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电泳检测方法

发布时间:2022-01-07 14:11:36

① DNA凝胶电泳检测原理及方法是什么里面的试剂和其浓度各是多少

原理:1.琼脂糖或者丙烯酰胺凝胶的分子筛作用
2.DNA分子结合SDS后在电场的作用下向正极移动
3.DNA分子的大小和形状的区别会在凝胶中区分出来,大的跑的慢,线性比环形跑的慢
电泳缓冲液TAE或者TBE:
1、0.04mol/L Tris-乙酸 0.001mol/L EDTA pH=8.5
2、Tris-硼酸(TBE)0.045mol/L Tris-硼酸 0.001mol/L EDTA pH=8.3

如何检测电泳漆

电泳漆可以检测很多项目的。
1、原漆检测:固体份、电导率、灰份、pH值、外观、黏度、比重等。
2、工作液检测:固体份、电导率、pH值、P/B比、溶剂量、MEQ、泳透力等。
3、涂膜检测:外观、光泽度、硬度、膜厚、附着力、柔韧性、耐蚀性、耐化学性等。

③ 用琼脂糖凝胶电泳怎么检测DNA质量 什么是标准

DNA如果降解或者混有其他杂质比如蛋白质、RNA的话,在电泳中可以检测的到.
线性的单一DNA样品一般是单条带,质粒的话可能会有2-3条带.
如果条带变宽、变暗、或者变成弥散的DNA条带,表示DNA非特异的降解.‘
如果条带变成多条,表示可能被酶切.如果质粒被单酶切,可能变成一条亮带.
如果有蛋白质污染,上样孔可能发亮.如果有RNA污染,可能小分子量部分会有弥散.
等等.
标准是电泳条带亮度.通过亮度可以粗略计算DNA条带的含量.如果DNA有损失,对应的条带会变暗或者消失

④ 琼脂糖凝胶电泳怎么检测DNA质量什么是标准

如果DNA出现降解或者是混有其他杂质,例如蛋白质、RNA的话,那么琼脂糖凝胶就能够检测得到DNA的质量。

标准主要是通过观察电泳条带的亮度,通过亮度就可以粗略地计算出DNA条带的含量。如果DNA出现损失,对应的条带就会变暗或者是消失。

⑤ 电泳的结果检测

对于不同的目的,应采用不同的检测方法。用染料和生物大分子结合形成有色的复合物是电泳后检测最常用的方法.
(七)聚丙烯酰胺凝胶电泳结果不正常现象和对策
1.指示剂前沿呈现两边向上或向下的现象。向上的“微笑”现象说明凝胶的不均匀冷却,中间部分冷却不好,所以导致凝胶中分子有不同的迁移率所致。这种情况在用较厚的凝胶以及垂直电泳中时常发生。向下的“皱眉”现象常常是由于垂直电泳时电泳槽的装置不合适引起的,特别是当凝胶和玻璃板组成的“三明治”底部有气泡或靠近隔片的凝胶聚合不完全便会产生这种现象。
2.“拖尾”现象是电泳中最常见的现象。这常常是由于样品溶解不佳引起的,克服的办法是在加样前离心,选用合适的样品缓冲液和凝胶缓冲液,加增溶辅助试剂。另一方法是降低凝胶浓度。
3.“纹理”现象常常是由于样品中不溶颗粒引起的,克服办法是增加溶解度和离心除去不溶性颗粒。
4.蛋白带偏斜常常是由于滤纸条或电极放置不平行所引起的,或由于加样位置偏斜而引起。
5.蛋白带过宽,与邻近蛋白泳道的蛋白带相连,这是由于加样量太多或加样孔泄漏引起的。
6.蛋白带模糊不清和分辨不佳是由于多种原因引起的。虽然梯度凝胶可以提高分辨率,但与其他方法相比,常规聚丙烯酰胺凝胶电泳是分辨率较低的方法。为了提高分辨率,不要加过多的样品,小体积样品可给出窄带。加样后应立即电泳,以防止扩散。选择合适的凝胶浓度,使组分得以充分的分离。通常靠近前沿的蛋白带分辨率不佳,所以应根据分子量与凝胶孔径的关系,灌制足够长度的凝胶,以使样品不会走出前沿。样品的蛋白水解作用也引起扩散而使分辨率降低。水解作用通常发生在样品准备的时候,系统中的内源性蛋白酶会水解样品蛋白,如果在缓冲液中加蛋白酶抑制剂可以减少这种情况的发生。

⑥ 常见的电泳方法

实验室中常见的电泳方法有以下几种:
一、纸电泳
指用滤纸作为支持载体的电泳方法。是最早使用的区带电泳。
将滤纸条水平地架设在两个装有缓冲溶液的容器之间,样品点于滤纸中央。当滤纸条被缓冲液润湿后,再盖上绝缘密封罩,即可由电泳电源输入直流电压(100V~1000V)进行电泳。
二、醋酸纤维素薄膜电泳
电泳时经过膜的预处理、加样、电泳、染色、脱色与透明即可得到满意的分离效果。此电泳的特点是分离速度快、电泳时间短、样品用量少。因此特别适合于病理情况下微量异常蛋白的检测。
三、凝胶电泳
由区带电泳中派生出的一种用凝胶物质作支持物进行电泳的方式。
凝胶电泳中的琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳是普通电泳中应用最多的两种形式。
目前,这种办法被广泛用来分析蛋白质和核酸。
四、等电聚焦电泳
1.等电聚焦电泳过程
一种利用有pH值梯度的介质,分离等电点不同的蛋白质的电泳技术。
在一个稳定连续的线性pH梯度的溶液(两性载体电解质)中进行分离,每一种被分离的两性物质都移向与它的等电点相一致的pH位置,在那里不再移动(称为聚焦)。
2.等电聚焦电泳的特点
使用两性载体电解质,在电极之间形成稳定、连续、线性的pH梯度;
由于“聚焦效应”,即使很小的样品也能获得清晰、鲜明的区带界面;
电泳速度快;分辨率高;
加入样品的位置可任意选择;
可用于测定蛋白质类物质的等电点;
适用于中、大分子量(如蛋白质、肽类、同工酶等)生物组分的分离分析。
五、等速电泳
采用两种不同浓度的电解质,一种为前导电解质,充满整个毛细管柱;另一种为尾随电解质,置于一端的电泳槽中。前导电解质的迁移率高于任何样品组分,尾随电解质则低于任何样品组分,被分离的组分按其不同的迁移率夹在中间,在强电场的作用下,各被分离组分在前导电解质与尾随电解质之间的空隙中移动,实现分离。
六、双向凝胶电泳(二维电泳)
第一向采用等电聚焦 根据复杂的蛋白质成分中各个蛋白质的PI的不同,将蛋白质进行分离。
第二向采用了十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE)就是按蛋白质分子量的大小使其在垂直方向进行分离。其结果不再是条带状,而是呈现为斑点状。
七、免疫电泳
免疫电泳是琼脂平板电泳和双相免疫扩散两种方法的结合。将抗原样品在琼脂平板上先进行电泳,使其中的各种成分因电泳迁移率的不同而彼此分开;然后加入抗体做双相免疫扩散,把已分离的各抗原成分与抗体在琼脂中扩散而相遇,在二者比例适当的地方,形成肉眼可见的沉淀弧。

⑦ 常用的蛋白质电泳方法有哪些

聚丙烯酰胺凝胶电泳:这是一种活性电泳,可以分析混合样品,并且可用特异检测手段检测目标物条带。
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳:最常用的变性电泳,可以用来测定蛋白质分子量。比层析法测定要好。

⑧ 电泳的表面附着力如何检测

电泳的表面附着力如何检测?
(1)在电泳的表面用双面刀划出一块25MM*25MM的方格,在方格内用双面刀竖横每隔1MM划一条线,总共625格,刻划时要划被漆面但不划伤材料为宜。
(2)放入盐雾试验箱(根据不同工艺制定时间,一般24小时,36小时,48小时)

⑨ 您好,我想知道怎么检测电泳槽里的固体份,有什么仪器直接检测或者有什么具体的方法吗

一.电泳漆固体份检测方法的相关标准:
1.国家标准GB6751-86《色漆和清漆,挥发物和不挥发物的测定》
2.国家标准GB1725-2007《色漆、清漆和塑料 不挥发物含量的测定》
二.实验主要测量仪器
手持式糖量仪(0—32%),恒温烘箱(0—250℃) ,电子天平(精度0.001)
三.实验材料
丙烯酸型树脂
三.实验检测方法
方法一:根据GB6751-86《色漆和清漆,挥发物和不挥发物的测定》进行测定,在105±2℃的烘箱内,保持3h,通过称量计算槽液的固体份含量。
方法二:在120±2℃的烘箱内,保持1h, 通过称量计算槽液的固体份含量.
方法三:在150±2℃的烘箱内,保持1h, 通过称量计算槽液的固体份含量.
方法四:采用糖量仪进行检测
注明:方法一、方法二、方法三具体称量方法和计算公式参见GB6751-86《色漆和清漆,挥发物和不挥发物的测定》和GB1725-2007《色漆、清漆和塑料 不挥发物含量的测定》,每次称量精确到0.001g,两次平行试验误差不超过1%

⑩ 用电泳法怎样鉴定DNA

琼脂糖凝胶电泳可以通过限制性酶切多态性(RFLP)或者扩增片断多态性(AFLP)来鉴定检测的DNA。就是不同DNA被特定的限制性内切酶切出来的片断大小是不一样的,在琼脂糖凝胶电泳跑出来的条带也不一样,如果是相同的DNA,结果就一样。

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