㈠ 通常用什麼來 表示酶固定化效果
固定化酶(immobilized
enzyme)是20世紀60年代發展起來的一種新技術。所謂固定化酶,是指在一定的空間范圍內起催化作用,並能反復和連續使用的酶。通常酶催化反應都是在水溶液中進行的,而固定化酶是將水溶性酶用物理或化學方法處理,使之成為不溶於水的,但仍具有酶活性的狀態。
㈡ 酸性磷酸酶時固定化效率和回收率大小說明什麼問題
固定化效率說明膠珠總酶活佔加入總酶活的百分比,回收率說明膠珠在實際實驗中表現的活力與理論值之比。
㈢ 怎樣固定化乙醛脫氫酶具體步驟是什麼
一種乙醇脫氫酶的固定化方法。其原料重量百分比含量為:海藻酸鈉0.021%、氯化鈣0.012%、檸檬酸鈉0.03%、水99.937%。具體步驟如下:將0.021%海藻酸鈉用霧化器滴入0.012%氯化鈣的溶液中,在37℃的溫度下勻速攪拌2分鍾。過濾得到微膠囊,用去離子水洗滌3次,然後進入0.03%的檸檬酸鈉的溶液中進行攪拌溶芯,保持時間5-10分鍾,然後過濾,用去離子水洗滌;然後進行酶的吸附固定,乙醇脫氫酶則固定在合成的微膠囊中。本發明制備固定化酶的性能穩定,固定化率高,制備工藝簡單,可用於人體醉酒和酒精中毒的體外檢測作用;同時還可用於解酒保健品的體外檢測和解酒保健品的效果判斷。
㈣ 固定化酶一般採用什麼方法
固定化酶(immobilized enzyme),酶本身還是溶於水的,只是是用物理的或化學的方法使酶與水不溶性大分子載體結合或把酶包埋在其中,使得酶在水中溶性凝膠或半透膜的微囊體從而導致流動性降低.酶固定化後一般穩定性增加,易從反應系統中分離,且易於控制,能反復多次使用.便於運輸和貯存,有利於自動化生產,但是活性降低,使用范圍減小,技術還有發展空間.固定化酶是近十餘年發展起來的酶應用技術,在工業生產、化學分析和醫葯等方面有誘人的應用前景.
具體方法
吸附法
利用各種吸附劑將酶或含酶菌體吸附在其表面上而使酶固定的方法.通常有物理吸附法和離子吸附法.
常用吸附劑有活性炭、氧化鋁、硅藻土、多孔陶瓷、多孔玻璃等.
採用吸附法固定酶,其操作簡便、條件溫和,不會引起酶變性或失活,且載體廉價易得,可反復使用.
載體結合法
最常用的是共價結合法,即酶蛋白的非必需基團通過共價鍵和載體形成不可逆的連接.在溫和的條件下能偶聯的蛋白質基團包括:氨基、羧基、半胱氨酸的巰基、組氨酸的咪唑基、酪氨酸的酚基、絲氨酸和蘇氨酸的羥基.參加和載體共價結合的基團,不能是酶表現活力所必需的基團.以中國首先採用的雙功能團試劑「對位-β-硫酸酯乙碸基苯胺」偶聯載體和酶為例,載體結合的步驟如下頁反應式.
此法曾先後用於3′-核糖核酸酶、5′-磷酸二酯酶和葡萄糖澱粉酶等的固定化.此外酶通過物理吸附或離子吸附於載體制備固定化酶也是常用的方法.
交聯法
依靠雙功能團試劑使酶分子之間發生交聯凝集成網狀結構,使之不溶於水從而形成固定化酶.常採用的雙功能團試劑有戊二醛、順丁烯二酸酐等.酶蛋白的游離氨基、酚基、咪唑基及巰基均可參與交聯反應.
包埋法
酶被裹在凝膠的細格子中或被半透性的聚合物膜包圍而成為格子型和微膠囊型兩種.包埋法制備固定化酶除包埋水溶性酶外還常包埋細胞,製成固定化細胞,例如可用明膠及戊二醛包埋具有青黴素醯化酶活力的菌體,可連續水解帤基青黴素,工業生產6-氨基青黴烷酸.
酶經過固定化後,比較能耐受溫度及pH的變化,最適pH往往稍有移位,對底物專一性沒有任何改變,實際使用效率提高幾十倍(如5′-磷酸二酯酶的工業應用)甚至幾百倍(如青黴素醯化酶的工業應用).
㈤ 這是一道考研題: 簡述檢測蛋白質的方法,以及如何利用氨基酸的化學性質實現蛋白質的固定化修飾。(8分)
蛋白質的測定
凱氏定氮法(含N量* 6. 25)
雙縮脲法、Folin-酚法
紫外光度法(A=280nm)
離心法、電泳法、層析法
至於第二個問題,應該是
甲基化,磷酸化,糖基化
具體的要看具體題目才可以
㈥ 固定化微生物技術
固定化微生物技術是將特選的微生物固定在選證的載體上,使其高度密集並保持生物活性,在適宜條件下能夠快速、大量增殖的生物技術。這種技術應用於廢水處理,有利於提高生物反應器內微生物(尤其是特殊功能的微生物)的濃度,有利於微生物抵抗不利環境的影響,有利於反應後的固液分離,縮短處理所需的時間。
利用固定化微生物技術提高廢水處理效率的工藝方法也被稱作「生物增效」,其適用的領域非常廣泛,例如:化糞池、隔油槽、排水管、城市污水處理廠以及工業廢水…等。一般而言,針對特殊污染源,來自天然環境的微生物消耗很快、效率低下,即使有快速的繁殖能力仍不足以負荷。因此,生物增效的作業過程還是依循自然的方式,向目標添加定製的、具有已知降解能力的微生物制劑(固定化微生物),處理效果則有明顯的提升。
現在所研究的生物吸附劑的固定化方法主要有以下幾種:
1吸附法
吸附法一般依靠生物體與載體之間的作用,包括范德華力、氫鍵、靜電作用、共價鍵及離子鍵,兩者間的屯電位,在微生物體和載體的相互作用中起重要作用。常用的吸附載體有活性炭、木屑、多孔玻璃、多孔陶瓷、磁鐵礦、硅藻土、硅膠、纖維素、聚氨醋泡沫體、離子交換樹脂等。它是一種簡單易行、條件溫和的固定化方法,但用它固定的生物體不夠牢靠,容易脫落。
2交聯法
交聯法又稱無載固定化法,是一種不用載體的工藝,通過化學、物理手段使生物體細胞間彼此附著交聯。化學交聯法它一般是利用醛類、胺類等具有雙功能或多功能基團的交聯劑與生物體之間形成共價鍵相互聯結形成不溶性的大分子而加以固定,所使用的交聯劑主要有戊二醛、聚乙烯酞胺、表氯醇等等。物理交聯法在是指在微生物培養過程中,適當改變細胞懸浮液的培養條件(如離子強度、溫度、pH值等),使微生物細胞之間發生直接作用而顆粒化或絮凝來實現固定化,即利用微生物自身的自絮凝能力形成顆粒的一種固定化技術。
3包埋法
在微生物的固定化方法中,以包埋法最為常用。它的原理是將生物體細胞截留在水不溶性的凝膠聚合物孔隙的網路中,通過聚合作用或通過離子網路形成,或通過沉澱作用,或通過改變溶劑、溫度、pH值使細胞截留。凝膠聚合物的網路可以阻止細胞的泄露,同時能讓基質滲入和產物擴散出來。
包埋材料可以分為兩大類:
(l)天然高分子多糖類,如海藻酸鹽、瓊脂、明膠等I』3l,其中以海藻酸鈉和卡拉膠應用最多,它們具有固化方便,對微生物毒性小及固定化密度高等優點,但是它們抗微生物分解性能較差,機械強度低,但是可使用交聯劑進行穩定化處理,但活力和傳質性能又會下降。
(2)合成高分子化合物,如聚丙烯酞胺、聚乙烯醇(PvA)娜l等。這類交聯劑的突出優點是抗微生物分解性能好,機械強度高,化學性能穩定。但是聚合物網路的形成條件比較劇烈,對微生物細胞的損害較大,而且成形的多樣性和可控性不好。
㈦ 酶的固定化方法主要有哪些
一、包埋法 定義:將酶、細胞或原生質體包埋在各種多孔載體中,使其固定化的方法。 分類:根據載體的材料和方法的不同分為凝膠包埋法(網格型包埋法)、半透膜包埋法(微囊型包埋法)。 1、凝膠包埋法:應用最廣泛的固定化方法。
㈧ 為什麼要進行酶的固定化方法有哪些各有何優缺點
因為在有些反應相中,如果酶和產物混合在一起以後不好分離,會影響後續操作,此外,溶解相的酶有時候效率會比較低。
方法:
1、載體結合,將酶和一些高分子材料結合在一起。優點:製作簡單,反應效率較高,比較適合大型工業化生產;缺點:適用的酶范圍比較小。
2、交聯,利用連接分子將酶相互連在一起形成高分子。優點:類似第一條;缺點:會產生酶的浪費,教練反應比較激烈會可能導致酶活性的降低。
3、包埋,將酶包裹在高分子材料所形成的網格中,包埋材料允許反應物通過,但不允許酶通過。優點:方法較統一,適合實驗室操作,對酶和反應相限制較少;缺點:持久性差,包埋反應可能會減損酶活性。
㈨ 什麼是酶的偶聯效率如何測定
偶聯後的總活力除以最初加入的總活力