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怎麼查詢蛋白純化方法

發布時間:2023-09-22 12:57:18

Ⅰ 蛋白質純度鑒定的方法有哪些

電泳,
蛋白質電泳 現在常用就是 SDS 聚丙乙烯醯胺凝膠電泳
特點
1)靈敏度高
2)測定快速、簡便
3)干擾物質少
液相色譜
高效液相色譜是完全可以純化蛋白質並且進行蛋白質純度鑒定的
但建議還是使用蛋白質電泳 最主流 最有效的方法

Ⅱ 常用的蛋白質分離純化方法有哪幾種

分離蛋白質混合物的各種方法主要是根據蛋白質在溶液中的以下性質:1)分子大小;2)溶解度;3)電荷;4)吸附性質;5)對其它分子的生物學親和力等進行分離.
常見的分離提純蛋白質的方法有:1、鹽析與有機溶劑沉澱:在蛋白質溶液中加入大量中性鹽,以破壞蛋白質的膠體性質,使蛋白質從溶液中沉澱析出,稱為鹽析.常用的中性鹽有:硫酸銨、氯化鈉、硫酸鈉等.鹽析時,溶液的pH在蛋白質的等電點處效果最好.凡能與水以任意比例混合的有機溶劑,如乙醇、甲醇、丙酮等,均可引起蛋白質沉澱.2、電泳法:蛋白質分子在高於或低於其pI的溶液中帶凈的負或正電荷,因此在電場中可以移動.電泳遷移率的大小主要取決於蛋白質分子所帶電荷量以及分子大小.3、透析法:利用透析袋膜的超濾性質,可將大分子物質與小分子物質分離開.4、層析法:利用混合物中各組分理化性質的差異,在相互接觸的兩相(固定相與流動相)之間的分布不同而進行分離.主要有離子交換層析,凝膠層析,吸附層析及親和層析等,其中凝膠層析可用於測定蛋白質的分子量.5、分子篩:又稱凝膠過濾法,蛋白質溶液加於柱之頂部,任其往下滲漏,小分子蛋白質進入孔內,因而在柱中滯留時間較長,大分子蛋白質不能進入孔內而徑直流出,因此不同大小的蛋白質得以分離.6、超速離心:利用物質密度的不同,經超速離心後,分布於不同的液層而分離.超速離心也可用來測定蛋白質的分子量,蛋白質的分子量與其沉降系數S成正比.

Ⅲ 蛋白質純度的測定方法有哪些

超速離心:既可以用來分離純化蛋白質也可以用作測定蛋白質的分子量.
含量測定方法很多:
凱氏定氮:靈敏度低,適用於0.1.0mg氮,誤差為 ±2%,干擾少,費時8小時
雙縮脲法(Biuret法):靈敏度低1~20mg,中速20~30分鍾
紫外吸收法:較為靈敏50~100mg,快速5~10分鍾
Folin-酚試劑法(Lowry法):靈敏度高 5mg,40~60分鍾,操作要嚴格計時;顏色深淺隨不同蛋白質變化
考馬斯亮藍法(Bradford法):靈敏度最高1~5mg,15分鍾,常用
分子量測定:
SDS-PAGE:還原SDS測定結果比較接IC-MS,價格適中,常用
高效凝膠過濾色譜:標准蛋白質和待測蛋白質形狀一致時,准確高,差別越大越不準確
電噴霧離子化質譜:最准確
等電點測定:在不同pH條件下測量蛋白質的電泳遷移率,然後用遷移率對pH作圖,對應於遷移率為零的pH就是蛋白質的等電點.

Ⅳ 純化蛋白質的方法

純化蛋白質的方法有:沉澱、電泳、透析稿輪、層析、超速離心等。

純化蛋白質的注意事項:

1、為了避免蛋白質變性,不要對樣品劇烈攪動和反復凍融。
2、緩沖溶液成分盡量模擬細胞內環。
3、為了避免蛋白質的氧化,將0.1~1mmol/LDTT(二硫蘇糖醇)(或β-巰基乙醇)加入到緩沖溶液中。
4、為了避免重金屬對目標蛋白的破壞兆雀,將1~10mmol/LEDTA金屬螯合劑加入。
5、為了避免微生物生長,使用滅菌溶液。在純化任何一種蛋白質的時候,均必須時刻對它的穩定性注意維護,使它的活性得到保護,需要牢記如下一些通用的注意事項。
6、盡可能置於冰上或者在冷庫內進行操作。
7、蛋白濃度不要太稀。
8、除非是進行聚焦層。否則pH需要合適,防止所使用的緩沖溶液pH與pI相同,使蛋白質的沉澱得以避免。
9、使用蛋白酶抑制劑,避免蛋白酶對目標蛋白的降解;在純化細胞中的蛋白質時,將DNA酶加入來使得DNA降解,避免DNA對蛋白的污染。

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