A. 双缩脲试剂怎么使用
要
双缩脲试剂是由双缩脲试剂A(NaOH)和双缩脲试剂B(CuSO4)两种试剂组成(双缩脲试剂A的成分是氢氧化钠的质量分数为0.1 g/mL的水溶液,双缩脲试剂B的成分是硫酸铜的质量分数为0.01 g/mL的水溶液),双缩脲试剂可以验证蛋白质的存在。
具体方法是:
先将双缩脲试剂A加入组织样液,振荡均匀(必须营造碱性环境),再加入双缩脲试剂B,振荡均匀。如果组织里含有蛋白质,那么会看到溶液变成紫色。具有两个或两个以上肽键的化合物皆可与双缩脲试剂产生紫色反应。蛋白质的肽键在碱性溶液中能与Cu2+络合成紫红色的络合物。颜色深浅与蛋白质浓度成正比。
双缩脲(NH2CONHCONH2)是两个分子脲经180℃左右加热,放出一个分子氨后得到的产物。
双缩脲试剂本是用来检测双缩脲,因蛋白质中也有-CONH-基也可用于检验蛋白质,与蛋白质接触后的颜色呈紫色。
在使用双缩脲试剂时候,必须注意,必须是先加0.1 g/mL氢氧化钠溶液,再加0.01 g/mL硫酸铜的水溶液。(若先加入硫酸铜[CuSO4]溶液,再加入氢氧化钠[NaOH]溶液,则无法充分制造碱性环境,此时CuSO4会与NaOH发生复分解反应,生成蓝色氢氧化铜[Cu(OH)2]沉淀,导致现象不清,无法较好地达到实验目的.)
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B. 双缩脲试剂的使用方法
先将双缩脲试剂A加入组织样液,振荡均匀(必须营造碱性环境),再加入双缩脲试剂B,摇荡均匀。如果组织里含有蛋白质,那么会看到溶液变成紫色。具有两个或两个以上肽键的化合物皆可与双缩脲试剂产生紫色反应。蛋白质的肽键在碱性溶液中能与Cu2+络合成紫红色的化合物。颜色深浅与蛋白质浓度成正比。 双缩脲(NH2CONHCONH2)是两个分子脲经180℃左右加热,放出一个分子氨后得到的产物。 双缩脲试剂本是用来检测双缩脲,因蛋白质中也有-CONH-基也可用于检验蛋白质,与蛋白质接触后的颜色呈紫色。