测定多肽链的常用方法

A. 测定多肽氨基酸的最好方法

是测氨基酸的序列吧…
1.先测一下有几条链。根据N-末端/C-末端的数目和蛋白质的相对分子质量确定。
2.把多肽链拆开。
3.如果有二硫键就断开二硫键。
4.把每条肽链的序列测出来。

你所说的最好方法应该具体到每一步吧，对不同的氨基酸
要具体情况具体分析啊

B. 肽链的推断问题请大侠帮忙！！

首先，写肽链顺序时必须指出C端、N端。
测序步骤：
1.因为胰蛋白酶只断裂Lys或Arg残基的羧基参与形成的肽键，所以用它断裂多肽链得到的是以Arg和Lys为C-末端残基的肽段， 所以肯定上述C 片断 肯定是这个9肽的C端
2.而溴化氢只断裂Met残基的羧基参与形成的肽键，

根据 以上分析，得出C-末端是: Tyr
借助重叠肽原理 得出两套肽段的大致排列：

第一套：Ser-Ala-Arg Met-Glu-Lue-Lys Gly-Tyr
第二套：Ser-Ala-Arg－Met Glu-Leu-Lys-Gly-Tyr

推断此9肽的全序列为：N-Ser-Ala-Arg－Met-Glu-Leu-Lys-Gly-Tyr-C

(其实，这道题只要知道胰蛋白酶的断裂点，结合两套肽段，就可以直接的、一目了然的看出9肽的N、C末端和 全序列，不需要这么复杂的过程。不过，不知道断裂点就得用两组片断进行重叠法推测。)

C. 常用于蛋白质多肽链N端。C端测定的方法有几种基本原理是什么

(1)N-末端测定
A.二硝基氟苯法(FDNB，DNFB)：1945年Sanger提出此方法，是他的重要贡献之一。
DNP-氨基酸用有机溶剂抽提后，通过层析位置可鉴定它是何种氨基酸。Sanger用此方法测定了胰岛素的N末端分别为甘氨酸及苯丙氨酸。
B.氰酸盐法：1963年Stank及Smyth介绍了一种测定N末端的新方法，步骤如下：
由于乙内酰脲氨基酸不带电荷，因此可用离子交换层析法将它与游离氨基酸分开，分离所得的乙内酰脲氨基酸再被盐酸水解，重新生成游离的氨基酸，鉴别此氨基酸即可了解N-末端是何种氨基酸。
C.二甲基氨基萘磺酰氯法：1956年Hartley等报告了一种测定N-末端的灵敏方法，采用1-二甲基氨基萘-5-磺酰氯，简称丹磺酰氯。它与游离氨基末端作用，方法类似于Sanger的DNFB法，产物是磺酰胺衍生物。
丹磺酰链酸具有强烈的黄色荧光。此法优点为灵敏性较高(比FDNB法提高100倍，样品量小于1毫微克分子)及丹磺酰氨基酸稳定性较高(对酸水解稳定性较DNP氨基酸高)，可用纸电泳或聚酰胺薄膜层析鉴定。
(2)C-末端分析
A.肼解法：这是测定C-末端最常用的方法。将多肽溶于无水肼中，100℃下进行反应，结果羧基末端氨基酸以游离氨基酸状释放，而其余肽链部分与肼生成氨基酸肼。
这样羧基末端氨基酸可以采用抽提或离子交换层析的方法将其分出而进行分析。如果羧基末端氨基酸侧链是带有酰胺如天冬酰胺和谷氨酰胺，则肼解时不能产生游离的羧基末端氨基酸。此外肼解时注意避免任何少量的水解，以免释出的氨基酸混淆末端分析。
B.羧肽酶水解法：羧肽酶可以专一性地水解羧基末端氨基酸。根据酶解的专一性不同，可区分为羧肽酶A、B和C。应用羧肽酶测定末端时，需要事先进行酶的动力学实验，以便选择合适的酶浓度及反应时间，使释放出的氨基酸主要是C末端氨基酸。

D. 鉴定蛋白质多肽链N端的第一个氨基酸,可以用的物质有哪些

常用于蛋白质多肽链N端.C端测定的方法有几种
(1)N-末端测定 A.二硝基氟苯法(FDNB，DNFB)：1945年Sanger提出此方法，是他的重要贡献之一。DNP-氨基酸用有机溶剂抽提后，通过层析位置可鉴定它是何种氨基酸。Sanger用此方法测定了胰岛素的N?末端分别为甘氨酸及苯丙氨酸。B.氰酸盐法：1963年Stank及Smyth介绍了一种测定N?末端的新方法，步骤如下：由于乙内酰脲氨基酸不带电荷，因此可用离子交换层析法

E. 肽链测续方法

短肽的序列，你应该是指氨基酸的序列吧。
有以下几种方法：1.Edman降解法：是一种化学法对蛋白质进行测序的方法，是从多肽链游离的N末端测定氨基酸残基的序列的过程。N末端氨基酸残基被苯异硫氰酸酯修饰，然后从多肽链上切下修饰的残基，再经层析鉴定，余下的多肽链（少了一个残基）被回收再进行下一轮降解循环。

2.羧肽酶法：羧肽酶是一组外肽酶，至少包括A.B.C三种。但是由于这些酶不能给出准确的氨基酸残基顺序，所以一般很少运用。

3.氨基酸顺序的质谱分析法：这项原理是将肽主链和侧链的极性基团用些化学试剂进行修饰，然后导入质谱仪中，在质谱仪的真空装置中挥发，并在电子束的作用下碎裂，从而产生不同的阳离子。然后根据阳离子的质量与电荷之比进行鉴定。

实验到此结束，但是想要知道顺序 还要通过实验中获取的片段来重叠重构完整肽链的氨基酸顺序。

F. 常用于蛋白质多肽链N端.C端测定的方法有几种基本原理是什么

(1)N-末端测定 A.二硝基氟苯法(FDNB，DNFB)：1945年Sanger提出此方法，是他的重要贡献之一。DNP-氨基酸用有机溶剂抽提后，通过层析位置可鉴定它是何种氨基酸。Sanger用此方法测定了胰岛素的N末端分别为甘氨酸及苯丙氨酸。B.氰酸盐法：1963年Stank及Smyth介绍了一种测定N末端的新方法，步骤如下：由于乙内酰脲氨基酸不带电荷，因此可用离子交换层析法将它与游离氨基酸分开，分离所得的乙内酰脲氨基酸再被盐酸水解，重新生成游离的氨基酸，鉴别此氨基酸即可了解N-末端是何种氨基酸。C.二甲基氨基萘磺酰氯法：1956年Hartley等报告了一种测定N-末端的灵敏方法，采用1-二甲基氨基萘-5-磺酰氯，简称丹磺酰氯。它与游离氨基末端作用，方法类似于Sanger的DNFB法，产物是磺酰胺衍生物。丹磺酰链酸具有强烈的黄色荧光。此法优点为灵敏性较高(比FDNB法提高100倍，样品量小于1毫微克分子)及丹磺酰氨基酸稳定性较高(对酸水解稳定性较DNP氨基酸高)，可用纸电泳或聚酰胺薄膜层析鉴定。(2)C-末端分析A.肼解法：这是测定C-末端最常用的方法。将多肽溶于无水肼中，100℃下进行反应，结果羧基末端氨基酸以游离氨基酸状释放，而其余肽链部分与肼生成氨基酸肼。这样羧基末端氨基酸可以采用抽提或离子交换层析的方法将其分出而进行分析。如果羧基末端氨基酸侧链是带有酰胺如天冬酰胺和谷氨酰胺，则肼解时不能产生游离的羧基末端氨基酸。此外肼解时注意避免任何少量的水解，以免释出的氨基酸混淆末端分析。B.羧肽酶水解法：羧肽酶可以专一性地水解羧基末端氨基酸。根据酶解的专一性不同，可区分为羧肽酶A、B和C。应用羧肽酶测定末端时，需要事先进行酶的动力学实验，以便选择合适的酶浓度及反应时间，使释放出的氨基酸主要是C末端氨基酸。

G. 如何预测一段多肽链的氨基酸序列

如何预测一段多肽链的氨基酸序列
有两种方法，一是直接测序列法，常用Edman降解法，在弱碱性条件下多肽连N端氨基酸（阿尔发）与PITC反应，标记为苯氨基硫代甲酰蛋白质。肽链中的第一个肽键变弱，在无水酸的存在下发发生降解，第一个氨基酸（AA1）经过分子重排成为PTH-AA1结合层析技术即可确定氨基酸的性质。C端氨基酸残基分析，可用；羧基肽酶，肼解法；二是串联质谱测定多肽链氨基酸测序。

氨基酸（amino acid）：含有氨基和羧基的一类有机化合物的通称。生物功能大分子蛋白质的基本组成单位，是构成动物营养所需蛋白质的基本物质。是含有碱性氨基和酸性羧基的有机化合物。氨基连在α-碳上的为α-氨基酸。组成蛋白质的氨基酸均为α-氨基酸。

H. 如何通过末端氨基酸分析和蛋白质分子量确定多肽链数目

1
多肽链的拆分。由多条多肽链组成的蛋白质分子，必须先进行拆分。几条多肽链借助非共价键连接在一起，称为寡聚蛋白质，如，血红蛋白为四聚体，烯醇化酶为二聚体;可用8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍处理，即可分开多肽链(亚基).
2
测定蛋白质分子中多肽链的数目。通过测定末端氨基酸残基的摩尔数与蛋白质分子量之间的关系，即可确定多肽链的数目。
3
二硫键的断裂。几条多肽链通过二硫键交联在一起，可在8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍存在下，用过量的-巯基乙醇处理，使二硫键还原为巯基，然后用烷基化试剂保护生成的巯基，以防止它重新被氧化。
二硫键的切割与保护(元素后数字为下标)
a
过甲酸〔performic
acid〕
不可逆
-CH2SO3H
b、还原+氧化
不可逆
[
巯基乙醇，DTT
]
+
碘乙酸等
-S-CH2-COOH
c、亚硫酸分解〔Sulfitolysis〕
可逆
-R1-S-S-R2
+
HSO3-
R1-S-
+
R2-S-SOH3
可以通过加入盐酸胍的方法解离多肽链之间的非共价力;应用过甲酸氧化法或巯基还原法拆分多肽链间的二硫键。
巯基(-SH)的保护4
测定每条多肽链的氨基酸组成，并计算出氨基酸成分的分子比(如右图)
5
分析多肽链的N-末端和C-末端
多肽链端基氨基酸分为两类:N-端氨基酸(amino-terminal)和C-端氨基酸(Carboxyl-terminal)
。在肽链氨基酸顺序分析中，最重要的是N-端氨基酸分析法。N末端分析法(Sanger法;Edman法;DNS-Cl;酶降解法)，C末端分析法(肼解法;酶降解法;硼氢化锂法)。
6
多肽链断裂成多个肽段。可采用两种或多种不同的断裂方法将多肽样品断裂成两套或多套肽段或肽碎片，并将其分离开来。
7
测定每个肽段的氨基酸顺序
8
确定肽段在多肽链中的次序。
利用两套或多套肽段的氨基酸顺序彼此间的交错重叠，拼凑出整条多肽链的氨基酸顺序。
9
确定原多肽链中二硫键的位置
一般采用胃蛋白酶处理没有断开二硫键的多肽链，再利用双向电泳技术分离出各个肽段，用过甲酸处理后，将可能含有二硫键的肽段进行组成及顺序分析，然后同其它方法分析的肽段进行比较，确定二硫键的位置。

I. 多肽链的序列分析题怎么做

直接测序列法：常用Edman降解法，在弱碱性条件下多肽连N端氨基酸（阿尔发）与PITC反应，标记为苯氨基硫代甲酰蛋白质。

肽链中的第一个肽键变弱，在无水酸的存在下发发生降解，第一个氨基酸（AA1）经过分子重排成为PTH-AA1结合层析技术即可确定氨基酸的性质。C端氨基酸残基分析，可用；羧基肽酶，肼解法。

多肽的生物合成

同时，游离在细胞质中的转运RNA（tRNA）把它携带的特定氨基酸放在核糖体的mRNA的相应位置上，然后tRNA离开核糖体，再去搬运相应的氨基酸。

这样，在合成开始时，总是携带甲硫氨酸的tRNA先进入核糖体，接着带有第二个氨基酸的tRNA才进入，此时带甲硫氨酸的tRNA把甲硫氨酸卸下，放在mRNA的起始密码位置上，然后自己离开核糖体，甲硫氨酸的－COOH端与第二个氨基酸的-NH2形成肽键。

以上内容参考：网络-多肽链

J. 常用于蛋白质多肽链N端.C端测定的方法有几种

常用于蛋白质多肽链N端测定的方法：

1、二硝基氟苯法（FDNB法）

2、二甲基氨基萘磺酰氯法（DNS－Cl法）

3、异硫氰酸笨酯法（Edman法）

常用于蛋白质多肽链C端测定的方法

1、肼解法

2、还原法

3、羧肽酶法

(10)测定多肽链的常用方法扩展阅读：

多肽合成是一个固相合成顺序，一般从N端即氨基端向C端即羧基端合成。过去的多肽合成是在溶液中进行的称为液相合成法。

液相合成基于将单个N-α保护氨基酸反复加到生长的氨基成份上，合成一步步地进行， 通常从合成链的C端氨基酸开始，接着的单个氨基酸的连接通过用DCC，混合炭酐， 或N-carboxy酐方法实现。