蛋白质检测实验方法

① 检验蛋白质的方法及现象

在碱性溶液中，双缩脲试剂能与蛋白质反应，形成红褐色络合物，颜色深浅与蛋白质浓度成正比．因此，检验蛋白质可用滴加双缩脲变成红褐色的方法，出现的现象是红褐色．
故选B

② 蛋白质检验实验步骤,要具体,清楚的,只要蛋白质

1.先取样本液体用试管装着
2.配置好A液和B液
3.先加入A液,再加入B液
4.如果溶液变紫色,则含有蛋白质

③ 高中生物必修一检测蛋白质的实验

folin—酚试剂法。

此法的显色原理与双缩脲方法是相同的，只是加入了第二种试剂，即folin-酚试剂，以增加显色量，从而提高了检测蛋白质的灵敏度。这两种显色反应产生深兰色的原因是在碱性条件下，蛋白质中的肽键与铜结合生成复合物。

folin-酚试剂中的磷钼酸盐-磷钨酸盐被蛋白质中的酪氨酸和苯丙氨酸残基还原，产生深兰色（钼兰和钨兰的混合物）。在一定的条件下，兰色深度与蛋白的量成正比。

(3)蛋白质检测实验方法扩展阅读：

注意事项：

样品应是均匀的，若是固体样品应事先研细过筛，液体样要混合均匀。

样品放入凯氏烧瓶时，不要黏附瓶颈上，万一黏附可用少量水缓慢冲下，以免被检样消化不完全，使结果偏低。

如果称1g以上的样品，就需要K氏烧瓶最小500ml，800~1000ml的更好，这样的K氏烧瓶对于缩短氨化时间，加热的均匀性和完全氨化效果最好。

向蒸馏瓶中加入浓碱时，往往出现褐色沉淀。这时由于分解促进剂与加入的硫酸铜反应，生成氢氧化铜，经加热后又分解生成氧化铜的沉淀，有时Cu离子与氨作用生成深兰色的络合物。

④ 蛋白质的制备及含量的测定实验方法是什么

制备：一般用硫酸铵沉淀法粗提，然后用事宜的柱子进一步分离纯化。
测定：一般的会用传统的方法如：凯氏定氮法，还有一些显色法如双缩尿法等

⑤ “蛋白质的鉴定”实验怎么做

鉴定蛋白质有多种方法
1，在待测液中加入双缩脲试剂并水浴加热有紫色物质生成
2，在待测液中加入稀硝酸并加热变为淡黄色3，若为固体，则放到酒精灯上加热，可以闻到烧焦的羽毛气味

⑥ 如何用实验方法来鉴定蛋白质的存在

如果目前分离蛋白质组的最好技术是2-DE，那么随之而来的挑战是数百数千个蛋白如何被鉴定. 在这里，我们不考虑传统的蛋白鉴定方法，如免疫印迹法、内肽的化学测序、已知或未知蛋白的comigration分析，或者在一个有机体中有意义的基因的过表达. 并不是因为这些方法无效，而是因为它们通常耗时、耗力，不适合高流通量的筛选. 目前，所选用的技术包括对于蛋白鉴定的图象分析、微量测序；进一步对肽片段进行鉴定的氨基酸组分分析和与质谱相关的技术. (1) 图象分析技术(Image analysis). “满天星”式的2-DE图谱分析不能依靠本能的直觉，每一个图象上斑点的上调、下调及出现、消失，都可能在生理和病理状态下产生，必须依靠计算机为基础的数据处理，进行定量分析. 在一系列高质量的2-DE凝胶产生(低背景染色，高度的重复性)的前提下，图象分析包括斑点检测、背景消减、斑点配比和数据库构建. 首先，采集图象通常所用的系统是电荷耦合CCD(charge coupled device)照相机；激光密度仪(laser densitometers)和Phospho或Fluoro imagers，对图象进行数字化. 并成为以象素(pixels)为基础的空间和网格. 其次，在图象灰度水平上过滤和变形，进行图象加工，以进行斑点检测. 利用Laplacian，Gaussian，DOG(difference of Gaussians) opreator使有意义的区域与背景分离，精确限定斑点的强度、面积、周长和方向. 图象分析检测的斑点须与肉眼观测的斑点一致. 在这一原则下，多数系统以控制斑点的重心或最高峰来分析，边缘检测的软件可精确描述斑点外观，并进行边缘检测和邻近分析，以增加精确度. 通过阈值分析、边缘检测、销蚀和扩大斑点检测的基本工具还可恢复共迁移的斑点边界. 以PC机为基础的软件Phoretix-2D正挑战古老的Unix为基础的2-D分析软件包. 第三，一旦2-DE图象上的斑点被检测，许多图象需要分析比较、增加、消减或均值化. 由于在2-DE中出现100%的重复性是很困难的，由此凝胶间的蛋白质的配比对于图象分析系统是一个挑战. IPG技术的出现已使斑点配比变得容易. 因此，较大程度的相似性可通过斑点配比向量算法在长度和平行度观测. 用来配比的着名软件系统包括Quest，Lips，Hermes，Gemini等，计算机方法如相似性、聚类分析、等级分类和主要因素分析已被采用，而神经网络、子波变换和实用分析在未来可被采用. 配比通常由一个人操作，其手工设定大约50个突出的斑点作为“路标”，进行交叉配比. 之后，扩展至整个胶. 例如：精确的PI和MW(分子量)的估计通过参考图上20个或更多的已知蛋白所组成的标准曲线来计算未知蛋白的PI和MW. 在凝胶图象分析系统依据已知蛋白质的pI值产生PI网络，使得凝胶上其它蛋白的PI按此分配. 所估计的精确度大大依赖于所建网格的结构及标本的类型. 已知的未被修饰的大蛋白应该作为标志，变性的修饰的蛋白的PI估计约在±0.25个单位. 同理，已知蛋白的理论分子量可以从数据库中计算，利用产生的表观分子量的网格来估计蛋白的分子量. 未被修饰的小蛋白的错误率大约30%，而翻译后蛋白的出入更大. 故需联合其他的技术完成鉴定. (2) 微量测序(microsequencing). 蛋白质的微量测序已成为蛋白质分析和鉴定的基石，可以提供足够的信息. 尽管氨基酸组分分析和肽质指纹谱(PMF)可鉴定由2-DE分离的蛋白，但最普通的N-末端Edman降解仍然是进行鉴定的主要技术. 目前已实现蛋白质微量测序的自动化. 首先使经凝胶分离的蛋白质直接印迹在PVDF膜或玻璃纤维膜上，染色、切割，然后直接置于测序仪中，可用于subpicomole水平的蛋白质的鉴定. 但有几点需注意：Edman降解很缓慢，序列以每40 min 1个氨基酸的速率产生；与质谱相比，Edman降解消耗大；试剂昂贵，每个氨基酸花费3～4$. 这都说明泛化的Edman降解蛋白质不适合分析成百上千的蛋白质. 然而，如果在一个凝胶上仅有几个有意义的蛋白质，或者如果其他技术无法测定而克隆其基因是必需的，则需要进行泛化的Edman降解测序.

⑦ 检测蛋白质表达量的实验方法有哪些，western-blotting的原理，方法

蛋白质印迹（免疫印迹试验）即Western Blot物、物化免疫遗传用种实验其基本原理通特异性抗体凝胶电泳处理细胞或物组织品进行着色通析着色位置着色深度获特定蛋白质所析细胞或组织表达情况信息
蛋白质印迹由瑞士米歇尔弗雷德希物研究所（Friedrich Miescher Institute）Harry Towbin1979提尼尔·伯奈特（Neal Burnette）于1981所着《析物化》（Analytical Biochemistry）首称Western Blot蛋白免疫印迹（Western Blot）电泳离细胞或组织总蛋白质凝胶转移固相支持物NC膜或PVDF膜用特异性抗体检测某特定抗原种蛋白质检测技术现已广泛应用于基蛋白水平表达研究、抗体性检测疾病早期诊断等面

⑧ 蛋白质的定性测定方法

蛋白质定性方法茚三酮反应
1.范围

本方法采用茚三酮试剂与蛋白质中a-氨基酸反应生成蓝紫色化合物最大吸收值的波长为570nm
本方法适用于各类蛋白质测定范围0.5 g 50 g 蛋白质

2.原理

茚三酮是使氨基酸和多肽显色的重要试剂当茚三酮在弱酸性条件下和-氨基酸反应时氨基酸被氧化分解生成醛放出NH3 和C02 水合茚三酮则变成还原型茚三酮然后还原型茚三酮与NH3 及另一分子茚三酮进一步缩合生成蓝紫色化合物最大吸收值的波长为570nm此反应为一切a-氨基酸所共有反应灵敏因而本法是氨基酸定量测定应用最广泛的方法之一脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应生成黄色化合物最大吸收值的波长在44Onm 多肽和蛋白质虽然具有茚三酮反应但肽链越大灵敏度也越来越差故不宜作定量测定之用在多肽合成中常用来检验有无自由氨基的肽类存在

3 .试剂

茚三酮无水乙醇95%乙醇甘氨酸

4.试样制备

4.1 蛋白质溶液箱保存备用
4.2 1mg mL-1的茚三酮乙醇溶液,0.1g 茚三酮溶于100mL 95%乙醇新鲜配置
4.3 5mg mL-1的甘氨酸溶液

5.参考文献

1.陈曾燮刘兢罗丹 编.生物化学实验.合肥中国科学技术大学出版社1994.1-6
2.李建武等 合编.生物化学实验原理和方法.北京北京大学出版社1994.150-174
3.宁正祥 编.食品成分分析手册.北京中国轻工业出版社1998.62-80

⑨ 蛋白质鉴定实验

实验一 生物组织中脂肪,蛋白质的鉴定
一,实验原理
(1)鉴定实验设计的理念:
某些化学试剂 + 生物组织中有关有机化合物 产生特定的颜色反应.
(2)具体原理:
1、脂肪小颗粒 + 苏丹Ⅲ染液→橘黄色小颗粒.
2、蛋白质 + 双缩脲试剂→紫色反应.
二,目标要求
初步掌握鉴定生物组织中脂肪,蛋白质的基本方法.
三,重点,难点
1.重点
①初步掌握鉴定生物组织中脂肪,蛋白质的基本方法.
②通过实验的操作和设计培养学生的动手能力,掌握探索实验设计技巧,从而培养创新思维能力.
2.难点
根据此实验方法,原理,设计实验来鉴定常见食物的成分.
四,实验材料
1.脂肪的鉴定实验:选择富含脂肪的种子,以花生种子为最好(实验前浸泡3h～4h).
2.蛋白质的鉴定实验:可用浸泡1d～2d的黄豆种子(或用豆浆,或用鸡蛋蛋白).
五,仪器,试剂
1.仪器:剪刀,解剖刀,双面刀片,试管,试管架,试管夹,大小烧杯,小量筒,滴管,玻璃漏斗,酒精灯,三脚架,石棉网,火柴,研钵,石英砂,纱布,载玻片,盖玻片,毛笔,吸水纸,显微镜.
2.试剂：1苏丹Ⅲ染液;2双缩脲试剂;3 体积分数为50%的酒精溶液;4蒸馏水.
六,方法步骤
（1）脂肪的鉴定
脂肪的鉴定步骤:
取材:花生种子(浸泡3-4h),将子叶削成薄...实验一 生物组织中脂肪,蛋白质的鉴定
一,实验原理
(1)鉴定实验设计的理念:
某些化学试剂 + 生物组织中有关有机化合物 产生特定的颜色反应.
(2)具体原理:
1、脂肪小颗粒 + 苏丹Ⅲ染液→橘黄色小颗粒.
2、蛋白质 + 双缩脲试剂→紫色反应.
二,目标要求
初步掌握鉴定生物组织中脂肪,蛋白质的基本方法.
三,重点,难点
1.重点
①初步掌握鉴定生物组织中脂肪,蛋白质的基本方法.
②通过实验的操作和设计培养学生的动手能力,掌握探索实验设计技巧,从而培养创新思维能力.
2.难点
根据此实验方法,原理,设计实验来鉴定常见食物的成分.
四,实验材料
1.脂肪的鉴定实验:选择富含脂肪的种子,以花生种子为最好(实验前浸泡3h～4h).
2.蛋白质的鉴定实验:可用浸泡1d～2d的黄豆种子(或用豆浆,或用鸡蛋蛋白).
五,仪器,试剂
1.仪器:剪刀,解剖刀,双面刀片,试管,试管架,试管夹,大小烧杯,小量筒,滴管,玻璃漏斗,酒精灯,三脚架,石棉网,火柴,研钵,石英砂,纱布,载玻片,盖玻片,毛笔,吸水纸,显微镜.
2.试剂：1苏丹Ⅲ染液;2双缩脲试剂;3 体积分数为50%的酒精溶液;4蒸馏水.
六,方法步骤
（1）脂肪的鉴定
脂肪的鉴定步骤:
取材:花生种子(浸泡3-4h),将子叶削成薄片
取理想薄片
在薄片上滴2-3滴苏丹Ⅲ染液
去浮色
制成临时装片
观察:先在低倍镜下,找到材料的脂肪滴,然后,转为高倍镜观察.
结论:细胞中的圆形脂肪小颗粒已经被染成橘黄色.
实验成功的要点:
①.脂肪的鉴定实验:选择富含脂肪的种子,以花生种子为最好(实验前浸泡3h～4h).
②该试验成功的关键是获得只含有单层细胞理想薄片.
③滴苏丹Ⅲ染液染液染色2-3min,时间不宜过长,以防细胞的其他部分被染色.
（2）蛋白质的鉴定
蛋白质的鉴定步骤:
选材:卵清稀释液或黄豆(浸泡1-2d) 豆浆 滤液

结论:蛋白质与双缩脲试剂发生紫色反应.
2,实验成功的要点:
①蛋白质的鉴定实验:可用浸泡1d～2d的黄豆种子(或用豆浆,或用鸡蛋蛋白稀释液).
②双缩脲试剂的使用,一定要先加入A液(即0.1 g/ml的 NaOH 溶液),再加入双缩脲试剂B液(即0.01 g/ml的 CuSO4 溶液).
③还可设计一只加底物的试管,不加双缩脲试剂,进行空白对照,说明颜色反应的引起是蛋白质的存在与双缩脲试剂发生反应,而不是空气的氧化引起.