哪些方法可以求得米氏常数

① 米氏方程度表达式是什么，如何求出vmax和km

米氏常数Km表示的是当酶促反应速率达到最大反应速率一半时的底物浓度。通过米氏方程：v = Vmax*[S]/(Km+[S])，我们可以计算出Vmax的值。如果将某个特定的底物浓度[S]代入方程，即可求得该浓度下的反应速率v。例如，假设已知某一底物浓度为10^-4 mol/L，代入方程后可以计算得出v的具体数值。

具体地，如果已知Vmax为134.144 μmol/(L·min)，并且代入[S] = 10^-4 mol/L，那么可以计算出v的值为5.366 μmol/(L·min)。这表明在该底物浓度下，酶促反应速率达到了最大速率的一半。

米氏方程不仅有助于我们理解酶的动力学特性，还能够帮助我们确定酶的特异性以及底物的亲和力。通过调整底物浓度，我们可以观察到酶促反应速率的变化趋势，进而确定Km的具体数值。这种研究方法对于生物化学领域的研究具有重要意义。

在实际操作中，通常需要通过实验来确定Km和Vmax的具体数值。实验设计时，需要保证底物浓度的逐步增加，并记录下不同底物浓度下的反应速率。通过拟合米氏方程，可以得到最符合实验数据的Km和Vmax值。

值得注意的是，Km和Vmax的计算结果会受到实验条件的影响，因此在进行相关研究时，需要严格控制实验条件，以确保结果的准确性和可靠性。

通过上述方法，我们可以更好地理解酶促反应的动力学特性，这对于深入研究酶的催化机制以及开发新的药物具有重要意义。

② 常见酶的米氏常数

常见酶的米氏常数：2.5。

米氏常数是酶的特征性常数，可用来表示酶和底物亲和力的大小。米氏常数与底物浓度和酶浓度无关，而受温度和pH值的影响，竞争性抑制剂米氏常数增大，最大反应速度不变；非竞争性抑制剂米氏常数不变，最大反应速度减小；反竞争性抑制剂米氏常数减小，最大反应速度减小。

Km的求法

Km即是当反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度。从v—[s]矩形双曲线上可得V，再从V/2处可求得Km值，但实际上，即使用很大的底物浓度，也只能得到趋近于V的反应速度，而达不到真正的V，因此测不到准确的Km值，为了得到准确的Km值，可以把米氏方程式加以改变，使之成为斜截式：y=kx+b的直线方程，然后用图解法求出Km值。

以上内容参考：网络-米氏常数

③ 请问米氏常数的求法。

你可以用吸光值代替反应速度，因为在一定范围内，吸光值与物质浓度成线性关系，而生成物浓度又与反应速度成正比。米氏常数的定义是反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度，而最大吸光值的一半时的底物浓度可以近似等于最大反应速度一半的底物浓度。因此你将反应速度一项换作吸光值即可

④ 【生物化学】求米氏方程式推导过程

米氏方程
v＝Vmax[S]/（Km+[S]，这个方程称为Michaelis-Menten方程，是在假定存在一个稳态反应条件下推导出来的，其中 Km 值称为米氏常数，Vmax是酶被底物饱和时的反应速度，[S]为底物浓度。由此可见Km值的物理意义为反应达到1/2Vmax的底物浓度，单位一般为mol/L，只由酶的性质决定，而与酶的浓度无关。可用Km的值鉴别不同的酶。当底物浓度非常大时，反应速度接近于一个恒定值。在曲线的这个区域，酶几乎被底物饱和，反应相对于底物S是个零级反应。就是说再增加底物对反应速度没有什么影响。反应速度逐渐趋近的恒定值称为最大反应速度Vmax。对于给定酶量的Vmax可以定义为处于饱和底物浓度的起始反应速度n。对于反应曲线的这个假一级反应区的速度方程可写成一种等价形式：
n（饱和时）＝Vmax＝k[E][S]0＝k[E]total＝k cat[ES]
速度常数k等于催化常数k cat，k cat是ES转化为游离的E和产物的速度常数。饱和时，所有的E都是以ES存在。方程（3.2）中还有另一个简单的关系式：Vmax＝k cat [E]total。从中得出：k cat＝Vmax / [E]total。k cat的单位是s－1。催化常数可以衡量一个酶促反应的快慢。
米氏常数Km是酶促反应速度n为最大酶促反应速度值一半时的底物浓度。这可通过用[S]取代米氏方程中的Km证明，通过计算可得n＝Vmax /2。
Km和Vmax的意义
①当ν=Vmax/2时，Km=[S]。因此，Km等于酶促反应速度达最大值一半时的底物浓度。
②当k-1>>k+2时，Km=k-1/k+1=Ks。因此，Km可以反映酶与底物亲和力的大小，即Km值越小，则酶与底物的亲和力越大；反之，则越小。
③Km可用于判断反应级数：当[S]<0.01Km时，ν=（Vmax/Km）[S]，反应为一级反应，即反应速度与底物浓度成正比；当[S]>100Km时，ν=Vmax，反应为零级反应，即反应速度与底物浓度无关；当0.01Km<[S]<100Km时，反应处于零级反应和一级反应之间，为混合级反应。
④Km是酶的特征性常数：在一定条件下，某种酶的Km值是恒定的，因而可以通过测定不同酶（特别是一组同工酶）的Km值，来判断是否为不同的酶。
⑤Km可用来判断酶的最适底物：当酶有几种不同的底物存在时，Km值最小者，为该酶的最适底物。
⑥Km可用来确定酶活性测定时所需的底物浓度：当[S]=10Km时，ν=91%Vmax，为最合适的测定酶活性所需的底物浓度。
⑦Vmax可用于酶的转换数的计算：当酶的总浓度和最大速度已知时，可计算出酶的转换数，即单位时间内每个酶分子催化底物转变为产物的分子数。
⑷Km和Vmax的测定：主要采用Lineweaver-Burk双倒数作图法和Hanes作图法。