㈠ 急求助！！！土壤蔗糖酶活性採用3，5二硝基水楊酸比色法測定的詳細步驟！！！
土壤蔗糖酶測定（比色法）
1. 方法選擇及原理
蔗糖酶能酶促蔗糖水解生成葡萄糖和果糖。蔗糖酶活性的測定方法有用酶學的方法測量所產生的葡萄糖（滴定法或重量法）或是根據蔗糖的非還原性，用生成物（葡萄糖和果糖）能夠還原菲林溶液中的銅，再根據生成的氧化亞銅的量求出糖的含量。也可根據蔗糖水解的生成物與某種物質（3，5-二硝基水楊酸或磷酸銅）生成有色化合物進行比色測定。還有一種方法，根據蔗糖液酶促反應前後光偏振面的變化（旋光法）進行測定。
目前，我國常用的主要是硫代硫酸鈉滴定法，它是測定土壤蔗糖酶活性的經典方法。3，5-二硝基水楊酸比色法重現性較好，且手續較簡便，適於成批樣品測定。
測定土壤蔗糖酶活性時，均以蔗糖為基質，蔗糖液濃度范圍為5-20％。在酸性介質中，蔗糖酶活性最大。為保持該酶最適pH，多使用下列緩沖液：醋酸鹽緩沖液（pH4.5-5.5），磷酸鹽緩沖液（pH4.9-5.5），醋酸鹽-磷酸鹽緩沖液（pH5.5）。 2. 試劑配製
（1）3，5-二硝基水楊酸溶液：稱0.5g二硝基水楊酸，溶於20ml 2N氫氧化鈉和50ml水中，再加18.2g酒石酸鉀鈉，用水稀釋至100ml（不超過7天）。
（2）pH5.5磷酸緩沖液：1/15M磷酸氫二鈉（11.867g Na2PO4•2H2O溶於1L蒸餾水中）0.5ml加1/15M 磷酸二氫鉀（9.078KH2PO4溶於1L蒸餾水中）9.5ml即成。 （3）8％蔗糖溶液。 （4）甲苯。
（5）標准葡萄糖溶液：將葡萄糖先在50-58℃條件下，真空乾燥至恆重。然後取500mg溶於100ml 12mmol苯甲酸溶液中（5mg還原糖/ml），即成標准葡萄糖溶液。
標准曲線繪制：取0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7ml含5mg還原糖/ml的標准葡萄糖溶液到50ml容量瓶中，與測定蔗糖酶活性同樣的方法進行顯色。 3. 試驗步驟
稱取2.***g新鮮土，置於50ml三角瓶中，注入15ml 8％蔗糖溶液，5ml pH5.5磷酸緩沖液和0.25ml甲苯。搖勻混合物後，放入恆溫箱，在37℃下培養24h。到時取出，迅速過濾。從中吸取濾液1ml，注入50ml容量量瓶中，加3ml 3，5-二硝基水楊酸，並在沸水的水浴鍋中加熱5min，隨即將容量瓶移至自來水流下冷卻3min。
溶液因生成3-氨基-5-硝基水楊酸而呈橙黃色，最後用蒸餾水稀釋至50ml，並在分光光度計上於波長508nm處進行比色。
為了消除土壤中原有的蔗糖、葡萄糖而引起的誤差，每一土樣需做無基質（無蔗糖）對照，整個試驗需做無土壤對照。 4. 結果計算
蔗糖酶活性以24h後1g土壤葡萄糖的毫克數表示。 葡萄糖（毫克）＝a×50×ts/m a－顯色液中葡萄糖濃度（mg/ml）， 50－顯色液體積（ml）；
ts－分取倍數（吸1ml濾液比色就是20/1）； m－烘乾土質量（g）。
㈡ 離子交換柱層析能分離純化蔗糖酶的主要依據是什麼
DEAE-纖維素為二乙氨乙基纖維素，是陰離子交換劑。
其原理基於離子交換層析：離子交換層析中，基質是由帶有電荷的樹脂或纖維素組成。
由於蛋白質也有等電點，當蛋白質處於不同的pH條件下，其帶電狀況也不同。陰離子交換基質結合帶有負電荷的蛋白質，所以這類蛋白質被留在柱子上，然後通過提高洗脫液中的鹽濃度等措施，將吸附在柱子上的蛋白質洗脫下來。結合較弱的蛋白質首先被洗脫下來。反之陽離子交換基質結合帶有正電荷的蛋白質，結合的蛋白可以通過逐步增加洗脫液中的鹽濃度或是提高洗脫液的pH值洗脫下來。
㈢ 怎樣從酵母中提取蔗糖酶
採用甲苯自溶法、凍融法、SDS抽提法3種方法從酵母中提取蔗糖酶,經質量分數50%的乙醇分級沉澱、Mono Q陰離子交換柱層析純化後,製得高純度的酵母蔗糖酶.比較了上述3種提取方法並對該酶的部分性質進行了研究.純化的酶經等電聚焦測定,等電點為 5.6,SDS-PAGE鑒定其相對分子質量為60 kD.以蔗糖為底物測得酵母蔗糖酶的表觀米氏常數Km為0.013 mol/L.結果顯示3種提取方法各有優劣,凍融法和SDS抽提法的提取效率遠高於傳統的甲苯自溶法.其中SDS抽提法的效率最高,加之其操作簡便,更適 合於酵母蔗糖酶大規模的制備提取.
㈣ 給出一種酶，如何設計其純化方案
發個實驗給你參考參考！！！
酵母蔗糖酶的分離純化和活力測定
實驗簡介：酶的分離制備在酶學以及生物大分子的結構功能研究種具有重要意義。啤酒酵母中蔗糖酶含量豐富。本實驗用新鮮啤酒酵母作為原料，通過破碎細胞，熱處理，乙醇沉澱，柱層析等步驟提取蔗糖酶。並對其活力進行測定。
實驗原理
蔗糖酶主要存在於酵母中，但工業上通常從酵母中製取。酵母蔗糖酶系胞內酶，提取時細胞破碎或菌體自溶。常用的提純方法有鹽析、有機溶劑沉澱、離子交換和凝膠柱層析。以此可得到較高純度的酶。
蔗糖酶催化下蔗糖水解為等量的葡萄糖和果糖。用測定生成還原糖(葡萄糖和果糖)的量來測定蔗糖水解的速度，本實驗中，蔗糖酶的活力單位指在一定條件下反應5min,每產生l毫克葡萄糖所需酶量。 用考馬斯亮藍法測定蛋白質含量，比活力為每毫克蛋白質的活力單位數。
實驗操作
1. 提取
(1) 准備一個冰浴，將研缽穩妥放入冰浴中。
(2) 將10g濕啤酒酵母，和適量（5g）二氧化硅一起放入研缽中。二氧化硅要預先研細。
(3) 緩慢加入預冷的30mL去離子水，每次加2mL左右，邊加邊研磨，至少用30分鍾。以便將蔗糖酶充分轉入水相，至酵母細胞大部分研碎，以便將蔗糖酶充分轉入水相中。
(4) （可選項） 研磨時用顯微鏡檢查研磨的效果。
(5) 將混合物轉入兩個離心管中，平衡後，用高速冷離心機，4℃，10000rpm，離心5min。
(6) 用滴管小心地取出水相，轉入另一個清潔的離心管中，4℃，10000rpm，離心15min。
(7) 將清液轉入量筒，量出體積，用廣泛pH試紙檢查上清液pH，用1mol / L 醋酸將pH調至5.0，稱為「粗級分Ⅰ」。留出1.5mL測定酶活力及蛋白含量，剩餘部分轉入清潔的離心管中。
2. 熱處理和乙醇沉澱
(1) 預先將恆溫水浴調到50℃，將盛有粗級分I的離心管穩妥地放入水浴中，45℃下保溫30分鍾，在保溫過程中不斷輕搖離心管。
(2) 取出離心管，於冰浴中迅速冷卻，用4℃，10000rpm，離心10min。
(3) 將上清液轉入小燒杯中，放入冰鹽浴（沒有水的碎冰撒入少量食鹽），逐滴加入等體積預冷至－20℃的95%乙醇，同時輕輕攪拌，共需30分鍾，再在冰鹽浴中放置10分鍾，以沉澱完全。於4℃，10000rpm，離心10min，傾去上清，並滴干，沉澱保存於離心管中，蓋上蓋子或薄膜封口，然後將其放入冰箱中冷凍保存（稱為「級分Ⅱ」）。廢棄上清液之前，要用尿糖試紙檢查其酶活性（於下一個實驗一起做）。
3. DEAE纖維素柱層析純化酶蛋白
(1) 離子交換劑的處理
稱取1.5克DEAE纖維素(DE-32)乾粉，加入0.5mol／L NaOH溶液(約50m1)，輕輕攪拌，浸泡至少0.5小時(不超過1小時)，用玻璃砂漏斗抽濾，並用去離子水洗至近中性，抽干後，放入小燒杯中，加50mL 0.5mol／L HCl，攪勻，浸泡0.5小時，用去離子水洗至。近中性，再用0.5 mol／L NaOH重復處理一次，用去離子水洗至近中性後，抽干備用(因DEAE纖維素昂貴，用後務必回收)。實際操作時，通常纖維素是已浸泡過並回收的，按「鹼一酸」的順序洗即可，因為酸洗後較容易用水洗至中性。鹼洗時因過濾困難，可以先浮選除去細顆粒，抽干後用0.5 mol／L NaOH-0.5 mol／L NaCl溶液處理，然後水洗至中性。
(2) 裝柱與平衡
先將層析柱垂直裝好，在燒杯內用0.02 mol／L，pH7.3 Tris-HCl緩沖液洗纖維素幾次，用滴管吸取燒杯底部大顆粒的纖維素裝柱，然後用此緩沖液洗柱至流出液的pH與緩沖液相同或接近時即可上樣。
(3) 上樣與洗脫
上樣前先准備好梯度混合器，詳見附錄TH-500梯度混合器使用說明。
用5mL 0.02mol／L，pH7.3的Tris-HCl緩沖液充分溶解醇級分Ⅱ(注意玻璃攪棒頭必須燒圓，攪拌溶解時不可將離心管劃傷)，若溶液混濁，則4 000r／min離心除去不溶物。取1.5mL上清液(即醇級分Ⅱ樣品，留待下一個實驗測酶活力及蛋白含量)，將剩餘的3.5mL上清液小心地加到層析柱上，不要擾動柱床，上樣後用約30mL緩沖液洗去柱中未吸附的蛋白質，至A280降到0.1以下，注意從上樣開始使用部分收集器收集，每管2.5～3.0mL／l0min。然後打開梯度混合器，採用30mL，0.02mol／L，pH7.3的Tris-HCl緩沖液和30mL含0.2mol／L濃度NaCl的0.02mol／L，pH7.3的Tris-HCl.緩沖液，進行線性梯度洗脫，連續收集洗脫液，控制流速2.5～3.0mL／10min。測定每管洗脫液的A280光吸收值。
(4) 各管洗脫液酶活力的定性測定
在點滴板上每一孔內，加一滴0.2mol／L，pH4.6的乙酸緩沖液，一滴0.5mol／L蔗糖和一滴洗脫液，反應5min，在每一孔內同時插入一小條尿糖試紙，10～20min後觀察試紙顏色的變化。用「+」號的數目，表示顏色的深淺，即各管酶活力的大小。合並活性最高的2～3管，量出總體積，並將其分成10份，分別倒人10個小試管，用保鮮膜封口，冰凍保存，使用時取出一管，此即「柱級分Ⅲ」。
4. 各級分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ蔗糖酶活力
用0.02mol／L，pH4.6乙酸緩沖液(也可以用pH5～6的去離子水代替)稀釋各級分酶液，測出酶活合適的稀釋倍數：
Ⅰ： 1 000～10 000倍；
Ⅱ： 1 000～10 000倍；
Ⅲ： 100～1 000倍；
以上稀釋倍數僅供參考。
按「表1」的順序在試管中加入各試劑，進行測定，為簡化操作可取消保鮮膜封口，沸水浴加熱改為用90～95℃水浴加熱 8-10min，以5min生成的還原糖的毫克數為縱坐標，以試管中lmL反應混合物中的酶濃度(mg蛋白／m1)為橫坐標，畫出反應速度與酶濃度的關系曲線。
表1 各級分I、Ⅱ、Ⅲ蔗糖酶活性測定
各管名稱 對照 級分Ⅰ 級分Ⅱ 級分Ⅲ 葡萄糖
管數 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13
酶液/mL 0.0 0.05 0.20 0.50 0.05 0.20 0.50 0.05 0.20 0.50 / / /
H2O/mL 0.6 0.55 0.40 0.10 0.55 0.40 0.10 0.55 0.40 0.10 0.8 0.4 0.2
乙酸緩沖液0.2mol/L,pH4.6 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 / / /
葡萄糖2mmol/L / / / / / / / / / / 0.2 0.6 0.8
蔗糖0.25mol/L 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 / / /
加入蔗糖，立即搖勻開始記時，室溫准確反應5min後，立即加1mL 0.1M NaOH中止反應
二硝基水楊酸溶液 mL 1.0
用保鮮膜封口，扎眼，沸水浴加熱5min，立即用水冷卻3分鍾。
H2O/mL 4.0
A520
稀釋後酶活力 /
原始酶活力 /
5. 考馬斯亮蘭法測定各級分蛋白質含量
(1) 蛋白質標准曲線製作
取14支試管，分兩組按下表平行操作。
表2 蛋白質標准曲線製作
試管編號/mL 0 1 2 3 4 5 6
標准蛋白溶液/mL
0.02mol/L Tris-HCl緩沖液/mL
考馬斯亮蘭試劑/mL
搖勻，1h內以0號試管為空白對照，在595nm處比色
A595nm
(2) 各級分蛋白質含量測定
考馬斯亮蘭G-250在酸性溶液時呈茶棕色，最大吸收峰在465nm。當與蛋白質結合後變成深藍色，最大吸收峰轉至595nm，在10~100μg/mL蛋白質濃度范圍內成正比。因此在測定各級分蛋白質含量時應稀釋適當倍數，使其測定值在標准曲線的直線范圍內。根據所測定的A595nm值，在標准曲線上查出相當於標准蛋白的量，從而計算出未知樣品的蛋白質濃度(mg/mL)。
6. 計算各級分的比活力、純化倍數及回收率
為了測定和計算下面表3中的各項數據，對各個級分都必須取樣，每取一次樣，對於下一級分來說會損失一部分量，因而要對下一個級分的體積進行校正，以使回收率的計算不致受到不利的影響。
1活力單位(U)＝酶在室溫，pH＝4.6條件下，每分鍾水解產生1μmol葡萄糖所需酶量。比活力＝活力單位/mg蛋白。
表3 各級分的比活力、純化倍數及回收率
級
分 記錄
體積
(m1) 校正
體積
(m1) 蛋白質
(mg／m1) 總蛋白
(mg) Unit
(s／m1) 總活力
(U) 比活力
(Units
／mg) 純化
倍數 回收率
(％)
Ⅰ 1.0 100
Ⅱ
Ⅲ
下面表4是對假定的各級分記錄體積進行校正計算的方法和結果：
表4 實驗記錄表
級分 記錄體積 (m1) 校正體積計算 取樣體積
(m1) 校正後體積
(m1)
Ⅰ 15 15 1.5 15.00
Ⅱ 5 5×(15／13.5) 1.5 5.5
Ⅲ 6 6×(15／13.5)×(5／3.5) 1.5 9.5
五、 結果
在同一張圖上畫出所有管的酶活力、光吸收值A280的曲線和洗脫梯度線。得出各級分的活力，比活力，提純倍數以及回收率。
六、 注意事項
從上樣開始收集，可能有兩個活性峰，梯度洗脫開始前的第一個峰是未吸附物，本實驗取用梯度洗脫開始後洗下來的活性峰。
七、 作業
1．為什麼酶的提取需要低溫操作？
2．熱處理的根據是什麼？
去除熱敏感蛋白。
參考文獻
1．邵雪玲，毛歆，郭一清．生物化學與分子生物學實驗指導．武漢：武漢大學出版社，2003
2．張龍翔．高級生物化學實驗選編．北京：高等教育出版社，1989
3．許培雅，邱樂泉．離子交換柱層析純化蔗糖酶實驗方法改進研究．實驗室研究與探索，2002，21(3):82~84
編著者——陳彥，李紹飛
㈤ 離子交換柱層析純化蔗糖酶實驗中梯度洗脫時使用梯度混合儀時在不含氯化鈉的一側為什麼放密封小磁棒
據我所了解的
低鹽濃度的就是右側那個，裡面應該是有個磁力攪拌用的磁力攪拌子。
因為梯度洗脫需要高濃度的鹽溶液進入低濃度的溶液中，在這個過程中需要不停攪拌以混勻溶液，讓鹽濃度能夠均勻的提高，以避免出現鹽濃度升高過快，達不到梯度的效果。
不知道是不是你說的密封小磁棒
㈥ 酵母蔗糖酶應該適用什麼pH條件進行分離純化
3.5
㈦ 蔗糖酶活力測定，為什麼前三組酶液稀釋比例都是1:200，第四組要做1:50
蔗糖酶的提取及活力、含量和相對分子質量測定
摘要：本學期共做了六次生化實驗。.第一次是提取及純化蔗糖酶，以為後續實驗提供樣品。實驗主要目的是要求學生掌握高速離心機的使用。實驗共得到不同純化度的三種提取液，標記為A、B、C。將三種提取液分別放入冰箱保存，做為後續實驗樣品。也因此做此實驗時必須保證各個操作無誤，及准確，以免影響後續實驗的結果。第二次是有關蔗糖酶的柱層析法，主要目的是要求同學掌握離子交換層析的原理及柱層析的操作技術及紫外吸收的分析方法。此次實驗通過柱層析及紫外吸收法得到2~3管的活力最大的分離液合並為分離液D，放入冰箱作為後續實驗樣品。第三次實驗為蔗糖酶的活力測定，目的為掌握酶的活力測定方法，了解各個酶的純化情況。利用分光度計測出各個樣品的OD值，再對照葡萄糖的標准曲線來得出剩餘葡萄糖的含量，從而獲得各個酶的活力大小，了解各個酶的純化情況。並得出結論酶的純化度越高，活力越小。第四次實驗為蔗糖酶蛋白質的含量測定，目的為掌握學習Folin-酚測定蛋白質含量的原理及方法，制備標准曲線測定未知樣品中蛋白質含量。同樣利用與標准曲線對照來得到試樣的蛋白質含量，並測出酶的比活力。測量蛋白質的方法有多種，我們必須根據所做實驗的具體選擇合適的方法來測定蛋白質。第五次的實驗是微量凱氏定氮測總蛋白。目的是要求同學掌握凱氏定氮法測定蛋白質含量的原理及方法。本實驗除利用了凱氏定氮法外還加上了酸式滴定法最後得出了毫克級別的總蛋白含量。其結果與上一實驗所測得的總蛋白質含量有所不同，正證明了不同的方法測量蛋白質造成的誤差不同，致所得結果不同。最後一次實驗為SDS-PAGE測定蛋白質分子質量，目的為掌握SDS-聚丙烯醯胺凝膠電泳和測定蛋白質分子量技術。此實驗操作復雜，需先製作凝膠再結果染色脫色，最後還要製作標准蛋白分子質量曲線圖來進行試樣對照。最後得到蔗糖酶的分子量在5萬左右及9萬左右。 關鍵字：實驗；提取液；比活；蛋白質；SDS-PAGE；OD
正文：
1，蔗糖酶的提取及提純
1.1， 文獻綜述：蔗糖酶的分離利用的是細胞破壁法。細胞破壁：就酶在生物體
內的分布，可分為胞內酶和胞外酶，蔗糖酶系胞內酶。提取胞內酶時，要破碎組織和細胞，然後用一定的溶液提取，得到的材料稱為無細胞抽提液。材料不同，破壁也方法不同。我們用的菌體（微生物）細胞破壁方法是：自溶法，即將菌體放在適當的pH值和溫度下，利用組織細胞自身的酶系將細胞破壞，是細胞內物質釋放出來。自溶時需加少量防腐劑，以防外界細菌污染。 自溶法的缺點是時間較長。 本實驗的自溶條件是：加乙酸鈉保持弱鹼性條件、35 ℃ 、加入乙酸乙脂代替防腐劑，0.5-1h。自溶法的操作較簡單方便，適合學生操作。（參考文獻; 蔗糖酶的分離提純及酶促
謝謝。。。。。。
㈧ 啤酒酵母里蔗糖酶的提取和活力測定
啤酒酵母里蔗糖酶的提取和活力測定原理
1、細胞破壁：就酶在生物體內的分布，可分為胞內酶和胞外酶，蔗糖酶系胞內酶。提取胞內酶時，要破碎組織和細胞，然後用一定的溶液提取，得到的材料稱為無細胞抽提液。材料不同，破壁的方法也不同。我們用的菌體（微生物）細胞破壁方法是：自溶法，即將菌體放在適當的pH值和溫度下，利用組織細胞自身的酶系將細胞壁破壞，使細胞內的物質釋放出來。自溶時需加少量防腐劑，以防外界細菌污染。自溶法的缺點是時間較長。
2、3，5-二硝基水楊酸比色定糖的原理
（1）DNS試劑+ D-葡萄糖 氨基化合物
（還原糖） （棕紅色）
（2）在一定范圍內還原糖的量與反應液的顏色強度成一定比例關系（可用於比色測定），所以可用DNS比色法測定還原糖的含量。
（3）該方法是半微量定糖法，操作簡便、快速、雜質干擾較少。
試劑與器材
恆溫水浴、自動部分收集器、恆溫箱、梯度洗脫裝置、冰箱、層析柱、分析天平、電磁攪拌器、秒錶、離心機、可見分光光度計、凍干機、沸水浴等。3,5二硝基水楊酸試劑(DNS)、5%的蔗糖溶液、1mol/L的 NaOH溶液、乙酸鈉、0.2mol/L,pH4.6的醋酸緩沖液 6. 乙酸乙酯
操作方法
① 細胞破壁→抽提→兩次乙醇分級→透析→裝柱→洗滌→洗脫→收集酶活力峰→制凍乾粉
② 製作3，5—二硝基水楊酸比色定糖法的標准曲線並測定三種酶樣品的活力
③ 測定三種酶樣品的蛋白濃度
④ 計算各步酶樣的比活力、提純倍數和收率
⑤ 用雙倒數作圖法測定蔗糖酶的Km值
關鍵步驟與注意事項
① 乙醇分級時，注意低溫、防止乙醇局部過濃，離心後要迅速溶解酶樣
② 裝柱均勻，無截面、無氣泡，床面平整，柱體垂直
③ 分離提純的全過程中，防止酶失活並用測定酶活力的方法跟蹤酶的去向
④ 在測定米氏常數時，將酶樣溶解後一定要稀釋到合適的濃度。
⑤ 酶活力測定及作圖一定要准確。
㈨ 蔗糖酶的提取及初提純試驗中影響酶得率得因素有哪些
蔗糖酶的提取及初提純試驗中影響酶得率得因素有酶的濃度、底物濃度、pH值、溫度、抑制劑、激活劑等。
實驗原理：
蔗糖酶分離提純原理： 酵母中的蔗糖酶含量很豐富，實驗以安琪酵母粉為原料，首先採用自溶法破碎細胞壁、再用乙醇分級和DEAE—纖維素柱層析兩步分離提純，制備純度較高的蔗糖酶制劑。酶分離提純的原理與蛋白質的相同。但酶是有催化活性的蛋白質，在分離提純過程中必須注意：防止酶變性失活；隨時測定酶的比活力，並跟蹤酶的去向、衡量酶提純的程度及得率。
有機溶劑分級純化蔗糖酶原理： 利用不同蛋白質在不同濃度的有機溶劑—乙醇中溶解度的差異將蔗糖酶蛋白與其它蛋白質雜質進行有機溶劑分級沉澱，而使提取的蔗糖酶得以純化（32％的乙醇飽和度沉澱分離雜蛋白，47.5％的乙醇飽和度沉澱分離酶蛋白）。操作必須在低溫下進行且避免有機溶劑局部過濃；分離後應立刻除去有機溶劑並用水或緩沖溶液溶解沉澱的酶蛋白（復溶），確保酶的活性；pH多選在酶蛋白的等電點附近；有機溶劑在中性鹽存在時能增加蛋白質的溶解度減少變性，提高分離效果。
蔗糖酶的離子交換層析法純化原理： 本實驗採用DEAE-纖維素（DEAE-C11）微粒狀的、弱鹼性的陰離子纖維素為柱料，進行蔗糖酶的進一步純化。它具有解析度高、化學性質穩定、有開放性的長鏈結構、有較大的表面積、對蛋白質的吸附容量大等優點；纖維素上離子基團的數量不多，排列疏散，對蛋白質的吸附不是太牢固，用緩和的洗脫條件即可達到分離的目的，不致引起蛋白質的變性。
蔗糖酶活力與比活的測定：在蔗糖酶的純化過程中，通過3、5-二硝基水楊酸法測定蔗糖酶催化蔗糖生成還原糖的量，測定酶活力大小，跟蹤酶的活力。在本實驗條件下，每3min釋放lmg還原糖所需的酶量定義為一個活力單位；通過Folin法測定酶蛋白的含量，計算蔗糖酶的比活。單位質量的酶蛋白中所含酶的活力稱為酶的比活。
主要實驗器材：
1. 試管、血糖管； 2. 秒錶； 3. 冰鹽浴； 4. 恆溫水浴； 5.離心機；6. 721- 型分光光度計；7. 柱層析裝置； 8. 梯度洗脫裝置；9. 部分收集器；10. 電磁攪拌器；11. 冰箱；12. DEAE—纖維素。