蛋白質檢測實驗方法

① 檢驗蛋白質的方法及現象

在鹼性溶液中，雙縮脲試劑能與蛋白質反應，形成紅褐色絡合物，顏色深淺與蛋白質濃度成正比．因此，檢驗蛋白質可用滴加雙縮脲變成紅褐色的方法，出現的現象是紅褐色．
故選B

② 蛋白質檢驗實驗步驟,要具體,清楚的,只要蛋白質

1.先取樣本液體用試管裝著
2.配置好A液和B液
3.先加入A液,再加入B液
4.如果溶液變紫色,則含有蛋白質

③ 高中生物必修一檢測蛋白質的實驗

folin—酚試劑法。

此法的顯色原理與雙縮脲方法是相同的，只是加入了第二種試劑，即folin-酚試劑，以增加顯色量，從而提高了檢測蛋白質的靈敏度。這兩種顯色反應產生深蘭色的原因是在鹼性條件下，蛋白質中的肽鍵與銅結合生成復合物。

folin-酚試劑中的磷鉬酸鹽-磷鎢酸鹽被蛋白質中的酪氨酸和苯丙氨酸殘基還原，產生深蘭色（鉬蘭和鎢蘭的混合物）。在一定的條件下，蘭色深度與蛋白的量成正比。

(3)蛋白質檢測實驗方法擴展閱讀：

注意事項：

樣品應是均勻的，若是固體樣品應事先研細過篩，液體樣要混合均勻。

樣品放入凱氏燒瓶時，不要黏附瓶頸上，萬一黏附可用少量水緩慢沖下，以免被檢樣消化不完全，使結果偏低。

如果稱1g以上的樣品，就需要K氏燒瓶最小500ml，800~1000ml的更好，這樣的K氏燒瓶對於縮短氨化時間，加熱的均勻性和完全氨化效果最好。

向蒸餾瓶中加入濃鹼時，往往出現褐色沉澱。這時由於分解促進劑與加入的硫酸銅反應，生成氫氧化銅，經加熱後又分解生成氧化銅的沉澱，有時Cu離子與氨作用生成深蘭色的絡合物。

④ 蛋白質的制備及含量的測定實驗方法是什麼

制備：一般用硫酸銨沉澱法粗提，然後用事宜的柱子進一步分離純化。
測定：一般的會用傳統的方法如：凱氏定氮法，還有一些顯色法如雙縮尿法等

⑤ 「蛋白質的鑒定」實驗怎麼做

鑒定蛋白質有多種方法
1，在待測液中加入雙縮脲試劑並水浴加熱有紫色物質生成
2，在待測液中加入稀硝酸並加熱變為淡黃色3，若為固體，則放到酒精燈上加熱，可以聞到燒焦的羽毛氣味

⑥ 如何用實驗方法來鑒定蛋白質的存在

如果目前分離蛋白質組的最好技術是2-DE，那麼隨之而來的挑戰是數百數千個蛋白如何被鑒定. 在這里，我們不考慮傳統的蛋白鑒定方法，如免疫印跡法、內肽的化學測序、已知或未知蛋白的comigration分析，或者在一個有機體中有意義的基因的過表達. 並不是因為這些方法無效，而是因為它們通常耗時、耗力，不適合高流通量的篩選. 目前，所選用的技術包括對於蛋白鑒定的圖象分析、微量測序；進一步對肽片段進行鑒定的氨基酸組分分析和與質譜相關的技術. (1) 圖象分析技術(Image analysis). 「滿天星」式的2-DE圖譜分析不能依靠本能的直覺，每一個圖象上斑點的上調、下調及出現、消失，都可能在生理和病理狀態下產生，必須依靠計算機為基礎的數據處理，進行定量分析. 在一系列高質量的2-DE凝膠產生(低背景染色，高度的重復性)的前提下，圖象分析包括斑點檢測、背景消減、斑點配比和資料庫構建. 首先，採集圖象通常所用的系統是電荷耦合CCD(charge coupled device)照相機；激光密度儀(laser densitometers)和Phospho或Fluoro imagers，對圖象進行數字化. 並成為以象素(pixels)為基礎的空間和網格. 其次，在圖象灰度水平上過濾和變形，進行圖象加工，以進行斑點檢測. 利用Laplacian，Gaussian，DOG(difference of Gaussians) opreator使有意義的區域與背景分離，精確限定斑點的強度、面積、周長和方向. 圖象分析檢測的斑點須與肉眼觀測的斑點一致. 在這一原則下，多數系統以控制斑點的重心或最高峰來分析，邊緣檢測的軟體可精確描述斑點外觀，並進行邊緣檢測和鄰近分析，以增加精確度. 通過閾值分析、邊緣檢測、銷蝕和擴大斑點檢測的基本工具還可恢復共遷移的斑點邊界. 以PC機為基礎的軟體Phoretix-2D正挑戰古老的Unix為基礎的2-D分析軟體包. 第三，一旦2-DE圖象上的斑點被檢測，許多圖象需要分析比較、增加、消減或均值化. 由於在2-DE中出現100%的重復性是很困難的，由此凝膠間的蛋白質的配比對於圖象分析系統是一個挑戰. IPG技術的出現已使斑點配比變得容易. 因此，較大程度的相似性可通過斑點配比向量演算法在長度和平行度觀測. 用來配比的著名軟體系統包括Quest，Lips，Hermes，Gemini等，計算機方法如相似性、聚類分析、等級分類和主要因素分析已被採用，而神經網路、子波變換和實用分析在未來可被採用. 配比通常由一個人操作，其手工設定大約50個突出的斑點作為「路標」，進行交叉配比. 之後，擴展至整個膠. 例如：精確的PI和MW(分子量)的估計通過參考圖上20個或更多的已知蛋白所組成的標准曲線來計算未知蛋白的PI和MW. 在凝膠圖象分析系統依據已知蛋白質的pI值產生PI網路，使得凝膠上其它蛋白的PI按此分配. 所估計的精確度大大依賴於所建網格的結構及標本的類型. 已知的未被修飾的大蛋白應該作為標志，變性的修飾的蛋白的PI估計約在±0.25個單位. 同理，已知蛋白的理論分子量可以從資料庫中計算，利用產生的表觀分子量的網格來估計蛋白的分子量. 未被修飾的小蛋白的錯誤率大約30%，而翻譯後蛋白的出入更大. 故需聯合其他的技術完成鑒定. (2) 微量測序(microsequencing). 蛋白質的微量測序已成為蛋白質分析和鑒定的基石，可以提供足夠的信息. 盡管氨基酸組分分析和肽質指紋譜(PMF)可鑒定由2-DE分離的蛋白，但最普通的N-末端Edman降解仍然是進行鑒定的主要技術. 目前已實現蛋白質微量測序的自動化. 首先使經凝膠分離的蛋白質直接印跡在PVDF膜或玻璃纖維膜上，染色、切割，然後直接置於測序儀中，可用於subpicomole水平的蛋白質的鑒定. 但有幾點需注意：Edman降解很緩慢，序列以每40 min 1個氨基酸的速率產生；與質譜相比，Edman降解消耗大；試劑昂貴，每個氨基酸花費3～4$. 這都說明泛化的Edman降解蛋白質不適合分析成百上千的蛋白質. 然而，如果在一個凝膠上僅有幾個有意義的蛋白質，或者如果其他技術無法測定而克隆其基因是必需的，則需要進行泛化的Edman降解測序.

⑦ 檢測蛋白質表達量的實驗方法有哪些，western-blotting的原理，方法

蛋白質印跡（免疫印跡試驗）即Western Blot物、物化免疫遺傳用種實驗其基本原理通特異性抗體凝膠電泳處理細胞或物組織品進行著色通析著色位置著色深度獲特定蛋白質所析細胞或組織表達情況信息
蛋白質印跡由瑞士米歇爾弗雷德希物研究所（Friedrich Miescher Institute）Harry Towbin1979提尼爾·伯奈特（Neal Burnette）於1981所著《析物化》（Analytical Biochemistry）首稱Western Blot蛋白免疫印跡（Western Blot）電泳離細胞或組織總蛋白質凝膠轉移固相支持物NC膜或PVDF膜用特異性抗體檢測某特定抗原種蛋白質檢測技術現已廣泛應用於基蛋白水平表達研究、抗體性檢測疾病早期診斷等面

⑧ 蛋白質的定性測定方法

蛋白質定性方法茚三酮反應
1.范圍

本方法採用茚三酮試劑與蛋白質中a-氨基酸反應生成藍紫色化合物最大吸收值的波長為570nm
本方法適用於各類蛋白質測定范圍0.5 g 50 g 蛋白質

2.原理

茚三酮是使氨基酸和多肽顯色的重要試劑當茚三酮在弱酸性條件下和-氨基酸反應時氨基酸被氧化分解生成醛放出NH3 和C02 水合茚三酮則變成還原型茚三酮然後還原型茚三酮與NH3 及另一分子茚三酮進一步縮合生成藍紫色化合物最大吸收值的波長為570nm此反應為一切a-氨基酸所共有反應靈敏因而本法是氨基酸定量測定應用最廣泛的方法之一脯氨酸和羥脯氨酸與茚三酮反應生成黃色化合物最大吸收值的波長在44Onm 多肽和蛋白質雖然具有茚三酮反應但肽鏈越大靈敏度也越來越差故不宜作定量測定之用在多肽合成中常用來檢驗有無自由氨基的肽類存在

3 .試劑

茚三酮無水乙醇95%乙醇甘氨酸

4.試樣制備

4.1 蛋白質溶液箱保存備用
4.2 1mg mL-1的茚三酮乙醇溶液,0.1g 茚三酮溶於100mL 95%乙醇新鮮配置
4.3 5mg mL-1的甘氨酸溶液

5.參考文獻

1.陳曾燮劉兢羅丹 編.生物化學實驗.合肥中國科學技術大學出版社1994.1-6
2.李建武等 合編.生物化學實驗原理和方法.北京北京大學出版社1994.150-174
3.寧正祥 編.食品成分分析手冊.北京中國輕工業出版社1998.62-80

⑨ 蛋白質鑒定實驗

實驗一 生物組織中脂肪,蛋白質的鑒定
一,實驗原理
(1)鑒定實驗設計的理念:
某些化學試劑 + 生物組織中有關有機化合物 產生特定的顏色反應.
(2)具體原理:
1、脂肪小顆粒 + 蘇丹Ⅲ染液→橘黃色小顆粒.
2、蛋白質 + 雙縮脲試劑→紫色反應.
二,目標要求
初步掌握鑒定生物組織中脂肪,蛋白質的基本方法.
三,重點,難點
1.重點
①初步掌握鑒定生物組織中脂肪,蛋白質的基本方法.
②通過實驗的操作和設計培養學生的動手能力,掌握探索實驗設計技巧,從而培養創新思維能力.
2.難點
根據此實驗方法,原理,設計實驗來鑒定常見食物的成分.
四,實驗材料
1.脂肪的鑒定實驗:選擇富含脂肪的種子,以花生種子為最好(實驗前浸泡3h～4h).
2.蛋白質的鑒定實驗:可用浸泡1d～2d的黃豆種子(或用豆漿,或用雞蛋蛋白).
五,儀器,試劑
1.儀器:剪刀,解剖刀,雙面刀片,試管,試管架,試管夾,大小燒杯,小量筒,滴管,玻璃漏斗,酒精燈,三腳架,石棉網,火柴,研缽,石英砂,紗布,載玻片,蓋玻片,毛筆,吸水紙,顯微鏡.
2.試劑：1蘇丹Ⅲ染液;2雙縮脲試劑;3 體積分數為50%的酒精溶液;4蒸餾水.
六,方法步驟
（1）脂肪的鑒定
脂肪的鑒定步驟:
取材:花生種子(浸泡3-4h),將子葉削成薄...實驗一 生物組織中脂肪,蛋白質的鑒定
一,實驗原理
(1)鑒定實驗設計的理念:
某些化學試劑 + 生物組織中有關有機化合物 產生特定的顏色反應.
(2)具體原理:
1、脂肪小顆粒 + 蘇丹Ⅲ染液→橘黃色小顆粒.
2、蛋白質 + 雙縮脲試劑→紫色反應.
二,目標要求
初步掌握鑒定生物組織中脂肪,蛋白質的基本方法.
三,重點,難點
1.重點
①初步掌握鑒定生物組織中脂肪,蛋白質的基本方法.
②通過實驗的操作和設計培養學生的動手能力,掌握探索實驗設計技巧,從而培養創新思維能力.
2.難點
根據此實驗方法,原理,設計實驗來鑒定常見食物的成分.
四,實驗材料
1.脂肪的鑒定實驗:選擇富含脂肪的種子,以花生種子為最好(實驗前浸泡3h～4h).
2.蛋白質的鑒定實驗:可用浸泡1d～2d的黃豆種子(或用豆漿,或用雞蛋蛋白).
五,儀器,試劑
1.儀器:剪刀,解剖刀,雙面刀片,試管,試管架,試管夾,大小燒杯,小量筒,滴管,玻璃漏斗,酒精燈,三腳架,石棉網,火柴,研缽,石英砂,紗布,載玻片,蓋玻片,毛筆,吸水紙,顯微鏡.
2.試劑：1蘇丹Ⅲ染液;2雙縮脲試劑;3 體積分數為50%的酒精溶液;4蒸餾水.
六,方法步驟
（1）脂肪的鑒定
脂肪的鑒定步驟:
取材:花生種子(浸泡3-4h),將子葉削成薄片
取理想薄片
在薄片上滴2-3滴蘇丹Ⅲ染液
去浮色
製成臨時裝片
觀察:先在低倍鏡下,找到材料的脂肪滴,然後,轉為高倍鏡觀察.
結論:細胞中的圓形脂肪小顆粒已經被染成橘黃色.
實驗成功的要點:
①.脂肪的鑒定實驗:選擇富含脂肪的種子,以花生種子為最好(實驗前浸泡3h～4h).
②該試驗成功的關鍵是獲得只含有單層細胞理想薄片.
③滴蘇丹Ⅲ染液染液染色2-3min,時間不宜過長,以防細胞的其他部分被染色.
（2）蛋白質的鑒定
蛋白質的鑒定步驟:
選材:卵清稀釋液或黃豆(浸泡1-2d) 豆漿 濾液

結論:蛋白質與雙縮脲試劑發生紫色反應.
2,實驗成功的要點:
①蛋白質的鑒定實驗:可用浸泡1d～2d的黃豆種子(或用豆漿,或用雞蛋蛋白稀釋液).
②雙縮脲試劑的使用,一定要先加入A液(即0.1 g/ml的 NaOH 溶液),再加入雙縮脲試劑B液(即0.01 g/ml的 CuSO4 溶液).
③還可設計一隻加底物的試管,不加雙縮脲試劑,進行空白對照,說明顏色反應的引起是蛋白質的存在與雙縮脲試劑發生反應,而不是空氣的氧化引起.