檢測微生物活菌數的方法

㈠ 測定微生物數量的方法

現在用的多的就是這幾種，樓主挑著看吧

細菌計數1.計數器測定法：
即用血細胞計數器進行計數。取一定體積的樣品細胞懸液置於血細胞計數器的計數室內，用顯微鏡觀察計數。由於計數室的容積是一定的(O.1mm3)，因而根據計數器刻度內的細菌數，可計算樣品中的含菌數。本法簡便易行，可立即得出結果。
本法不僅適於細菌計數，也適用於酵母菌及黴菌孢子計數。
2、電子計數器計數法:
電子計數器的工作原理是測定小孔中液體的電阻變化，小孔僅能通過一個細胞，當一個細胞通過這個小孔時，電阻明顯增加，形成一個脈沖，自動記錄在電子記錄裝置上。
該法測定結果較准確，但它只識別顆粒大小，而不能區分是否為細菌。因此，要求菌懸液中不含任何碎片。
3、活細胞計數法
常用的有平板菌落計數法，是根據每個活的細菌能長出一個菌落的原理設計的。取一定容量的菌懸液，作一系列的倍比稀釋，然後將定量的稀釋液進行平板培養，根據培養出的菌落數，可算出培養物中的活菌數。此法靈敏度高，是一種檢測污染活菌數的方法，也是目前國際上許多國家所採用的方法。使用該法應注意：①一般選取菌落數在30～300之間的平板進行計數，過多或過少均不準確；②為了防止菌落蔓延，影響計數，可在培養基中加入O．001％2，3，5一氯化三苯基四氮唑(TTC)；③本法限用於形成菌落的微生物。
廣泛應用於水、牛奶、食物、葯品等各種材料的細菌檢驗，是最常用的活菌計數法。
4、比濁法
比濁法是根據菌懸液的透光量間接地測定細菌的數量。細菌懸浮液的濃度在一定范圍內與透光度成反比，與光密度成正比，所以，可用光電比色計測定菌液，用光密度(OD值)表示樣品菌液濃度。
此法簡便快捷，但只能檢測含有大量細菌的懸浮液，得出相對的細菌數目，對顏色太深的樣品，不能用此法測定。
5、測定細胞重量法
此法分為濕重法和乾重法。濕重法系單位體積培養物經離心後將濕菌體進行稱重；乾重法系單位體積培養物經離心後，以清水洗凈放人乾燥器加熱烘乾，使之失去水分然後稱重。
此法適於菌體濃度較高的樣品，是測定絲狀真菌生長量的一種常用方法。
6、測定細胞總氮量或總碳量
氮、碳是細胞的主要成分，含量較穩定，測定氮、碳的含量可以推知細胞的質量。此法適於細胞濃度較高的樣品。
7、顏色改變單位法（colour change unit,簡稱CCU）
這種方法通常用於很小，用一般的比濁法無法計數的微生物，比如支原體等，因為支原體的液體培養物是完全透明的，呈現為清亮透明紅色，因此無法用比濁法來計數，由於支原體固體培養很困難，用cfu法也不容易計數，因此需要用特殊的計數方法，即CCU法。它是以微生物在培養基中的代謝活力為指標，來計數微生物的相對含量的，下面以解脲脲原體為例單介紹其操作：，簡
（1）取12隻無菌試管，每一管裝1.8ml解脲脲原體培養基。
（2）在第一管加入0.2ml待測解脲脲原體菌液，充分混勻，從中吸取0.2ml加入第二管，依次類推，10倍梯度稀釋，一直到最末一管
（3）於37度培養，以培養基顏色改變的最末一管作為待測菌液的CCU，也就是支原體的最大代謝活力，比如第六管出現顏色改變，他的相對濃度就是10的6次方CCU/ml.
一般來說，比濁法和菌落計數法就可以滿足絕大多數細菌的計數，但是對支原體這樣比較特殊的微生物，用CCU法比較合適。

㈡ 我們有什麼辦法測量微生物生物量

1.直接計數測定 根據微生物種類,有血球計數板和細菌計數板；或者用電子計數器計數
2.比濁法 根據菌懸液的濃度在一定范圍內與光密度成正比,可以用分光光度計測OD值,用OD值表示樣品菌液濃度
3.核酸計數法 熒光定量PCR技術
4.活菌計數法 MPN和平板計數法
由於測定方法的限制,前幾種計數結果不太准確,目前應用廣泛的是第四種
對糞大腸菌群和光合細菌可用MPN,對其他微生物可用平板計數法

㈢ 顯微鏡計數法，活菌計數法，稀釋塗布平板法，平板劃線法，血球計數法區別

1、顯微鏡計數法即血球計數法，事先把菌液稀釋到一定的倍數，然後通過血球計數板在顯微鏡下計數。此法計數比較精準。

2、活菌計數法是將待測樣品經一系列 10 倍稀釋，然後選擇三個稀釋度的菌液，分別取 0.2ml 放入無菌平皿，再倒入適量的已熔化並冷至 45 ℃ 左右的培養基，與菌液混勻，冷卻、待凝固後，放入適宜溫度的培養箱或溫室培養，長出菌落後，計數，按下面公式計算出原菌液的含菌數：

每毫升原菌液活菌數=同一稀釋度三個以上重復平皿

菌落平均數×稀釋倍數× 5

3、稀釋塗布平板法是一種粗略的活菌計數法，即通過一定的稀釋倍數，塗布到平板上，在適宜的條件下培養後，觀察活菌數。

4、平板劃線法一般指劃線平板，平板劃線法是用來分離單菌落的一種方法，不是計數的方法。

5、血細胞計數，是用於檢測細胞的特徵性變數，包括細胞大小、細胞數量、細胞形態和結構、細胞周期、細胞DNA、細胞表面蛋白質和胞質蛋白質的常規檢查之一。

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活菌計數法又稱間接計數法。活菌計數法是在一定濃度的定量葯物內加入定量的試驗菌，經過一定時間培養後，取樣進行活菌計數。

活菌計數是將定量的葯物與試驗菌作用後的混合液稀釋後加入瓊脂培養基，製成平板，培養後數平板上形成的菌落數。直接計數法測定到的是死、活細胞總數，而間接計數法測得的僅是死、活菌總數。這類方法所得的數值往往比直接計數法測得的數值小。

稀釋平板計數是根據微生物在固體培養基上所形成的單個菌落，即是由一個單細胞繁殖而成這一培養特徵設計的計數方法，即一個菌落代表一個單細胞。

劃線的具體形式很多，一種有效的方法是將一個平板分成不同面積的4區，A區面積最小，作為待分離菌的菌源區，B和C區是逐級稀釋的過渡區，D區面積最大，以便有機會出現較多的單菌落供選用。

㈣ 微生物計數方法有哪些

測定微生物細胞數目的方法有很多，介紹幾種

1.血細胞計數法

將稀釋的菌液樣品滴在血細胞計數板上，在顯微鏡下計算4~5個中格的細菌數，並求出每個小格所含細菌的平均數，再以此為依據，估算總菌數。

①此法的缺點是不能區分死菌和活菌。

②對壓在小方格界線上的細菌，應當取平均值計數。

③此法可用於測定培養液中酵母菌種群數量的變化

2.稀釋塗布平板法

原理：每個活細菌在適宜的培養基和良好的生長條件下可以通過生長形成菌落。培養基表面生長的一個菌落，來源於樣品稀釋液中的一個活菌。

①這一方法常用來統計樣品中活菌的數目

②統計的菌落數往往比活菌的實際數目低，原因是當兩個活多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落。因此統計結果一般用菌落數而不是用活菌數來表示。

③土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含細菌、酵母、芽孢與孢子等的數量均可用此法測定。但不適於測定樣品中絲狀體微生物，例如放線菌或絲狀真菌或絲狀藍細菌等的營養體等。

④此法若不培養成菌落，可通過將一定量的菌液均勻地塗布在玻片上的一定面積上，經固定染色後在顯微鏡下計數，這樣又稱塗片計數法。染色可用台盼藍，台盼藍能使死細胞染成藍色，可分別計數死細胞和活細胞。

3.濾膜法

濾膜法是當樣品中菌數很低時，可將一定體積的湖水、海水或飲用水燈樣品通過膜過濾器。然後將濾膜乾燥、染色，並經處理使膜透明，再在顯微鏡下計算膜上（或一定面積上）的細菌數。

此法也可以通過培養觀察形成的菌落數來推算樣品中的菌數。例如測定飲用水中大腸桿菌的數目：將已知體積的水過濾後，將濾膜放在伊紅美藍培養基上培養。在該培養基上大腸桿菌的菌落呈現黑色，可根據培養基上黑色菌落的數目，計算出水樣中大腸桿菌的數目。

此法也是統計樣品中活菌的數目。

4.比濁法

原理是在一定范圍內，菌是懸液中細胞濃度與混濁度成正比，即與光密度成正比，菌越多，光密度越大。因此可藉助與分光光度計，在一定波長下，測定菌懸液的光密度，以光密度表示菌量。實驗測量時一定要控制在菌濃度與光密度成正比的線性范圍內，否則不準確。

5.顯微鏡直接計數法

在課本生物選修1生物技術實踐P22中「除了上述活菌計數法外，顯微鏡直接計數也是測定微生物數量的常用方法。」這里說的顯微鏡直接計數，我認為應該是在稀釋塗布的基礎上不培養成菌落而通過染色的方法在顯微鏡下直接計數。再如濾膜法也一樣，可以有兩種情況。

另外，微生物計數法發展迅速，多種多樣的快速、簡易、自動化的儀器和裝置等方法可以用來統計微生物的數目。

㈤ 若要測定培養液中微生物的菌體數,若要測定其活菌數量,用什麼方法

（1）微生物生長繁殖所需的主要營養物質有碳源、水、氮源、無機鹽四類，培養基配製時，基本過程為計算、稱量、溶化、調pH、滅菌、倒平板五個步驟．
（2）若要測定培養液中微生物B的菌體數，可在顯微鏡下用血細胞計數板直接計數；若要測定其活菌數量，可選用稀釋塗布平板法進行計數．
（3）採用稀釋塗布平板法檢測水樣中的細菌含量，在塗布接種前，隨機取若干滅菌後的空平板先行培養一段時間，這樣做的目的是檢測培養基平板滅菌是否合格．
（4）三塊平板有兩塊平板長有菌落，說明含有菌株並可在培養基上生長；而其中一塊未見菌落，說明菌株死亡．因此，應在接種過程中接種環灼燒後未冷卻或未足夠冷卻，使菌株因溫度過高被殺死．
（5）纖維素酶是一種復合酶，一般認為它至少含有三種組分，即C ₁ 酶、C _x 酶、葡萄糖苷酶，其中葡萄糖糖苷酶可將纖維二糖分解成葡萄糖；剛果紅可以與纖維素形成紅色復合物，當纖維素被纖維素酶分解後，紅色復合物無法形成，出現以纖維素分解菌為中心的透明圈，我們可以通過是否產生透明圈來篩選纖維素分解菌．
故答案為：
（1）氮源和無機鹽先調PH，後滅菌
（2）血細胞計數板稀釋塗布平板
（3）檢測培養基平板滅菌是否合格
（4）接種環溫度過高，菌被殺死
（5）纖維二糖紅透明圈

㈥ 測定微生物的生物量有哪些主要方法

測定微生物的生物量有哪些主要方法
測定的方法主要有四種：

1.直接計數測定：根據微生物種類，有血球計數板和細菌計數板；

2.比濁法：根據菌懸液的濃度在一定范圍內與光密度成正比，可以用分光光度計測OD值，用OD值表示樣品菌液濃度；

3.核酸計數法：熒光定量PCR技術；

4.活菌計數法：MPN和平板計數法由於測定方法的限制。新鮮土樣經氯仿熏蒸後（24h），土壤微生物死亡細胞發生裂解，釋放出微生物生物量碳，用一定體積的LK2SO4溶液提取土壤，借用有機碳自動分析儀測定微生物生物量碳含量。根據熏蒸土壤與未熏蒸土壤測定有機碳的差值及轉換系數（KEC），從而計算土壤微生物生物量碳。

㈦ 微生物計數方法有哪些

測定微生物計數的方法有很多,主要有以下幾種：
1.血細胞計數法
將稀釋的菌液樣品滴在血細胞計數板上,在顯微鏡下計算4~5個中格的細菌數,並求出每個小格所含細菌的平均數,再以此為依據,估算總菌數.
①此法的缺點是不能區分死菌和活菌.
②對壓在小方格界線上的細菌,應當取平均值計數.
③此法可用於測定培養液中酵母菌種群數量的變化
2.稀釋塗布平板法
原理：每個活細菌在適宜的培養基和良好的生長條件下可以通過生長形成菌落.培養基表面生長的一個菌落,來源於樣品稀釋液中的一個活菌.
①這一方法常用來統計樣品中活菌的數目
②統計的菌落數往往比活菌的實際數目低,原因是當兩個活多個細胞連在一起時,平板上觀察到的只是一個菌落.因此統計結果一般用菌落數而不是用活菌數來表示.
③土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含細菌、酵母、芽孢與孢子等的數量均可用此法測定.但不適於測定樣品中絲狀體微生物,例如放線菌或絲狀真菌或絲狀藍細菌等的營養體等.
④此法若不培養成菌落,可通過將一定量的菌液均勻地塗布在玻片上的一定面積上,經固定染色後在顯微鏡下計數,這樣又稱塗片計數法.染色可用台盼藍,台盼藍能使死細胞染成藍色,可分別計數死細胞和活細胞.
3.濾膜法
濾膜法是當樣品中菌數很低時,可將一定體積的湖水、海水或飲用水燈樣品通過膜過濾器.然後將濾膜乾燥、染色,並經處理使膜透明,再在顯微鏡下計算膜上（或一定面積上）的細菌數.
此法也可以通過培養觀察形成的菌落數來推算樣品中的菌數.例如測定飲用水中大腸桿菌的數目：將已知體積的水過濾後,將濾膜放在伊紅美藍培養基上培養.在該培養基上大腸桿菌的菌落呈現黑色,可根據培養基上黑色菌落的數目,計算出水樣中大腸桿菌的數目.
此法也是統計樣品中活菌的數目.
4.比濁法
原理是在一定范圍內,菌是懸液中細胞濃度與混濁度成正比,即與光密度成正比,菌越多,光密度越大.因此可藉助與分光光度計,在一定波長下,測定菌懸液的光密度,以光密度表示菌量.實驗測量時一定要控制在菌濃度與光密度成正比的線性范圍內,否則不準確.
5.顯微鏡直接計數法
在課本生物選修1生物技術實踐P22中「除了上述活菌計數法外,顯微鏡直接計數也是測定微生物數量的常用方法.」這里說的顯微鏡直接計數,我認為應該是在稀釋塗布的基礎上不培養成菌落而通過染色的方法在顯微鏡下直接計數.再如濾膜法也一樣,可以有兩種情況.
另外,微生物計數法發展迅速,多種多樣的快速、簡易、自動化的儀器和裝置等方法可以用來統計微生物的數目.

㈧ 什麼是「活菌計數法」

其原理是每個活細菌在適宜的培養基和良好的生長條件下可以通過生長形成菌落.
具體操作：
將待測樣品經一系列 10 倍稀釋,然後選擇三個稀釋度的菌液,分別取 0.2ml 放入無菌平皿,再倒入適量的已熔化並冷至 45 ℃ 左右的培養基,與菌液混勻,冷卻、待凝固後,放入適宜溫度的培養箱或溫室培養,長出菌落後,計數,按下面公式計算出原菌液的含菌數：
每毫升原菌液活菌數＝同一稀釋度三個以上重復平皿
菌落平均數×稀釋倍數× 5
此法還可以將稀釋的菌液取 0.2ml 加到已制備好的平板上,然後用無菌塗棒將菌液塗布整個平板表面,放入適宜溫度下培養,計算菌落數,再按上公式計算出每毫升原菌液的所含活菌總數.
使用注意：此法可因操作不熟練造成污染,或因培養基溫度過高損傷細胞等原因造成結果不穩定.盡管如此,由於該方法能測出樣品中微量的菌數,仍是教學、科研和生產上常用的一種測定細菌數的有效方法.土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含細菌、酵母、芽抱與抱子等的數量均可用此法測定.但不適於測定樣品中絲狀體微生物,例如放線菌或絲狀真菌或絲狀藍細菌等的營養體等.

㈨ 怎樣用平板菌落計數法測定微生物活菌數

1.先將微生物製成菌懸液
2.梯度稀釋
3.塗平板
4.培養,計算菌落數,然後算出菌懸液單位體積的活菌數

㈩ 統計活菌數量的方法都有哪些

統計菌落數目的方法有直接計數法和間接計數法兩種。
1. 直接計數法
直接計數法是將稀釋的樣品滴在計數板上，蓋上蓋玻片，然後在顯微鏡下計數4〜5個中格的細菌數，並求出每個小格所含細菌的平均數，再按公式求出每 毫升樣品中所含的細菌數。計算公式 為:每毫升原液所含細菌數=每小格平 均細菌數X400X1 000X稀釋倍數。這種方法的優點是所需設備比較簡單，能迅速得到結果，而且在計數的同時還可以觀察到所研究的微生物的形態特徵； 缺點是不能區分死菌與活菌。
2. 間接計數法
在應用稀釋塗布平板法計數時，首先要將待測樣品配製成均勻的系列稀釋液，盡量使微生物細胞分散開，再把稀釋液接種到平板上，進行培養觀察。但值得注意的是，統計的菌落數往往比活菌 的實際數目低，而且統計的結果一般用 菌落數而不用活菌數來表示。計算公式為:每克樣品中的菌落數= (C+V)X M，其中，C表示某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數，V表示塗布平板時所 用的稀釋液的體積(mL)，M代表稀釋倍數。