1. 吸收放散试验吸收试验的方法
在进行吸收放散试验时,首先进行冷吸收步骤。以已知抗原的盐水洗涤红细胞为起始,加入待检血清,混合均匀后放入4℃冰箱中吸收1到2小时,适用于A型、B型、MN、P系统等抗原的检测。另一方面,热吸收则用于Rh系统等,将混合液置于37℃水浴箱中,通过吸收过程区分真伪凝集反应:真凝集在吸收后凝集力减弱或变为阴性,而假凝集保持不变。
放散试验的核心在于将红细胞上吸附的大量抗体释放到小量生理盐水中,形成放散液。这种溶液中的抗体具有高度特异性,能与相应的抗原结合,从而确认抗体的特性。热放散试验在ABO血型系统新生儿溶血病检测中广泛应用,尤其适用于一般实验室。然而,该方法的缺点是回收抗体效果不佳,若抗体弱,可能导致假阴性结果。具体操作流程如下:将疑似抗体包被的红细胞用生理盐水洗涤,最后压积红细胞并吸取上层盐水。在压积红细胞中加入等量生理盐水(或AB血清或6%白蛋白),置于56℃水浴箱中7到8分钟,期间需多次摇动。离心后取上清液(樱红色部分即为放散液),并与已知红细胞进行试验,根据试验要求进行下一步操作,将放散液作为抗体使用。
吸收试验(absorption test)抗原与抗体的结合是特异性的,因此具有抗体活性的血清加入相应抗原后,抗体的活性下降或消失,这种作用称为吸收试验,对一未知抗体可以用已知抗原进行吸收,吸收后抗体活性下降或消失,说明未知抗体中含有与已知抗原相对应的抗体。有时被检血清中有多种抗体,可用已知抗原分别吸收及鉴定抗体的性质。放散试验的原理是抗原与抗体的结合是可逆的,在物理条件改变时,抗体又会从抗原抗体复合物上分离下来,将抗体由抗原抗体复合物上分离下来的试验称为放散试验。
2. 鉴定Rh血型要用什么方法特别要注意什么
鉴定信哗弊方法因抗血清的性质而定,如盐水抗体用滑族盐水法,IgG抗体用聚凝胺法、抗球蛋白法或酶法等。
如一般芦陆检查为RhD阴性,应进一步确证,以排除诸如Du、DⅥ等弱D或不完全D抗原。因它们比正常D阳性红细胞抗原弱,接受正常D抗原红细胞仍有产生抗D的可能;故对受血者而言,作为RhD阴性对待最为安全。
3. 怎么查rh抗体效价
多采免疫双向扩散法
【基本原理】
*指抗原和抗体在同一凝胶内都扩散,彼此相遇后形成特异性的沉淀线。
-将抗原与抗体分别加入同一凝胶板中两个相隔一定间距的小孔内,使两者进行相互扩散,当抗原抗体浓度之比相适宜时,彼此相遇形成一白色弧状沉淀线。
*优缺点:简便,但敏感性较低,易出现假阴性结果。
免疫双向扩散法的操作步骤
*将玻璃板用水洗净后用75%乙醇冲洗,晾干后放在水平台上备用。
*将1%agar 融化后,置56℃水浴。
*在玻璃板上铺胶,约1.5mm 厚,凝固后打孔(直径 3rnm),孔间距10mm。
l 抗血清(抗体预先作系列倍比稀释即ml 抗原样品,周围孔内每孔加5m*中心孔加5 1:2、1:4、1:8、1:16、1:32等比例)。
*凝胶板置湿盒内,室温扩散24h。
*观察结果。
凝聚胺法测定孕妇血清IgG抗-A(抗-B)效价的方法待检血清与0.2 mol/L 2?硫基乙醇(2?Me)在试管内等量混合,放入37℃水浴1 h以破坏血清中的IgM抗体,吸取处理后的血清用生理盐水倍比稀释,稀释度分别为2、4、8、16、32、64、128、256、512、1 024,然后每管加入相应的3%~5%红细胞悬液,置37℃水浴30 min,观察是否凝集,不凝集者用生理盐水洗涤3次,然后加入低离子盐水介质(LIM液),混匀,滴入2滴凝聚胺,混匀后3 000 r/min离心30 s,扣摇肉眼可见明显的凝集(无凝集者须重做),再加入2滴重悬液,轻摇,观察凝集是否消失,凝集1 min内不消失者表示受检者血清中含有IgG型抗?A(抗?B)。