液相色谱含量测定的方法有哪些

1. 如何正确的进行液相色谱法的含量检测

要得到准确可靠的HPLC定量结果你需要：
1.
有准确可靠的标准品来源和正确的配制过程。
2.
正确样品的前处理比仪器参数的设置更为重要，消除被测组分可能存在的干扰物。
3.
有合适分离度的柱子，确保被测组分可以完全分离。
4.
选择合适的流动相，采用等度洗脱还是梯度洗脱看被测组分间的分离效果。
5.
确保仪器的有良好的稳定性，否则请选择一个合适的内标物校正。液相的稳定性通常还比较好，若液相的稳定很差，表明仪器存在着严重的故障需要立即进行维修。
6.
选择合适的检测器，一般来讲选择性的检测器（如DAD,FLD,VWD）灵敏度高于通用性检测器（如RID），通用性检测器不适合测定痕量水平的组分，对不同含量水平的被测组分，选择合适的检测器非常重要。

2. HPLC法中定量分析方法大致有哪几种

气相色谱定量检测一般就两种，一个是外标法，一个是标法，对于没有标准物质的，就只能靠容面积归一法粗略定量。

通过对人类和环境有影响的各种物质的含量、排放量的检测，跟踪环境质量的变化，确定环境质量水平，为环境管理、污染治理等工作提供基础和保证。简单地说，了解环境水平，进行环境监测，是开展一切环境工作的前提。

(2)液相色谱含量测定的方法有哪些扩展阅读：

HPLC根据固定相和流动相的成分分为正相色谱和反向色谱。

正相色谱法

采用极性固定相（如聚乙二醇、氨基与腈基键合相）；流动相为相对非极性的疏水性溶剂（烷烃类如正已烷、环已烷），常加入乙醇、异丙醇、四氢呋喃、三氯甲烷等以调节组分的保留时间。常用于分离中等极性和极性较强的化合物（如酚类、胺类、羰基类及氨基酸类等）。

3. 高效液相色谱有几种定量方法其中那种是比较精确的定量方法并简述

峰面积法、峰高法、归一法、外标法。峰面积法是比较精确的定量方法

4. 高效液相色谱法测定中药含量采用的方法有哪些

遵照下面的要求选择合适的方法,HPLC法外标、内标两种,检测器一般UV即可.
含量测定分析方法验证的可接受标准简介
摘要：本文介绍了在对含量测定所用的分析方法进行方法学验证时,各项指标的可接受标准,以利于判断该分析方法的可行性.
关键词：含量测定 分析方法验证 可接收标准
在进行质量研究的过程中,一项重要的工作就是要对质量标准中所涉及到的分析方法进行方法学验证,以保证所用的分析方法确实能够用于在研药品的质量控制.为规范对各种分析方法的验证要求,我国已于2005年颁布了分析方法验证的指导原则.该指导原则对需要验证的分析方法及验证的具体指标做了比较详细的阐述.但是文中未涉及各具体指标在验证时的可接受标准,国际上已颁布的指导原则中也未发现相关的要求.另一方面,大多数药品研发单位在进行质量研究时,已逐步认识到分析方法验证的必要性与重要性,大都也在按照指导原则的要求进行分析方法验证,但验证完后却因没有一个明确的可接受标准,而难以判断该分析方法是否符合要求.本文结合国外一些大型药品研发企业在此方面的要求,提出了在对含量测定方法进行验证时的可接受标准,供国内的药品研发单位在进行研究时参考.
1．准确度
该指标主要是通过回收率来反映.验证时一般要求分别配制浓度为80％、100％和120％的供试品溶液各三份,分别测定其含量,将实测值与理论值比较,计算回收率.
可接受的标准为：各浓度下的平均回收率均应在98.0%-102.0%之间,9个回收率数据的相对标准差（RSD）应不大于2.0%.
2．线性
线性一般通过线性回归方程的形式来表示.具体的验证方法为：
在80％至120％的浓度范围内配制6份浓度不同的供试液,分别测定其主峰的面积,计算相应的含量.以含量为横坐标（X）,峰面积为纵坐标（Y）,进行线性回归分析.
可接受的标准为：回归线的相关系数（R）不得小于0.998,Y轴截距应在100％响应值的2％以内,响应因子的相对标准差应不大于2.0%.
3．精密度
1）重复性
配制6份相同浓度的供试品溶液,由一个分析人员在尽可能相同的条件下进行测试,所得6份供试液含量的相对标准差应不大于2.0%.
2）中间精密度
配制6份相同浓度的供试品溶液,分别由两个分析人员使用不同的仪器与试剂进行测试,所得12个含量数据的相对标准差应不大于2.0%.
4．专属性
可接受的标准为：空白对照应无干扰,主成分与各有关物质应能完全分离,分离度不得小于2.0.以二极管阵列检测器进行纯度分析时,主峰的纯度因子应大于980.
5．检测限
主峰与噪音峰信号的强度比应不得小于3.
6．定量限
主峰与噪音峰信号的强度比应不得小于10.另外,配制6份最低定量限浓度的溶液,所测6份溶液主峰的保留时间的相对标准差应不大于2.0%.
7．耐用性
分别考察流动相比例变化±5％、流动相pH值变化±0.2、柱温变化±5℃、流速相对值变化±20％时,仪器色谱行为的变化,每个条件下各测试两次.可接受的标准为：主峰的拖尾因子不得大于2.0,主峰与杂质峰必须达到基线分离；各条件下的含量数据（n=6）的相对标准差应不大于2.0%.
8、系统适应性
配制6份相同浓度的供试品溶液进行分析,主峰峰面积的相对标准差应不大于2.0%,主峰保留时间的相对标准差应不大于1.0%.另外,主峰的拖尾因子不得大于2.0,主峰与杂质峰必须达到基线分离,主峰的理论塔板数应符合质量标准的规定.
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5. 高效液相色谱法中定性和定量依据是什么在HPLC中的定量方法有哪些

定性是依据保留时间
定量是依据峰面积和样品量的线性关系
定量方法常用的有：面积归一化法，外标法，内标法

6. 在色谱分析中，还有哪些定量分析方法

气相色谱分析严格来讲是一种定量分析方法，如果不配置质谱仪等专用定性的仪器联胜，其本身并不能真正定性，因为气相色谱、液相色谱等色谱法本身的原理只是通过色谱柱将待测物质组份进行分离后再通过检测器进行检测，而且常用的fid,tcd,ecd,fpd等检测器本身并不能定性，只能进行相对定量检测计算；
之所以说气相色谱可以定性，那是是一种对照判断式定性，就是将通过在相同的色谱分析条件下在相同时间段内出现的峰认定为同一种物质。这种认定一般对已经物质的定性是准确的，但对未知物质和同分异构体是无法分别的；
气相色谱仪分析根据定量对照计算方法的不同分为：归一法，校正归一法，内标法，外标法等常用方法。
归一法：就是将所有峰数据的总数归一，根据各组份的峰面积在总面积中所占比例计算各组份的百分比，由于事实上检测器对不同的物质的响应因子并不相同，导致峰面积比在事实上并不能代表真实组份含量比，因此这是一种粗略的相对测控法，并不准确。常被用于工厂对已知组份生产过程的控制粗测，此时并不需要准确知道具体含量值，只需要知道比例范围是否发生变化。

7. 高效液相色谱法测定药物含量，有哪些定量方法

常用外标法，也有用内标法的。若没有对照品，也有用面积归一化法的。不过比较粗糙。

8. 高效液相色谱含量测定中分析方法认证的主要内容

含量方法学认证主要考察以下几个性质：

1.专属性：查看被测物质与被测结果间是否正确且唯一对应。

考察方法：将处被测成分外的其他物质均做空白干扰对照，包括流动相、辅料空白、溶剂空白、其他成分（多组分产品）空白、如果方法有衍生还应包括衍生空白等等。

2.精密度：查看方法多次测定是否能够得到相同的结果。

考察方法：重复性试验，应包括仪器精密度（对照多次进样查看偏差），方法精密度（多次测定同一样品查看结果，该测定应包含全部试验过程，即配制多个供试品溶液），中间精密度（不同人员不同时间不同仪器，最好试剂和实验室也更换，测定同一样品，查看结果偏差）。RSD应小于2%

3.准确度：测得结果与实际量间是否一致。

考察方法：通过回收率试验来确定，应包含3个浓度至少9个样品的测定结果，测定时应采取对照品（或原料）加辅料等其他干扰，计算回收率和结果偏差。视方法而定一般回收率应在95~105%，RSD小于2%

4.线性：在线性范围内，测得峰面积与被测物质的量是否能够呈线性关系。

考察方法：线性试验，应取至少5个浓度点，绘制标准曲线，计算线性相关系数，液相色谱法中一般认为R=0.9999以上才能算呈线性。

5.定量限：当物质达到定量限浓度以上时，该方法可以对该物质进行定量检测。

考察方法：当被测物峰高：信号噪音=10:1时，当前浓度即为定量限。如果想做更加可靠的实验，应在定量限处考察精密度和回收率。

6.耐用性：方法对实验环境的耐受程度。即当实验条件发生细微变化时，方法仍然能够保持测定的准确。

考察方法：通过几项实验来确定：溶液稳定性（相同溶液在几小时内多次进样查看结果），色谱条件变化（应包括柱温、流速、色谱柱批次、检测波长等条件的轻微变化）。

9. 个液相色谱分析方法的步骤有哪些

考察方法：当物质达到定量限浓度以上时：在线性范围内：通过回收率试验来确定：测得结果与实际量间是否一致：信号噪音=10：查看方法多次测定是否能够得到相同的结果。考察方法，方法仍然能够保持测定的准确，包括流动相、辅料空白含量方法学认证主要考察以下几个性质:1时： 1专属性：当被测物峰高，方法精密度（多次测定同一样品查看结果。考察方法，测定同一样品，测得峰面积与被测物质的量是否能够呈线性关系：查看被测物质与被测结果间是否正确且唯一对应：重复性试验：将处被测成分外的其他物质均做空白干扰对照：方法对实验环境的耐受程度，最好试剂和实验室也更换，当前浓度即为定量限，计算回收率和结果偏差，中间精密度（不同人员不同时间不同仪器、色谱柱批次、溶剂空白、其他成分（多组分产品）空白.9999以上才能算呈线性、流速。即当实验条件发生细微变化时，即配制多个供试品溶液），绘制标准曲线，该方法可以对该物质进行定量检测，色谱条件变化（应包括柱温。考察方法，测定时应采取对照品（或原料）加辅料等其他干扰，应包括仪器精密度（对照多次进样查看偏差）。RSD应小于2% 3准确度：线性试验、检测波长等条件的轻微变化），应包含3个浓度至少9个样品的测定结果。 6耐用性、如果方法有衍生还应包括衍生空白等等。 2精密度。如果想做更加可靠的实验，查看结果偏差）。 5定量限，应取至少5个浓度点。考察方法，液相色谱法中一般认为R=0：溶液稳定性（相同溶液在几小时内多次进样查看结果），RSD小于2% 4线性。视方法而定一般回收率应在95~105%。考察方法：通过几项实验来确定，计算线性相关系数，应在定量限处考察精密度和回收率，该测定应包含全部试验过程

10. 气相和液相色谱定量分析的方法有哪些

内标法，外标法，标准加入法，面积归一化法，面积校正归一化法