHEKTM-HIV1+2是一種快速、簡單、靈敏的檢驗方法， 用以檢測艾滋病病毒(HIV-1和HIV-2)的抗體。該方法適用於初篩檢測，凡由該試劑測定為陽性者，需用另一種方法檢測如ELISA或用蛋白印記法確定。
四、HIV-抗體確認實驗
免疫印跡試驗（WB）、條帶免疫試驗（LIATEK HIVⅢ）、放射免疫沉澱試驗（RIPA）及免疫熒光試驗（IFA）。國內常用的確認試驗方法是WB。
(一_免疫印跡實驗(westernblot，WB)是廣泛用於許多傳染病診斷的實驗方法，就HIV的病原學診斷而言，它是首選的用以確認HIV抗體的確認實驗方法，WB的檢測結果常常被作為鑒別其他檢驗方法優劣的「金標准」。
確認試驗流程:
有HIV-1/2混合型和單一的HIV-1或HIV-2型。先用HIV-1/2混合型試劑進行檢測，如果呈陰性反應，則報告HIV抗體陰性；如果呈陽性反應，則報告HIV-1抗體陽性；如果不滿足陽性標准，則判為HIV抗體檢測結果不確定。如果出現HIV-2型的特異性指示條帶，需用HIV-2型免疫印跡試劑再做HIV-2的抗體確認試驗，呈陰性反應，報告HIV-2抗體陰性；呈陽性反應則報告HIV-2抗體血清學陽性,並將樣品送國家參比實驗室進行核酸序列分析，
WB的敏感性一般不低於初篩實驗，但它的特異性很高，這主要是基於HIV不同抗原組分的分離以及濃縮和純化，能夠檢測針對不同抗原成分的抗體，因而能夠用WB方法鑒別初篩實驗的准確性。從WB確認試驗結果看出，初篩試驗盡管選擇質量較好的試劑，如第三代ELISA，仍會有假陽性出現，必須通過確認試驗才能得出准確結果。
(二)免疫熒光實驗(IFA)
IFA法經濟、簡便、快速，曾被FDA推薦用於WB不確定樣品的診斷。但需要昂貴的熒光顯微鏡，需要受過良好訓練的技術人員、觀察和解釋結果易受主觀因素的影響，結果不宜長期保存，IFA不宜在一般的實驗室開展和應用。

③ 如何篩選動物單克隆抗體

單克隆抗體制備過程中,總共有兩次篩選,第一次篩選出雜交瘤細胞,第二次篩選出能產生特異性抗體的雜交瘤細胞,兩次篩選的原理和方法是不相同的.
第一次篩選的原理與方法：細胞融合後,雜交瘤細胞的選擇性培養是第一次篩選的關鍵.普遍採用的HAT選擇性培養液是在普通的動物細胞培養液中加入次黃嘌呤（H）、氨基喋呤（A）和胸腺嘧啶核苷酸（T）.其依據是細胞中的DNA合成有兩條途徑：一條途徑是生物合成途徑（「D途徑」）,即由氨基酸及其他小分子化合物合成核苷酸,為DNA分子的合成提供原料.在此合成過程中,葉酸作為重要的輔酶參與這一過程,而HAT培養液中氨基喋呤是一種葉酸的拮抗物,可以阻斷DNA合成的「D途徑」.另一條途徑是應急途徑或補救途徑（「S途徑」）,它是利用次黃嘌呤—鳥嘌呤磷酸核苷轉移酶（HGPRT）和胸腺嘧啶核苷激酶（TK）催化次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷生成相應的核苷酸,兩種酶缺一不可.因此,在HAT培養液中,未融合的效應B細胞和兩個效應B細胞融合的「D途徑」被氨基喋呤阻斷,雖「S途徑」正常,但因缺乏在體外培養液中增殖的能力,一般10d左右會死亡.對於骨髓瘤細胞以及自身融合細胞而言,由於通常採用的骨髓瘤細胞是次黃嘌呤—鳥嘌呤磷酸核苷轉移酶缺陷型（HGPRT）細胞,因此自身沒有「S途徑」,且「D途徑」又被氨基喋呤阻斷,所以在HAT培養液中也不能增殖而很快死亡.惟有骨髓瘤細胞與效應B細胞相互融合形成的雜交瘤細胞,既具有效應B細胞的「S途徑」,又具有骨髓瘤細胞在體外培養液中長期增殖的特性,因此能在HAT培養液中選擇性存活下來,並不斷增殖.
第二次篩選的原理和方法：在實際免疫過程中,由於採用連續注射抗原的方法,且一種抗原決定簇刺激機體形成相對應的一種效應B淋巴細胞,因此,從小鼠脾臟中取出的效應B淋巴細胞的特異性是不同的,經HAT培養液篩選的雜交瘤細胞特異性也存在差異,所以必須從雜交瘤細胞群中篩選出能產生針對某一預定抗原快定簇的特異性雜交瘤細胞.通常採用有限稀釋克隆細胞的方法,將雜交瘤細胞多倍稀釋,接種在多孔的細胞培養板上,使每一孔含一個或幾個雜交瘤細胞（理論上30%的孔中細胞數為0時,才能保證有些孔中是單個細胞）,再由這些單細胞克隆生長,最終選出分泌預定特異抗體的雜交細胞株進行擴大培養.

④ 自身抗體的檢測方法有哪些

1、抗核抗體檢測

抗核抗體是一組將自身真核細胞的各種細胞核成分作為靶抗原的自身抗體的總稱，主要是IgG，其次是IgM和IgA，無器官和種屬特異性。ANA在大多數自身免疫性疾病中均可呈陽性，正常老年人也可有低滴度的ANA。ANA檢測在臨床自身免疫病診斷與鑒別診斷中是一個重要的篩查試驗。

2、類風濕因子

類風濕因子是變性lgG刺激機體產生的一種自身抗體，主要存在於類風濕關節炎患者的血清和關節液內。主要為lgM型，也有lgG、lgA、lgD和IgE型。

3、抗中性粒細胞胞漿抗體

抗中性粒細胞胞漿抗體是指與中性粒細胞及單核細胞胞漿成分發生反應的抗體。當中性粒細胞受抗原刺激後，胞漿中的α-顆粒釋放蛋白酶-3、髓過氧化物酶等物質，刺激機體而產生ANCA。

(4)抗體常用的篩選方法是擴展閱讀

自身抗體的產生原因：

人體的生長、發育和生存有完整的自身免疫耐受機制的維持，正常的免疫反應有保護性防禦作用，即對自身組織、成分不發生反應。—旦自身耐受的完整性遭到破壞，則機體視自身組織、成分為「異物」，而發生自身免疫反應，產生自身抗體。

正常人體血液中可以有低滴度的自身抗體，但不會發生疾病，但如果自身抗體的滴度超過某—水平，就可能對身體產生損傷，誘發疾病。自身免疫性疾病中有許多自身抗體，其中最重要的是抗核抗體。

⑤ 艾滋病抗體的檢查方法

艾滋病病毒抗體檢測
艾滋病病毒抗體檢測：檢測血液中的艾滋病病毒抗體是目前最常用的檢測艾滋病病毒感染的實驗室方法，一般要經過兩個步驟：首先做初篩試驗，如果為陽性，再做確認試驗，確認試驗陽性才可診斷為艾滋病病毒感染。
常用的方法有：
1病原檢測病原檢測主要指用病毒分離培養、電鏡形態觀察、病毒抗原檢測和基因測定等方法從宿主標本中直接檢測病毒或病毒基因。由於前兩種方法難度大，且需要特殊設備和專業技術人員。因此僅抗原檢測和RT-PCR(反轉錄－PCR)可用於臨床診斷。
2 抗體檢測血清中HIV抗體是判斷HIV感染的間接指標。根據其主要的適用范圍，可將現有HIV抗體檢測方法分為篩檢試驗和確證試驗。
3 確證試劑篩檢實驗陽性血清的確證最常用的是Western blot（WB），由於該法相對窗口期較長，靈敏度稍差，而且成本高昂，因此只適合作為確證實驗。隨著第三代和第四代HIV診斷試劑靈敏度的提高，WB已越來越滿足不了對其作為確證實驗的要求。FDA批準的另一類篩檢確證試劑是-免疫熒光-試驗（IFA）。IFA比WB的成本低，而且操作也相對簡單，整個過程在1-1.5小時內即可結束。此法的主要缺點是需要昂貴的熒光檢測儀和有經驗的專業人員來觀察評判結果，而且實驗結果無法長期保存。現在FDA推薦在向WB不能確定的供血員發布最終結果時以IFA的陰性或陽性為准，但不作為血液合格的標准。
4篩檢試驗篩檢試驗主要用於對供血員進行篩查，因此要求操作簡便，成本低廉，而且靈敏、特異。目前世界上主要的篩檢方法仍然是ELISA，還有少數的顆粒凝集試劑和快速ELISA試劑。ELISA有很高的靈敏度和特異性，操作簡單，僅需要實驗室配備酶標儀和洗板機即可應用，特別適合於試驗室大規模篩檢使用。顆粒凝集實驗是另一種操作簡單方便，成本低廉的檢測方法，該方法結果可通過肉眼判定，靈敏度很高，特別適合發展中國家或大量篩選供血員時使用，缺點是必須使用新鮮樣品，特異性較差。80年代後期發展起來的斑點印跡檢測（Dot-blot assay）是一種快速ELISA（Rapid ELISA）方法，這種方法操作極為簡便，過程短暫，整個過程多數在5-10分鍾內甚至3分鍾內即可結束，但該法比ELISA和顆粒凝集試劑昂貴得多。金免疫測定是以膠體金為標記物，以硝酸纖維素膜為載體的固相免疫測定，分為滲濾和層析兩種形式。用於HIV抗體檢體金試紙條屬於金免疫層析，且大多數為間接法及雙抗原夾心法，兩種方法各有優缺點，但都簡單而快速，數分鍾即可得出結論，不需儀器設備，操作人員不需特殊訓練，試劑穩定，適用於單份測定等。

⑥ 怎樣篩選有內吞現象的抗體，有哪些方法方法

抗體是不進入細胞的，病毒連抗體進入吞噬細胞的方式屬於胞吞，抗體的出方式是胞吐，抗體自身是不進入細胞的,當病原體進入細胞後,效應T細胞將這個被入侵的靶細胞擊碎,使其中的抗原暴露出來,這時抗體就與之結合,結合後病原體就失去增殖和侵染能力,這時吞噬細胞就將抗體連同病原體一起吞噬。
內吞：內吞是指通過細胞質膜內陷形成囊泡,將外界物質裹進並輸入細胞的過程,是細胞質膜運送物質的一種方式.按輸入物的大小、物質狀態以及特異性程度等,一般將內吞分為吞噬、胞飲以及受體中介內吞等3種。

⑦ 單克隆抗體制備中兩次篩選的方法及原理是什麼

第一次篩選的原理與方法 細胞融合後 雜交瘤細胞的選擇性培養是第一次篩選的關鍵 普遍採用的HAT選擇培養液是在普通的動物細胞培養液中加入次黃嘌呤（H） 氨基喋呤（A）和胸腺嘧啶核苷酸（T）其依據是細胞中的DNA合成有兩條途徑是生物合成途徑（D途徑）即由氨基酸及其他小分子化合物合成核苷酸 為DNA分子的合成提供原料 在此合成過程中 葉酸作為重要的輔酶參與這一過程 而HAT培養液中氨基酸喋呤是一種葉酸的拮抗物 可以阻斷DNA合成的D途徑 另一條途徑是應急途徑或補救途徑（S途徑）它是利用次黃嘌呤一鳥嘌呤磷酸核苷轉移酶（HGPRT）和胸腺嘧啶核苷激酶（TK）催化次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷生成相應的核苷酸 兩種酶缺一不可 因此 在HAT培養液中 未融合的效應B細胞和兩個效應B細胞融合的 D途徑 被氨基嘌呤阻斷 雖 S途徑 正常 但因缺乏在體外培養液中增殖的能力 一般10d左右會死亡 對於骨髓瘤細胞以及自身融合細胞而言 由於通常採用的骨髓瘤細胞是次黃嘌呤一嘌呤磷酸核苷轉移酶缺陷型（HGPRT）細胞 因此自身沒有 S途徑 且 D途徑 又被氨基喋呤阻斷 所以在HAT培養液中也不能增殖而很快死亡 惟有骨髓瘤細胞與效應B細胞相互融合形成的雜交瘤細胞 即具有效應B細胞的 S途徑 又具有骨髓瘤細胞在體外培養液中長期增殖的特性 因此能在HAT培養液中選擇性存活下來 並不斷增殖
第二次篩選的原理和方法在實際免疫過程中 由於採用連續注射抗原的方法 且一種抗原決定簇刺激機體形成相對應的一種效應B淋巴細胞的特異性是不同的 經HAT培養液篩選的雜交瘤細胞特異性也存在差異 所以必須從雜交瘤細胞群中篩選出能產生針對某一預定抗原決定簇的特異性雜交瘤細胞 通常採用有限稀釋克隆細胞的方法 將雜交瘤細胞多倍稀釋 接種在多孔的細胞培養板上 使每一孔含一個或幾個雜交瘤細胞（理論上30%的孔中細胞數為0時 才能保證有些孔中是單個細胞）再由這些單細胞克隆生長 最終選出分泌預定特異抗體的雜交細胞株進行擴大培養 因此 單克隆抗體制備過程中 兩次篩選的原理和方法是不相同的
原理
B淋巴細胞在抗原的刺激下 能夠分化 增殖形成具有針對這種抗原分泌特異抗體的能力 B細胞的這種能力和量是有限的 不可能持續分化增殖下去 因此產生免疫球蛋白的能力也是極其微小的 將這種B細胞與非分泌型的骨髓瘤細胞融合形成雜交瘤細胞 再進一步克隆化 這種克隆化的雜交瘤細胞是即具有瘤的無限生長的能力 又具有產生特異性抗體的B淋巴細胞的能力 將這種克隆化的雜交瘤細胞進行培養或注入小鼠體內即可獲得大量的高效價 單一的特異性抗體 這種技術即稱為單克隆抗體技術

⑧ 抗體的制備有哪些

（1）多克隆抗體的制備。

①免疫方法：對多克隆抗體，免疫方法一般有皮下或肌肉免疫法、皮內免疫法、淋巴結免疫法和混合法等。一般來說，皮下或肌肉免疫法產生的抗體比較多；皮內免疫法所需的抗原量少，在抗原寶貴時特別適用，但與之相對的，它產生的抗體量也不多。混合免疫法的優點是抗原用量小，產生抗體速度快。

②多克隆抗體的制備：將抗原免疫動物（常用的動物為兔、羊、狗等），分離出抗血清並純化抗體。多克隆抗體的均一性較差，其特異性相對較低，因此，多克隆抗體在農葯殘留速測技術中的應用受到一定的限制。但近年來有學者恰恰利用了多抗的交叉反應高的特點，通過制備出具有某類（或某幾種）農葯的「共性結構」的半抗原或者通過制備出含多個抗原決定簇的人工抗原來制備「寬譜特異性」抗體，進行農葯多殘留分析研究。

（2）單克隆抗體的制備。單克隆抗體制備技術最初是由K鰄ler和Milstein（1975）利用B淋巴細胞雜交瘤技術創立的。目前該技術已廣泛應用於疾病診斷及生物、醫學研究、環境和食品安全檢測（監測）等方面。單抗均一性高，只和抗原某一決定簇結合，有更高的特異性，而且，產生抗體的單克隆細胞可在體外傳代繁殖，不受動物免疫時間限制生產抗體。只要管理和培養技術正確，抗體就可無限量的產生。基本過程是動物免疫、細胞融合、克隆篩選、單克隆抗體性質鑒定、腹水誘發、收集和純化等。

（3）重組抗體的制備。近年來，隨著蛋白質技術及DNA重組技術的發展，人們通過對抗體產生的基因本質、基因重組抗體篩選技術和直接定位誘導基因操縱技術的研究，獲得用於指定空間位置並具有各種特異性、親和性，能忍受一定溫度、pH和有機溶劑的人工重組抗體。一般是將抗原免疫小鼠，一定時間後無菌條件下取出小鼠脾臟，提取脾細胞總RNA，以RNA逆轉錄合成的cDNA為模板，PCR擴增抗體，將抗體中的輕鏈、重鏈連接成ScFv（single-chainvariablefragment）。酶切經PCR擴增的ScFv片段，並與噬菌體載體連接，然後以常規方法轉化入大腸桿菌或其他生物體中。人工培養帶有噬菌體抗體的大腸桿菌，即得到重組抗體。該方法生產抗體速度快，可通過誘變改變抗體特性，使抗體的特異性更強，而且，利用這項技術獲得的噬菌體抗體庫，能同時識別多種農葯，可用於農葯多殘留免疫速測技術的研究。

⑨ 自身抗體檢測的理想篩選實驗方法是

1.ELISA
：用於單項檢測；合適樣本數量大的時候！特異性，靈敏度都非常好！
2.膜條與斑點法：多個項目一同檢測，一次就能檢測幾個抗體結果出來，合適樣本數少，比較全面的檢測。
3.膠體金、晶元法、化學發光法：檢測速度快，幾分鍾到十幾鍾就能出結果，膠體都是單項目檢測，合適樣本數不多，檢測技術不高，沒有什麼設備的醫院；化學發光法與晶元法，對設備要求高，檢測成本也高，但速度快，項目多。樣本通量也很大！設備很貴，有錢的醫院合適；
4.westen
blot:檢測全面，可以一次完全檢測一個人的全部自身抗體，可以知道蛋白分子量，檢測被全世界科學界公認，缺點：特異性與敏感性不是太好，檢測復雜，時間長，同時顯色液用DAB有致癌作用，電泳時用的SDS-PAGE，其成膠前的單體是神精毒素，一般做科研的用，也...1.ELISA
：用於單項檢測；合適樣本數量大的時候！特異性，靈敏度都非常好！
2.膜條與斑點法：多個項目一同檢測，一次就能檢測幾個抗體結果出來，合適樣本數少，比較全面的檢測。
3.膠體金、晶元法、化學發光法：檢測速度快，幾分鍾到十幾鍾就能出結果，膠體都是單項目檢測，合適樣本數不多，檢測技術不高，沒有什麼設備的醫院；化學發光法與晶元法，對設備要求高，檢測成本也高，但速度快，項目多。樣本通量也很大！設備很貴，有錢的醫院合適；
4.westen
blot:檢測全面，可以一次完全檢測一個人的全部自身抗體，可以知道蛋白分子量，檢測被全世界科學界公認，缺點：特異性與敏感性不是太好，檢測復雜，時間長，同時顯色液用DAB有致癌作用，電泳時用的SDS-PAGE，其成膠前的單體是神精毒素，一般做科研的用，也有上市的試劑盒，深圳就有一家買WB的！人家是做好的膜，直接做就行了！比較快！