实验室常用的灭活菌方法

‘壹’ 微生物实验室常用的灭菌方法有哪些

常用的灭菌方法主要包括以下三种：干热灭菌；湿热灭菌；紫外灭菌
1.干热灭菌法
1.1灼烧与火焰灭菌：灼烧主要用于接种工具灭菌,在火焰上灼烧即可达灭菌目的,火焰灭菌通常用于无菌操作中试管口、玻璃瓶口、硅氟塑料塞等实验物品的灭菌,防止管口污染。
1.2干烤灭菌：利用热辐射及干热空气进行灭菌.将待检灭菌的物品如金属、玻璃、陶瓷制品包装后,在烤箱内加热至160℃,保温2h可完全灭菌.但不宜超过170℃.此外降温过速,骤冷易引起玻璃器皿炸裂.干热灭菌时装入干烤箱内的物品切勿紧密,应有空隙,利于热空气流动,过密,致使温度不均,部分物品灭菌不彻底.
2.湿热灭菌法
通过加压提高蒸汽温度,用高压蒸汽灭菌,温度高,灭菌效果最好.
注意事项：1.完全排除高压灭菌器内的冷空气.有冷空气存在时,在同一表压下所达到的温度值要低,而冷空气排出越少,温度就低得越多.在高压蒸汽灭菌时,为保证达到规定的温度,必须将冷空气完全排除.否则,虽然压力达到,而温度达不到规定的要求,灭菌就不彻底.
3.紫外线
杀菌谱广,但穿透力弱,影响因素多,杀菌效能受到一定限制.
紫外线消毒效果与紫外线强度、照射时间、温度与湿度等因素有关.紫外灯杀菌的温度以20~40℃,相对湿度40%~60%为宜.

‘贰’ 消灭细菌的方法

1、热灭菌法：热灭菌法利用高温使微生物细胞内的一切蛋白质变性，酶活性消失，致使细胞死亡。通常有干热、湿热和间歇加热灭菌等法。

2、干热灭菌：火焰灼烧法或烘箱内热空气灭菌法，把金属器械或洗净的玻璃器皿放入电热烘箱内，在150～170℃下维持1～2小时后，可达到彻底灭菌（包括细菌的芽孢）的目的。灼烧是一种最彻底的干热灭菌法，应用范围仅限于接种环、接种针的灭菌或带病原菌的材料、动物尸体的烧毁等 。

(2)实验室常用的灭活菌方法扩展阅读：

消灭细菌注意事项：

1、菜板、菜刀。菜板、菜刀是家里最脏的地方，因为每天都会用它来切不同的菜。当在切生菜时，细菌就会停留在上面，等到你再切熟食时，就会发生交叉污染，如果严重还会出现中毒现象。

2、准确计算灭菌时间，一般先预热15～2O分钟，再升压和升温，达到预定压力和温度后开始计时。

3、灭菌结束时，不可快速放气，骤然减压会导致容器爆裂和药液外溢。

4、热压灭菌法适用于耐热药物及其水溶液、外科敷料、手术器械及用具等物品的灭菌。

‘叁’ 实验室消毒灭菌方法

一、消毒技术
(一)明确消毒的主要对象 应具体分析引起感染的途径、涉及的媒介物及病原微生物的种类，有针对性地使用消毒剂。
(二)采取适当的消毒方法 根据消毒对象选择简便

一、消毒技术(一)明确消毒的主要对象应具体分析引起感染的途径、涉及的媒介物及病原微生物的种类，有针对性地使用消毒剂。(二)采取适当的消毒方法根据消毒对象选择简便、有效、不损坏物品、来源丰富、价格适中的消毒方法。医院诊疗器械按污染后可造成的危害程度和在人体接触部位不同分为三类：1. 高度危险的器材穿过皮肤、粘膜而进入无菌的组织或器官内部，或与破损的皮肤粘膜密切接触的器材，如手术器械、注射器、心脏起搏器等。必须选用高效消毒法(灭菌)。2. 中度危险的器材仅与皮肤、粘膜密切接触，而不进入无菌组织内，如内窥镜、体温计、氧气管、呼吸机及所属器械、麻醉器械等。应选用中效消毒法，杀灭除芽胞以外的各种微生物。3. 低度危险器材和物品不进入人体组织，不接触粘膜，仅直接或间接地与健康无损的皮肤接触，如果没有足够数量的病原微生物污染，一般并无危害，如口罩、衣被、药杯等，应选用低效消毒法或只作一般卫生处理。只要求去除一般细菌繁殖体和亲脂病毒。(三)控制影响消毒效果的因素 许多因素会影响消毒剂的作用，而且各种消毒剂对这些因素的敏感性差异很大。1. 微生物的种类不同类型的病原微生物对消毒剂抵抗力不同，因此，进行消毒时必须区别对待。(1)细菌繁殖体易被消毒剂消灭，一般革蓝氏阳性细菌对消毒剂较敏感，革蓝氏阴性杆菌则常有较强的抵抗力。繁殖体对热敏感，消毒方法以热力消毒为主。(2)细菌芽胞芽胞对消毒因子耐力最强，杀灭细菌芽胞最可靠的方法是热力灭菌，电离辐射和环氧乙烷熏蒸法。在化学消毒剂中，戊二醛、过氧乙酸能杀灭芽胞，但可靠性不如热力灭菌法。(3)病毒对消毒因子的耐力因种类不同而有很大差异，亲水病毒的耐力较亲脂病毒强。(4)真菌对干燥、日光、紫外线以及多数化学药物耐力较强，但不耐热(60℃1小时杀灭)。2. 微生物的数量污染的微生物数量越多需要消毒的时间就越长，剂量越大。3. 有机物的存在①有机物在微生物的表面形成保护层妨碍消毒剂与微生物的接触或延迟消毒剂的作用，以致于微生物逐渐产生对药物的适应性。②有机物和消毒剂作用，形成溶解度比原来更低或杀菌作用比原来更弱的化合物。③一部分消毒剂与有机物发生了作用，则对微生物的作用浓度降低。④有机物可中和一部分消毒剂。消毒剂中重金属类、表面活化剂等受有机物影响较大，对戊二醛影响较小。4. 温度随着温度的升高，杀菌作用增强，但温度的变化对各种消毒剂影响不同。如甲醛、戊二醛、环氧乙烷的湿度升高1倍时，杀菌效果可增加10倍。而酚类和酒精受温度影响小。5. PH值从两方面影响杀菌作用。①对消毒剂的作用：改变其溶解度和分子结构。②pH过高或过低对微生物的生长均有影响。在酸性条件下，细菌表面负电荷减少，阴离子型消毒剂杀菌效果好。在碱性条件下，细菌表面负电荷增多，有利于阳离子型消毒剂发挥作用。6. 处理剂量与监测保证消毒、灭菌处理的剂量，加强效果监测，防止再污染。

二、灭菌技术(一)高压蒸汽灭菌法的注意事项第一，无菌包不宜过大(小于50cm×30cm×30cm)，不宜过紧，各包裹间要有间隙，使蒸汽能对流易渗透到包裹中央。消毒前，打开贮槽或盒的通气孔，有利于蒸汽流通。而且排气时使蒸汽能迅速排出，以保持物品干燥。消毒灭菌完毕，关闭贮槽或盒的通气孔，以保持物品的无菌状态。第二，布类物品应放在金属类物品上，否则蒸汽遇冷凝聚成水珠，使包布受潮。阻碍蒸汽进入包裹中央，严重影响灭菌效果。第三，定期检查灭菌效果。经高压蒸汽灭菌的无菌包、无菌容器有效期以1周为宜。高压蒸汽灭菌效果的监测：有以下三种方法：第一种是工艺监测，又称程序监测。根据安装在灭菌器上的量器(压力表、温度表、计时表)、图表、指示针、报警器等，指示灭菌设备工作正常与否。此法能迅速指出灭菌器的故障，但不能确定待灭菌物品是否达到灭菌要求。此法作为常规监测方法，每次灭菌均应进行第二种是化学指示监测。利用化学指示剂在一定温度与作用时间条件下受热变色或变形的特点，以判断是否达到灭菌所需参数。

‘肆’ 常用的消毒灭菌的方法有哪些

（1）喷洒消毒将消毒药用水稀释成合适的浓度来喷洒消毒，主要用于畜禽舍、笼具、饲养场地、运输工具及排泄物，周边环境的消毒。（2）熏蒸消毒一般用甲醛和高锰酸钾混合后发生反应，产生的气体具有强烈的刺激性气味来达到消毒的目的，多用于密封舍的消毒和种蛋消毒。熏蒸消毒必须有较高的室温和相对湿度，室温不低于15℃，相对湿度为60%～80%，消毒时间为8～10小时。（3）饮水消毒将消毒剂稀释到合适的浓度，即将消毒药加入一定量的水中，让畜禽自由饮用，来消除肠道病菌。（4）浸泡消毒用于浸泡用具、器械的消毒。

‘伍’ 实验室常用的灭菌方法有干热灭菌.高压蒸汽灭菌.紫外线灭菌.过滤除菌四种各有那些优缺点

干热灭菌.高压蒸汽灭菌.紫外线灭菌.过滤除菌各有利弊。 高压蒸汽灭菌
为湿热灭菌方法的一种。是微生物培养中最重要的灭菌方法。这种灭菌方法是基于水在煮沸时所形成的蒸汽不能扩散到外面去，而聚集在密封的容器中，在密闭的情况下，随着水的煮沸，蒸汽压力升高，温度也相应增高。压力和温度之间的关系见表9－1。

高压蒸汽是最有效的灭菌法，能迅速地达到完全彻底灭菌。一般在15磅/英寸2压力下（121.6℃），15～30分钟，所有微生物包括芽孢在内都可杀死。它适用于对一般培养基和玻璃器皿的灭菌。

进行高压蒸汽灭菌的容器是高压蒸汽灭菌锅。高压蒸汽灭菌锅是一个能耐压又可以密闭的金属锅，有立式与卧式两种。

可以用电热、煤气、蒸汽等。锅上装有压力表，有的还装有温度计，能及时了解锅内压力及温度。锅上还设有排气口，其作用是在密闭之前，利用蒸汽将锅内的冷空气排净，另外还装有安全活门，如果压力超过一定限度，活门即可自动打开，放出过多的蒸汽。
干热灭菌

wei生物培养中常用的干热灭菌是指热空气灭菌。一般在电烘箱中进行。干热灭菌所需温度较湿热灭菌高，时间也较湿热灭菌长。这是因为蛋白质在干燥无水的情况下不容易凝固。一般须在160℃左右保持恒温3～4小时，方能达到灭菌的目的。

干热灭菌适用于空玻璃器皿的灭菌，凡带有橡胶的物品和培养基，都不能进行干热灭菌。
间歇灭菌

各种微生物的营养体在100℃温度下半小时即可被杀死。而其芽孢和孢子在这种条件下却不会失去生活力。间歇灭菌就是根据这一原理进行的。

间歇灭菌的方法是用100℃、30分钟杀死培养基内杂菌的营养体，然后将这种含有芽孢和孢子的培养基在温箱内或室温下放置24小时，使芽孢和孢子萌发成为营养体。这时再以100℃处理半小时，再放置24小时。如此连续灭菌3次，即可达到完全灭菌的目的。

间歇灭菌通常在流动蒸汽的灭菌锅中进行，也可用普通铝锅代替。这种灭菌方法多用于明胶、牛乳等物质的灭菌，这类物质在100℃以上的温度下处理较长时间，会被破坏，而用间歇灭菌法就既起到了杀菌作用，又使被处理的物质免遭破坏。

紫外线灭菌

紫外线杀菌力最强的是波长2650～2660Å的部分。无菌室缓冲间和接种箱常用紫外线灯作空气灭菌。无菌室和缓冲间的照射时间为20～50分钟（视房间大小而定），接种箱照射10～15分钟即可。

为了加强紫外线灭菌的效果，在照射前，可在无菌室、缓冲间或接种箱内喷洒5%石炭酸，以使空气中附着有微生物的尘埃降落，同时也可以杀死一部分微生物。无菌室的工作台的台面和椅子，可用2～3%的来苏儿擦洗。然后再照射紫外线。由于紫外线对人体有伤害作用，所以人不要直视正在照射的紫外线灯，也不要在照射情况下进行工作。

灭菌后，为了检验紫外线的灭菌效果，可以在无菌室、缓冲间或接种箱内放一套盛有培养基的培养皿，将皿盖打开5～10分钟，盖好后，放入温箱中培养。如果只有一、二个菌落，可认为灭菌效果良好。如杂菌丛生。则需延长照射时间或同时加强其它灭菌措施。

‘陆’ 实验室常用的消毒和灭菌方法

高压蒸汽灭菌法：用高温加高压灭菌,不仅可杀死一般的细菌,对细菌芽胞也有杀灭效果,是最可靠、应用最普遍的物理灭菌法.主要用于能耐高温的物品,如金属器械、玻璃、搪瓷、敷料、橡胶及一些药物的灭菌.

‘柒’ 实验室灭菌消毒怎么做更彻底

一、消毒和灭菌的区别

1、消毒（disinfection in hospital）：杀灭或消除医院环境中媒介物上污染的病原微生物的过程.

2、灭菌(sterilization)：杀灭或去除外环境中媒介物携带的一切微生物的过程.包括致病微生物和非致病微生物,也包括细菌芽胞和真菌孢子.灭菌是个绝对的概念,灭菌后物品必须是完全无菌的.即灭菌保证水平为106.

二、高温灭菌法

高温灭菌法是利用高温使微生物的蛋白质及酶发生凝固或变性而死亡，是应用最广泛且有效的灭菌方法。主要用于器械、容器、试剂等灭菌。

（一）高压蒸气灭菌法

图为加热接种环。（图片来源： 《接种、分离纯化和培养技术》）

注意事项：

1、酒精灯的灯芯要平整.

2、添加酒精时,不超过酒精灯容积的2/3；酒精不少于1/4.

3、绝对禁止向燃着的酒精灯里添加酒精,以免失火.

4、绝对禁止用酒精灯引燃另一只酒精灯.

5、用完酒精灯,必须用灯帽盖灭,不可用嘴去吹.

6、不要碰倒酒精灯,万一洒出的酒精在桌上燃烧起来,应立即用湿布扑盖.

‘捌’ 微生物的几种灭菌方法

不过由于中国的原奶质量差，所以许多企业的巴氏灭菌法都采用85-90度，甚至更高，以杀灭原奶中的大量微生物群落。这两年还出现了所谓的“超巴”灭菌的工艺

‘玖’ 微生物学实验室常用的灭菌方法有哪些

主要包括以下三种：干热灭菌；湿热灭菌；紫外灭菌
1.干热灭菌法
1.1灼烧与火焰灭菌：灼烧主要用于接种工具灭菌,在火焰上灼烧即可达灭菌目的,火焰灭菌通常用于无菌操作中试管口、玻璃瓶口、硅氟塑料塞等实验物品的灭菌,防止管口污染。
1.2干烤灭菌：利用热辐射及干热空气进行灭菌.将待检灭菌的物品如金属、玻璃、陶瓷制品包装后,在烤箱内加热至160℃,保温2h可完全灭菌.但不宜超过170℃.此外降温过速,骤冷易引起玻璃器皿炸裂.干热灭菌时装入干烤箱内的物品切勿紧密,应有空隙,利于热空气流动,过密,致使温度不均,部分物品灭菌不彻底.
2.湿热灭菌法
通过加压提高蒸汽温度,用高压蒸汽灭菌,温度高,灭菌效果最好.
注意事项：1.完全排除高压灭菌器内的冷空气.有冷空气存在时,在同一表压下所达到的温度值要低,而冷空气排出越少,温度就低得越多.在高压蒸汽灭菌时,为保证达到规定的温度,必须将冷空气完全排除.否则,虽然压力达到,而温度达不到规定的要求,灭菌就不彻底.
3.紫外线
杀菌谱广,但穿透力弱,影响因素多,杀菌效能受到一定限制.
紫外线消毒效果与紫外线强度、照射时间、温度与湿度等因素有关.紫外灯杀菌的温度以20~40℃,相对湿度40%~60%为宜.

‘拾’ 常用的消毒灭菌方法有哪些

常用的消毒灭菌方法如下：

1、煮沸灭菌：是湿热灭菌法范围，就是将洗净的物品（如毛巾、衣服、床单、用具等）放入水中直接煮沸30min或60min，可将细菌全部杀死，但不能保证杀灭所有的芽孢。

2、紫外线灭菌：一般用于灭菌的紫外线波长是2000～3000Å，灭菌力最强的是波长为2540Å的紫外线。主要用于消毒器具表面的灭菌以及净化室内空气。器具表面灭菌一般要经肥皂水洗净后再经清水洗净后擦干后在紫外线下灭菌，包好备用。

3、75%乙醇灭菌：本法是化学灭菌法之一，可用75%酒精溶液用于剪刀、手术刀、针具以及皮肤表面和物品表面等的消毒。物品表面消毒前需要了解酒精是否恢复消毒物品产生损坏。

4、氯维液体喷剂灭菌：氯维液体喷剂灭菌属于化学灭菌法。可用于器具、皮肤伤口表面、物品表面、空间等等情况的消毒。

消毒效果的检查方法

1、物品表面检查

在消毒物品相邻部位划出2个10cm2范围，消毒前后别以无菌棉签采样，接种后培养24～48小时观察结果。

2、排泄物检查

消毒前后各取0.2ml排泄物的稀释液接种肉汤管，37℃培养24小时后再取样转种相应的培养基，24～48小时后观察结果。

3、空气消毒效果检查

一般用自然沉降法。消毒前后在消毒的空间不同平面和位置。放置4～5个平面，暴露5～30分钟后盖好，培育24～48小时观察结果。

以上内容参考网络-消毒